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NR1亚基C末端剪接异构体对NMDA受体功能的调节

作　者: 肖怡昕
导　师: 李胜天
学　校: 上海交通大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 长时程增强 NMDA受体 EPSC NR1亚基剪接异构体 CDI
分类号: R341
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 7次
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内容摘要

NMDA受体广泛表达于中枢神经系统,介导突触可塑性的形成,调控神经元的基因表达,参与发育过程中神经网络的形成。它是大脑学习与记忆功能的关键因子,同时过度激活也可导致神经元坏死和细胞凋亡等神经损害。NR1是功能性NMDA受体的必需亚基,其C末端由于2个外显子的可变剪接而具有分子生物学多样性,在很大程度上决定了NMDA受体复杂多样的功能。多年来很多研究都提示NR1亚基C末端对受体通道功能的调控,靶向运输及基因表达等方面起着重要的作用,但其具体的功能及其机制还未完全阐明。而且这些研究大多是针对在异源系统或体外培养的神经细胞中表达的重组受体进行的,而重组受体一般会失去生理状态下细胞内环境中很多信号分子或结构蛋白的作用,而且这种方法使得我们无法对其在突触可塑性中的作用进行研究。因此,有必要构建一种C末端特定区段缺失的转基因动物模型,从而在能够较好模拟在体环境的条件中进行C末端剪接异构体的功能研究。本研究中,我们利用合作研究单位构建的NR1亚基C末端C1、C2两个外显子被敲除的NR1dC1,C2小鼠,在海马切片中进行了NMDA受体通道性质的系统的检测。我们的研究结果显示NR1dC1,C2小鼠其NMDA受体电流在强刺激、高频刺激、或者双刺激的条件下反应性减弱,LTP的形成受到抑制。由此我们推测在海马CA1神经元内NR1亚基的C1和/或C2参与CDI的调控,而C1和C2的缺失导致了CDI程度的增强,使得高频刺激以及双刺激下NMDA受体介导的Ca2+内流受到抑制,使得LTP的形成受到影响。我们的以上研究为进一步深入揭示NR1亚基C1和C2外显子的功能提供了新的线索。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
第一章绪论  10-23
  1.1 NMDA 受体的一般性质  10-11
  1.2 NR1 剪接异构体  11-21
    1.2.1 NR1 剪接异构体的表达  12-14
    1.2.2 NR1 亚基C 末端对NMDA 受体表面表达的调控  14-16
    1.2.3 NR1 C 末端对CREB 依赖的基因表达的调控  16-17
    1.2.4 NR1 亚基C 末端对NMDA 受体C 末端通道性质的影响  17-21
  1.3 本课题的研究意义  21-23
第二章NMDA受体NR1 亚基C 末端剪接异构体研究  23-52
  2.1 材料与方法  23-33
    2.1.1 实验动物  23
    2.1.2 试剂与溶液  23-24
    2.1.3 急性海马脑片制备与孵育  24-25
    2.1.4 脑片的固定和灌流  25-26
    2.1.5 记录电极制备  26-27
    2.1.6 电生理记录  27-33
  2.2 实验结果  33-47
    2.2.1 NR1dC1,C2 小鼠与WT 小鼠海马CA1 锥体细胞的自发EPSC  33-34
    2.2.2 NMDA 受体电流的输入/输出曲线  34-37
    2.2.3 诱发的NMDA 电流(Evoked NMDA current)  37-39
    2.2.4 NMDA 受体Ca~(2+)依赖性的失活  39-45
    2.2.5 NMDA 受体依赖的长期增强现象  45-47
  2.3 讨论  47-52
    2.3.1 突触前的谷氨酸释放效率  47-48
    2.3.2 CDI 程度的增强  48-49
    2.3.3 CDI 程度增强的可能机制  49-50
    2.3.4 LTP 的抑制  50-52
第三章总结与展望  52-55
  3.1 主要结论  52-53
  3.2 展望  53-55
参考文献  55-61
致谢  61-62
攻读硕士学位期间已完成或发表的文章  62-64

NR1亚基C末端剪接异构体对NMDA受体功能的调节

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