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甜瓜果实表面拮抗菌的分离鉴定及其生防潜能研究

作　者: 王奕文
导　师: 许玲
学　校: 华东师范大学
专　业: 植物学
关键词: 甜瓜果实拮抗菌分离筛选 16sDNA rRNA-ITS 抑菌机理
分类号: S476
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

筛选果蔬表面天然的拮抗微生物，研究其生防潜能，对发展果蔬采后病害的生物防治技术和开发生物保鲜剂有着重要的指导意义。本研究以田间栽培和市场销售的甜瓜果实为试验材料，对其表面附着的拮抗微生物进行了快速筛选方法的研究，并对筛选出的拮抗菌株进行了形态学、生理学和分子生物学鉴定，对其中具最佳抑菌效果菌株的抑菌机理进行了探讨，结果表明：1、甜瓜果实表面广泛分布着具有生防潜能的拮抗细菌，可通过在LB培养基上的生长速度、菌落形态特征快速区分它们的类别；并应用十字交叉划线接种法快速而且准确判断拮抗菌与病原菌间的对峙效果。2、通过生理生化指标的鉴定，菌株间16S rDNA序列、rRNA-ITS序列分析和特异性基因序列扩增，及种间遗传距离分析，将甜瓜表面附着的拮抗菌分别鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的3个形态变种，将这四类拮抗菌分别编号为：EXWB3、EXWB1、EXWB2、EXWB4。3、四类拮抗菌经继代培养20代后，可在LB培养基上保持稳定的菌落形态，这些只能在特定培养基上保持稳定遗传的外观特性，可作为快速鉴别它们类群的重要依据。4、四类拮抗菌对于灰霉菌(Botrytis cinerea)、链格孢菌(Alternaria alternate)、镰刀菌(Fusarium oxysporum)、芽枝霉(Cladosporium．sp)、青霉(Penicillium．sp)、黑曲霉(Aspegillus niger)和粉红单端孢菌(Trichothecium roseum)均有显著的抑制效果，其中EXWB1的抑菌效果最佳。5、EXWB1可抑制三种病原真菌孢子的萌发，并破坏其细胞壁结构，造成孢子的畸形；活菌体的存在是抑菌的主要原因。6、EXWB1可分泌表面活性物质，从而稳定定植于其来源寄主和其他非寄主果实表面，在果实采收后1个月内基本保持外源接种量恒定不变，在番茄果实上还有拮抗菌附着量增长的现象。7、EXWB1处理甜瓜果实与接种A．alterna和F．oxysporum真菌后的果实相比，可有效控制果实含糖量、维生素C含量、可滴定酸含量的减少，显著降低果实呼吸强度和乙烯产量，抑制病原菌对果实的侵染以及病斑的扩大。本研究为果实表面拮抗微生物的快速分离、筛选和鉴定提供了新方法，也为进一步深入研究拮抗菌与病原微生物相互作用机理和开发新型生物保鲜剂奠定了基础。

全文目录

摘要  8-10
Abstract  10-12
综述芽孢杆菌在植物病害生物防治中的应用  12-20
  1.生物防治的概念与拮抗微生物的生防机制  12-14
    1.1 生物防治的概念  12-13
    1.2 拮抗微生物的生防机制  13-14
  2.芽孢杆菌在生物防治中的应用  14-18
    2.1 蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)  14-15
    2.2 短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)  15-16
    2.3 巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)  16
    2.4 地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)  16-17
    2.5 解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)  17
    2.6 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)  17-18
  3.生物防治在控制果蔬采后病害中的应用  18-20
正文甜瓜果实表面拮抗菌的分离鉴定及其生防潜能研究  20-69
  第一节甜瓜果实表面拮抗菌的分离筛选  20-27
    1.材料和方法  21-23
      1.1 材料  21
      1.2 方法  21-23
    2.结果与分析  23-26
      2.1 甜瓜果实表面微生物类群的分布  23-24
      2.2 甜瓜果实表面附着菌的分类  24-25
      2.3 甜瓜果实表面附着菌的拮抗性测定  25-26
    3.讨论  26-27
  第二节甜瓜果实表面拮抗菌的形态学鉴定  27-32
    1.材料和方法  27-29
      1.1 材料  27-28
      1.2 方法  28-29
    2.结果与讨论  29-32
      2.1 拮抗菌的形态特征观察  29-30
      2.2 拮抗菌的培养性状与菌落形态特征  30-32
  第三节甜瓜果实表面拮抗菌的生理生化鉴定  32-37
    1.材料和方法  32-34
      1.1 材料  32-33
      1.2 方法  33-34
    2.结果与讨论  34-37
      2.1 拮抗菌的生长对数期  35
      2.2 拮抗菌的生理生化指标  35-36
      2.3 拮抗菌的适宜生长温度  36-37
  第四节甜瓜果实表面拮抗菌的分子生物学鉴定  37-46
    1.材料和方法  37-42
      1.1 材料  37-39
      1.2 方法  39-42
    2.结果与分析  42-45
      2.1 拮抗菌的16SrDNA鉴定  42-43
      2.2 拮抗菌的rDNA-ITS鉴定  43-44
      2.3 拮抗菌的特异标记基因序列分析  44-45
    3.讨论  45-46
  第五节甜瓜果实表面拮抗菌的生防潜能研究  46-69
    1.材料和方法  46-53
      1.1 材料  46-47
      1.2 方法  47-53
    2.结果与分析  53-66
      2.1 拮抗菌的抑菌效果比较  53-55
      2.2 EXWB1-26对病原真菌孢子萌发的抑制作用  55-57
      2.3 EXWB1-26在果实上对病原真菌的拮抗作用  57-60
      2.4 EXWB1-26在果实上的定植能力  60-61
      2.5 EXWB1-26在果实上的附着性能  61-63
      2.6 EXWB1-26在抑菌过程中对果实营养影响  63-65
      2.7 EXWB1-26在抑菌过程中对生理代谢的影响  65-66
    3.讨论  66-69
      3.1 抑菌活性测定  66-67
      3.2 抑菌潜能研究  67-69
结论与展望  69-72
  1.结论  69-70
  2.展望  70-72
参考文献  72-82
致谢  82-83
个人简历  83

甜瓜果实表面拮抗菌的分离鉴定及其生防潜能研究

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