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当归芍药散治疗原发性痛经的效应物质基础研究

作　者: 王言才
导　师: 段金廒
学　校: 江苏大学
专　业: 药剂学
关键词: 当归芍药散原发性痛经效应物质基础环氧化酶-II抑制剂
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

原发性痛经为妇科常见疾病,临床常采用NASIDS、口服避孕药、Ca²⁺拮抗剂等治疗,由于存在对消化道、心脏或肝肾等不良反应而限制了临床应用。当归芍药散系张仲景《金匮要略》方,由当归、芍药、川芎、白术、茯苓、泽泻组成,主治妊娠“腹中疼痛”,以及妇人杂病“腹中诸疾痛”,后世医家常用本方治疗妇科疾病。本文在前期建立了原发性痛经器官模型的工作基础上,遵循方剂配伍与方病结合原则,采用多效应评价平台和活性追踪与化学分离分析紧密结合的思路,对当归芍药散治疗原发性痛经的效应物质基础进行研究。本论文工作主要包括三部分:一、样品制备方法研究和样品制备:全方水提取物和50%乙醇提取物经小鼠离体子宫原发性痛经模型效应评价和化学成分分析,结果显示,当归芍药散治疗原发性痛经的主要效应物质可能为醇溶性成分,仅采用水提取均有可能遗漏部分效应成分。基于此研究结果,我们制定了水提醇沉、残渣醇提、大孔吸附树脂吸附洗脱分离和溶剂萃取结合的样品制备方法,将全方系统分为21个部位,为进一步的系统生物效应评价和化学成分分析奠定基础。二、当归芍药散治疗原发性痛经效应评价平台的建立和各分离部位的效应评价:①建立小鼠离体子宫原发性痛经模型:催产素诱发离体子宫强烈收缩,模拟痛经时子宫的痉挛状态,用于当归芍药散治疗原发性痛经效应部位的筛选;②建立环氧化酶-Ⅱ抑制剂筛选平台:比较ELISA、放免法、荧光活性法、比色法等检测NIH3T3细胞株、RAW264.7细胞株、大鼠腹腔巨噬细胞中PGE₂的含量或环氧化酶-Ⅱ的活性时方法的优点,以比色法最为简便、快捷、高效,适合环氧化酶-Ⅱ抑制剂的高通量筛选和当归芍药散效应物质基础研究。③当归芍药散对大鼠腹腔巨噬细胞NO产量的调控:选择与原发性痛经和炎症的发生、体内PGs的产生等高度生物相关NO为对象,Griess法检测含量,研究当归芍药散对其NO产量的调控。上述三个生物效应评价方法结果可靠、稳定,且后两个具备高通量优势,适合作为当归芍药散治疗原发性痛经效应物质基础的筛选评价平台。对所分离得到的各化学物质部位的生物效应进行评价,结果发现主要有效部位为:当归芍药散挥发油部位（DSS-1）、大孔吸附树脂30%、40%、50%、70%乙醇洗脱部位（DSS-10、DSS-11、DSS-12、DSS-14）和水提残渣90%乙醇提取石油醚萃取部位（DSS-18）。三、当归芍药散治疗原发性痛经效应物质部位的成分分析:采用HPLC-DAD-ESI-MS、GC-MS、对照品对照等方法并结合文献,对当归芍药散效应部位进行成分分析。结果表明,当归芍药散挥发油（DSS-1）主要化学成分为桉叶烯、古香油烯、大根香叶烯、匙叶桉油烯醇、苍术酮、丁烯基苯酞内酯、Z-藁本内酯、新蛇床内酯、川芎内酯A,且以藁本内酯（42.75%）的含量最大。大孔吸附树脂吸附30%、40%乙醇洗脱（DSS-10,DSS-11）主要化学成分为芍药内酯苷和芍药苷,50%乙醇洗脱（DSS-12）主要化学成分为阿魏酸,70%乙醇洗脱（DSS-14）和水提残渣90%乙醇提取石油醚萃取部位（DSS-18）中白术内酯-Ⅰ、白术内酯-Ⅱ、白术内酯-Ⅲ含量占较大比例。上述化学成分在当归芍药散治疗原发性痛经效应评价平台中效应显著,为阐明其作用机理和相互影响,对效应部位有待进一步分离分析和定量研究,对所得化合物进行效应研究,最终为揭示配伍规律和应用开发研究奠定基础,并为方剂研究思路提供参考。本文创新点①研究思路:遵循“方剂配伍与方病结合”,采用“化学分离分析与多指标效应评价结合”,准确地发现效应物质;②研究模式:本论文建立的三个效应评价平台除对当归芍药散进行了效应评价,还对本课题组内另外6个复方进行了活性筛选和效应评价,有利于效率提高和资源节约,有利于各复方间的横向比较和配伍规律的阐明。

全文目录

摘要  6-9
ABSTRACT  9-14
第一章文献综述  14-29
  1 当归芍药散产生背景与传统中医理论对痛经的认识  14-18
  2 现代医学对原发性痛经的认识与当归芍药散应用  18-21
  3 当归芍药散效应物质基础研究进展与研究思路  21-29
第二章当归芍药散样品制备方法研究  29-41
  第一节当归芍药散提取方法的选择  29-37
    1 实验材料  29-30
    2 实验方法  30-31
    3 实验结果  31-36
    4 讨论与小结  36-37
  第二节当归芍药散各化学物质部位的制备  37-41
    1 实验材料  37
    2 实验内容  37-38
    3 讨论与小结  38-41
第三章当归芍药散治疗原发性痛经评价平台的建立与分离部位效应评价  41-65
  第一节小鼠离体子宫原发性痛经模型的建立与效应评价  41-47
    1 实验材料  41
    2 实验方法  41-42
    3 实验结果  42-45
    4 讨论与小结  45-47
  第二节环氧化酶-II抑制剂筛选平台的建立与效应评价  47-58
    1 实验材料  48-49
    2 实验方法  49-50
    3 实验结果  50-52
    4 讨论与小结  52-58
  第三节当归芍药散对大鼠腹腔活化巨噬细胞NO的调控研究  58-65
    1 实验材料  58-60
    2 实验方法  60-61
    3 实验结果  61-64
    4 讨论与小结  64-65
第四章当归芍药散治疗原发性痛经效应部位的成分分析  65-83
  第一节当归芍药散挥发油部位成分分析  65-76
    1 实验材料  65
    2 实验方法  65-66
    3 实验结果  66-74
    4 讨论与小结  74-76
  第二节当归芍药散治疗原发性痛经有效部位化学成分分析  76-83
    1 实验材料  76
    2 实验方法  76-77
    3 实验结果  77-81
    4 讨论与小结  81-83
第五章当归芍药散治疗原发性痛经效应成分验证  83-89
  第一节效应成分在小鼠离体子宫原发性痛经模型上的验证  83-87
    1 实验材料  83
    2 实验方法  83
    3 实验结果  83-86
    4 讨论与小结  86-87
  第二节效应成分在大鼠腹腔活化巨噬细胞NO调控中的验证  87-89
    1 实验材料  87
    2 实验方法  87
    3 实验结果  87-88
    4 讨论与小结  88-89
结语  89-91
参考文献  91-99
在学期间发表的论文  99-100
致谢  100

当归芍药散治疗原发性痛经的效应物质基础研究

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