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猴痘病毒PCR和实时荧光PCR检测方法的建立

作　者: 朱娜
导　师: 范红结
学　校: 南京农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猴痘病毒 PCR 实时荧光PCR 检测
分类号: S854.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 17次
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内容摘要

猴痘病毒(MPV)属于痘病毒科,正痘病毒属,是结构较为复杂的DNA病毒。猴痘是一种以皮肤出疹为特征的病毒性疾病,通过密切接触,由动物传染给人,并可在人与人之间传播,属于人畜共患传染病,主要分布在中非和西非热带雨林地区。2003年猴痘病毒首次在西半球登陆,美国出现了感染病例,从而引起了人们的高度关注。目前,尚无有效的防控手段,建立快速、敏感的检测方法来预防猴痘病毒侵入是当务之急。1.猴痘病毒PCR检测方法的建立从GenBank上调取猴痘病毒的基因序列,经过分析,找出了猴痘病毒的特异性靶基因序列F3L片段,人工合成F3L片段并插入质粒作为猴痘病毒检测的阳性模板。根据该序列设计并合成PCR引物,对猴痘病毒阳性模板进行扩增,结果能扩增出与目的片段大小一致的条带。建立了F3L PCR检测方法,经条件优化后,对鸡痘、鼠痘等14种相关灭活病毒核酸进行PCR扩增,发现具有良好的特异性。PCR方法能扩增出0.3 pg的阳性模板,显示建立的检测方法具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于口岸猴痘病毒的检疫。2.猴痘病毒实时荧光PCR检测方法的建立将猴痘病毒F3L片段插入质粒作为猴痘病毒检测的阳性模板,用Primer Expression 3.0软件设计2对引物和TaqMan、MGB探针,建立了TaqMan、MGB两套实时荧光PCR检测方法,经条件优化后,对鸡痘、鼠痘等14种灭活病毒核酸进行扩增,发现具有良好的特异性。灵敏度检测显示,建立的TaqMan和MGB荧光能分别扩增出68个拷贝和6.8个拷贝的阳性模板,证明建立的TaqMan和MGB实时荧光PCR检测方法具有高效、快速、特异、灵敏的特点,可用于猴痘病毒样品的现场检测。3.猴痘病毒检测试剂盒的配制及初步应用将建立的猴痘病毒PCR和实时荧光PCR检测方法组装成两个试剂盒,性能检测显示,研制的试剂盒具有较好的稳定性和重复性,能够满足长途运输的要求,能耐受一定的冻融次数。对43份采集样本进行检测,检测结果一致,均为阴性,与我国尚无猴痘病毒的情况相一致。证明试剂盒可以对猴痘病毒进行快速的检测。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-8
第一篇文献综述  8-18
  第一章猴痘病毒的研究进展  8-18
    1.病原学  8-9
    2.流行病学  9-10
    3.临床表现和病理变化  10-11
    4.检测技术研究进展  11-12
    5.猴痘病毒病的治疗及防制  12-13
    6.结束语  13-15
    参考文献  15-18
第二篇试验研究  18-52
  第二章猴痘病毒PCR检测方法的建立  18-26
    1.材料与方法  18-20
    2.结果  20-23
    3.讨论  23-24
    参考文献  24-26
  第三章猴痘病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立  26-40
    1.材料与方法  26-28
    2.结果  28-37
    3.讨论  37-38
    参考文献  38-40
  第四章猴痘病毒PCR检测试剂盒的配制  40-52
    1.材料与方法  40-44
    2.结果  44-50
    3.讨论  50-52
全文总结  52-54
致谢  54

猴痘病毒PCR和实时荧光PCR检测方法的建立

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