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SOCS3和SOCS5在RSV感染支气管上皮细胞的TH1/TH2免疫失衡中的表达

作　者: 夏倩
导　师: 罗百灵
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: RSV 哮喘支气管上皮细胞 Th1/Th2免疫失衡 SOCS3 SOCS5
分类号: R725.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：呼吸道合胞病毒是婴幼儿下呼吸道感染的最重要病源体,越来越多的临行病学显示,婴幼儿时期的RSV感染与患儿日后发生哮喘密切相关,Th1/Th2失衡是哮喘患儿气道炎症和气道高反应性发生和发展的关键,细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)系统对TH细胞因子如白介素、干扰素等的作用是否与哮喘发病有关,仍不甚清楚。本课题通过在体外构建RSV持续感染气道上皮细胞的模型,并与淋巴细胞共培养,观察Th1/TH2细胞因子以及SOCS3和SOCS5的表达情况,为RSV感染引起的哮喘的免疫失衡机制及SOCS蛋白家族对TH分化的影响提供证据,为临床更有效的治疗哮喘等免疫失衡疾病奠定理论基础。方法：将冻存的病毒株复苏后经Hela细胞增殖。同时收集无病毒的Hela单层细胞培养瓶中培养基上清液和细胞溶解产物。病毒悬液进行TCID50的毒力测定。1.将0.0001MOI的RSV病毒悬液感染支气管上皮细胞,并将感染的细胞连续传代,构建RSV持续感染支气管上皮细胞的模型,无病毒的细胞悬液作为阴性对照。免疫荧光检测支气管上皮细胞中RSV蛋白的表达水平。2.取湘雅医院体检正常的1月-2岁的婴幼儿外周血2.5ml,分离淋巴细胞,模型细胞及阴性对照细胞与T淋巴细胞共培养36小时后,ELASE观测上清液中IFN-r和IL-4细胞因子表达。3.Real-time PCR检测淋巴细胞中SOCS3mRNA及SOCS5mRNA的表达,探讨其对TH细胞分化的影响。结果：1.免疫荧光：RSV感染的支气管上皮细胞胞浆内可见大小不等点片状荧光。2.ELISA:与对照组相比较,RSV感染组IFN-r水平明显降低(t=-15.266,p<0.01), IL-4水平明显升高(t=11.40,p<0.01), IFN-r／IL-4水平明显降低(t=-9.96,p<0.01),两两相比均有显著性差异。3.Real-time PCR.:与对照组相比较,RSV感染组的SOCS3mRNA水平明显升高(t=4.104,p<0.01),SOCS5水平明显降低(t=-7.417,p<0.01),两两相比均有显著性差异。结论：1.RSV持续感染支气管上皮细胞可致TH2优势免疫应答。2.RSV感染可以上调SOCS3mRNA在淋巴细胞中的表达,同时下调SOCS5mRNA的表达,可能与Th1/Th2免疫失衡有关。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
英汉缩略词  10-11
第一章前言  11-13
第二章材料与方法  13-22
  2.1 实验材料  13
  2.2 实验试剂和器材  13-14
  2.3 方法  14-21
  2.4 统计学方法  21-22
第三章结果  22-26
  3.1 RSV病毒悬液的毒力  22-23
  3.2 免疫荧光  23
  3.3 上清液中IFN-r和IL-4细胞因子的表达  23-24
  3.4 荧光定量PCR  24-26
第四章讨论  26-29
第五章结论  29-30
参考文献  30-32
综述  32-38
  SOCS与TH1/TH2免疫失衡关系的研究  32-38
致谢  38

SOCS3和SOCS5在RSV感染支气管上皮细胞的TH1/TH2免疫失衡中的表达

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