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碱提松木层孔菌菌丝体多糖的结构及活性研究

作　者: 裴丽娟
导　师: 张丽萍
学　校: 东北师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 松木层孔菌液体发酵真菌多糖多糖的结构免疫活性
分类号: Q936
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本论文主要通过生物发酵技术培养松木层孔菌(Phellinus pini),确定最优培养基和摇瓶发酵条件;并用碱提的方法从菌丝体中提取多糖,经纯化得到碱提水溶性多糖PEP,并对该多糖的化学结构及免疫活性进行研究。首先研究了培养基成分及摇瓶发酵条件对松木层孔菌菌丝体生长及胞外多糖产量的影响。结果表明,液体发酵最适培养基为白砂糖4%、酵母粉0.4%、KH2PO4 0.3%、MgSO4 0.1%、VB1,VB20.01g/L;液体发酵的最适培养条件为培养温度26℃、装液量250mL/500mL、摇床转速130r/min、培养基初始pH为6、接种量15%、培养时间6d。菌丝体生物量达5.27 g/L,胞外多糖产量达0.42g/L。松木层孔菌经发酵培养得到菌丝体,水提后菌丝体经0.5M NaOH室温下提取,盐酸中和,醇沉,常规干燥后得碱提水溶性多糖CPEP。CPEP采用冻融分级,酶和Sevage法联合脱蛋白及SepharoseCL-6B柱层析制备等方法进行纯化,得水溶性多糖PEP。苯酚-硫酸法测总糖含量为92.12%。经SepharoseCL-6B柱层析和HPLC分析,PEP为均一性多糖,分子量约为16kDa。采用部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化及IR、GC、GC-MS等方法对PEP的结构进行分析。综合几种方法的结果,推测PEP结构的主体部分由1,2-Man组成,平均每5个残基上有2个分支,在Man的6-O分出支点连接侧链,1,6-Gal和1,4-Man构成支链,末端残基为Glc和Gal。体外淋巴细胞转化实验表明PEP能显著促进小鼠淋巴细胞的增殖。

碱提松木层孔菌菌丝体多糖的结构及活性研究

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