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兔骨髓间充质干细胞复合小肠粘膜下层（SIS）构建组织工程化阴道模型的实验研究

作　者: 彭强
导　师: 刘伟
学　校:
专　业: 外科学
关键词: 骨髓间充质干细胞组织工程化阴道小肠粘膜下层
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：初步探索以骨髓间充质干细胞（BMSCs）为种子细胞复合SIS构建组织工程化阴道的可行性。方法：2月龄日本大耳兔，体重1.5~2.5kg，雌性。体外分离、培养兔BMSCs共诱导成阴道上皮细胞（ECs）与平滑肌细胞（SMCs），并行5-BrdU标记；将制备的小肠粘膜下层（SIS）材料切割成1cm×1cm大小，在其同一表面先后种植两种细胞，待细胞在SIS表面贴附后将其植入兔体内深筋膜上继续培养，分别于术后第1、2、3、4周取材行组织学检查和抗角蛋白（CK）、平滑肌肌动蛋白（SMA）免疫组织化学及免疫荧光检查等。以了解上皮细胞、平滑肌细胞在材料上的增殖分化情况和复合物在体内的血管化情况及SIS的降解情况。结果：种子细胞能够渗透、生长于SIS材料中，并见多种组织结构形成。植入体内2周后可见细胞增殖开始出现分层，SIS开始降解，组织结构渐清晰，4周后SIS完全降解，并见大量微血管长入。通过5-BrdU标记细胞的免疫荧光观察见部分细胞核呈现明亮的黄绿色荧光，示SIS支架材料上生长的细胞多为所植入细胞；抗CK，SMA免疫组织化学染色示移植细胞能够在体内分化。结论：利用BMSC诱导的细胞为种子细胞复合于SIS材料上继续培养，可在体内能继续增殖分化，并形成多层细胞结构，可用于组织工程化阴道的构建。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-8
第1章引言  8-10
第2章兔 BMSCs 原代培养与诱导分化  10-21
  2.1 材料  10-12
    2.1.1 主要试剂  10
    2.1.2 主要液体的配制方法  10-11
    2.1.3 仪器设备及耗材  11-12
    2.1.4 实验动物  12
  2.2 实验方法  12-15
    2.2.1 兔阴道平滑肌细胞（SMCs）及上皮细胞（ECs）的原代培养  12
    2.2.2 兔阴道上皮及平滑肌细胞传代培养  12-13
    2.2.3 兔 BMSCs 的体外分离及原代培养  13-14
    2.2.4 兔 BMSCs 传代培养  14
    2.2.5 兔 BMSCs 的体外向上皮细胞诱导分化  14
    2.2.6 兔 BMSCs 的体外向平滑肌细胞诱导分化  14
    2.2.7 诱导后的检测方法  14-15
    2.2.8 细胞生长曲线  15
  2.3 实验结果  15-18
    2.3.1 BMSCs 细胞形态学观察  15-16
    2.3.2 诱导 BMSCs 向阴道平滑肌样细胞分化  16
    2.3.3 诱导 BMSCs 向阴道上皮样细胞分化  16
    2.3.4 兔 BMSCs 及诱导后细胞第 3 代生长曲线  16-18
  2.4 讨论  18-21
    2.4.1 间充质干细胞（MSCs）  18-19
    2.4.2 骨髓间充质干细胞诱导分化为平滑肌细胞及上皮细胞  19-21
第3章 SIS 制备  21-24
  3.1 实验材料和主要试剂  21
  3.2 方法  21
    3.2.1 物理方法处理  21
    3.2.2 化学方法处理  21
  3.3 结果  21-22
    3.3.1 SIS 的大体标本观察  21
    3.3.2 透射及扫描电镜观察  21-22
  3.4 讨论  22-24
第4章初级组织工程化阴道的体外构建及体内皮下植入  24-34
  4.1 主要材料  24
  4.2 主要试剂  24
  4.3 主要仪器设备  24
  4.4 实验方法  24-26
    4.4.1 种子细胞标记  24-25
    4.4.2 种子细胞的种植  25
    4.4.3 实验分组  25
    4.4.4 阴道模型皮下植入的手术方法及标本的获取  25
    4.4.5 HE 染色  25-26
    4.4.6 免疫荧光  26
    4.4.7 免疫组化检测组织 SMA 及广谱角蛋白（CK）  26
  4.5 结果观察  26-31
    4.5.1 体外时支架（SIS）表面种植种子细胞后的免疫荧光观察  26-27
    4.5.2 皮下植入的阴道模型的大体观察  27
    4.5.3 皮下种植的 5-Brdu 标记细胞的免疫荧光观察  27
    4.5.4 皮下植入培养组织 HE 染色观察  27
    4.5.5 皮下植入培养免疫组化检测  27-28
    4.5.6 SIS 材料内毛细血管数量的比较  28
    4.5.7 统计方法  28-31
  4.6 讨论  31-34
第5章结论  34-35
致谢  35-36
参考文献  36-39
综述  39-48
  参考文献  46-48

兔骨髓间充质干细胞复合小肠粘膜下层（SIS）构建组织工程化阴道模型的实验研究

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