学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

绿脓菌素诱导J774细胞氧化损伤及N-乙酰半胱氨酸对其保护作用的实验研究

作　者: 刘丹
导　师: 柴文戍
学　校: 辽宁医学院
专　业: 内科学
关键词: 绿脓菌素氧化损伤 J774细胞 N-乙酰半胱氨酸
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 3次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的探讨绿脓菌素（PCN）诱导J774细胞氧化损伤及N-乙酰半胱氨酸（NAC）对其损伤的保护作用。方法实验分组：J774细胞随机分为3组,（1）正常对照组：未加任何实验药物；（2）模型组：根据文献[1]选择不同浓度PCN（10、25、50μg·ml-1）感染J774细胞24h，观察其对J774细胞的氧化损伤,结合MTT细胞毒性实验结果，选择最佳浓度的PCN，建立其诱导J774细胞氧化损伤的模型；（3）NAC干预组：根据文献[2]选取NAC（2.5、5、10、20mmol/L）干预J774细胞1h，然后给予最佳浓度的PCN感染细胞24h。观察不同浓度的NAC对PCN诱导J774细胞氧化损伤的影响，并结合MTT细胞毒性实验结果，选取最佳浓度的NAC，观察NAC对PCN感染J774细胞（6h、12h、24h）的影响。应用MTT法测定细胞毒性；应用流式细胞术检测活性氧（ROS）的水平；应用试剂盒测定乳酸脱氢酶（LDH）漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性；应用Western blot方法测定锰超氧化物歧化酶（MnSOD）及CAT蛋白表达水平。结果（1）MTT法测定细胞毒性结果显示：PCN（5、10、25、50、75、100μg·ml-1）感染J774细胞24h，对细胞活力无影响。仅在PCN浓度为100μg·ml-1时，有4-5%的细胞活力丧失，但无统计学意义(数据未显示),故选用50μg·ml-1及以下浓度进行感染实验；选用NAC（2.5、5、10、20mmol/L）与J774细胞共同孵育1h，然后给予PCN（10、25、50μg·ml-1）作用6h、12h及24h,结果显示:各组细胞活力无影响。（2）流式细胞术检测ROS水平结果显示：与空白对照组相比，模型组ROS水平升高，并随着PCN浓度增加，ROS水平逐渐升高，呈浓度依赖关系；与模型组相比，NAC干预组ROS水平降低，随着时间延长，ROS水平逐渐降低，呈时间依赖关系，各实验组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。（3）应用试剂盒测定结果显示：与空白对照组相比，模型组LDH漏出量增加，MDA含量增加，SOD活性下降，CAT活性下降，呈浓度依赖关系；与模型组相比，NAC干预组LDH漏出量减少，MDA含量减少，SOD活性升高，CAT活性升高，呈时间依赖关系，各实验组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。（4）Western blot结果显示：与空白对照组相比，模型组MnSOD、CAT蛋白表达减弱，随着PCN浓度增加，MnSOD、CAT蛋白表达逐渐减弱，呈浓度依赖关系。与模型组相比，NAC干预组MnSOD、CAT蛋白表达增强，随着时间的延长，MnSOD、CAT蛋白表达逐渐增强，呈时间依赖关系，各实验组间比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论1. PCN可以诱导J774细胞氧化损伤，并呈浓度依赖关系。2. NAC对PCN诱导J774细胞氧化损伤具有保护作用，呈时间依赖关系。

全文目录

中文论著摘要  4-6
英文论著摘要  6-9
英文缩略语表  9-10
前言  10-12
实验材料与方法  12-18
结果  18-30
讨论  30-33
结论  33-34
本研究创新性的自我评价  34-35
参考文献  35-39
附录  39-52
  综述  39-49
    参考文献  45-49
  在学期间科研成绩  49-50
  致谢  50-51
  个人简介  51-52

绿脓菌素诱导J774细胞氧化损伤及N-乙酰半胱氨酸对其保护作用的实验研究

内容摘要

全文目录

相似论文