氢化可的松(F)、可的松(E)及其6p-羟基代谢物(6β-OHF、6β-OHE)浓度的高效液相紫外检测法,并且在肾移植患者中探索CYP3A5*3和MDR1C3435T的基因多态性对F及E的6p-羟基化代谢率(HOM),即尿中(6β-OHF+6β-OHE)/(F+" />

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CYP3A5和MDR1的基因多态性对氢化可的松及可的松的总代谢率评价环孢霉素体内代谢的影响

作　者: 郑丽云
导　师: 程泽能
学　校: 中南大学
专　业: 药学
关键词: 环孢霉素氢化可的松可的松生物标志物个体化用药 6β-羟基化
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：建立一种可以同时测定尿中四种内源性物质可的松的学位论文">氢化可的松(F)、可的松(E)及其6p-羟基代谢物(6β-OHF、6β-OHE)浓度的高效液相紫外检测法,并且在肾移植患者中探索CYP3A5*3和MDR1C3435T的基因多态性对F及E的6p-羟基化代谢率(HOM),即尿中(6β-OHF+6β-OHE)/(F+E),评价环孢霉素体内代谢的效率的影响,为环孢霉素(CsA)的临床个体化用药研究提供一定的理论基础。方法：①建立HPLC-UV法同时测定尿中F、E、6β-OHF和6β-OHE。采用Agilent-C18色谱柱(200×4.6mm,5μm);流动相为用乙腈-水-甲醇进行梯度洗脱；内标选用地塞米松；流速为1.0mL·min-1;检测波长为245nm；柱温为30℃；利用固相萃取法处理尿样；进样量为30μl。②探索CYP3A5*3和MDR1C3435T的基因多态性对HOM评价环孢霉素体内代谢的效率的影响。肾移植患者于回访日清晨服药前,采集2ml肘静脉血,用于基因型的检测,CsA稳态谷浓度的测定；同时收集清晨08：00至10：00时间段内的尿样用于测定HOM值；收集患者的人口统计学参数,CsA的用法用量,合并用药情况及主要的实验室检查指标。考察CsA血药浓度剂量比(C/D)和尿中HOM值在CYP3A5*3和MDR1C3435T不同基因型之间的差异,考察钙拮抗剂对CsA C/D和尿中HOM的影响,考察CsA C/D和尿中HOM值的性别差异；Spearman秩相关检验分析CsA C/D和尿中HOM,CsA C/D和年龄、体重等的相关性。结果：①尿中F.E、6β-OHF和6β-OHE以及内标地塞米松在该条件下均可完全分离,F在5～320μg·l-r‘浓度范围内及E、6β-OHF、6β-OHE在5～400μg·l-1浓度范围内线性关系良好,四种化合物的定量下线均为5μg·l-1,方法的精密度与准确度及四种化合物的提取回收率都符合生物样本测试要求。②CsA C/D和尿中HOM值在CYP3A5*3和MDR1C3435T的不同基因型之间不存在显著性差异(p>0.05)。钙拮抗剂对CsA C/D和尿中HOM值无显著性影响(p>0.05)。CsA C/D和尿中HOM值在性别间的差异无统计学意义(p>0.05)。③CsA C/D与年龄、体重等不相关,CsA C/D与尿中HOM存在较强负相关Y=-0.739(p<0.01),其中(CYP3A5*3*3+MDR1CT TT)组的相关性高于(CYP3A5*1*1,*1*3+MDR1TT)组,在一定程度上说明当CYP3A5不表达且P-gp活性低时,肠道的首过作用小,HOM与环孢霉素C/D的相关性要好,但两者相关系数的差异较小。结论：①建立的HPLC-UV法简便准确,优化了检测方法,缩短了分析时间。可用于尿样中F.E.6β-OHF和6β-OHE的同时测定,也为进一步研究内源性F及E的6p-羟基化代谢率提供了有效的分析手段。②CsA C/D与尿中HOM值之间存在较强负相关,但CYP3A5*3和MDT1C3435T这两个位点的基因多态性对HOM评价CsA体内代谢的效率的没有影响。本研究为环孢霉素的临床个体化用药研究提供了一定的理论基础。本论文含图12幅,表12个,参考文献84篇。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
英文缩写词对照表  10-11
1 前言  11-14
2 HPLC法同时测定尿中可的松,氢化可的松,6β-羟基可的松与6β-羟基氢化可的松  14-25
  2.1 试验材料  14
    2.1.1 对照品及试剂  14
    2.1.2 试验仪器  14
  2.2 试验方法  14-15
    2.2.1 色谱条件  14
    2.2.2 溶液配制  14-15
    2.2.3 样品处理  15
  2.3 方法学验证及其结果  15-23
    2.3.1 方法的特异性  15-17
    2.3.2 标准曲线和线性范围  17
    2.3.3 定量下限  17
    2.3.4 精密度与准确度  17
    2.3.5 提取回收率考察  17-23
  2.4 讨论  23-24
    2.4.1 测定方法的选择  23-24
    2.4.2 流动相的选择  24
    2.4.3. 样品处理方法的选择  24
  2.5. 本章小结  24-25
3 探索CYP3A5*3和MDR1C3435T的基因多态性对HOM评价CsA体内代谢的效率的影响  25-39
  3.1 材料与方法  25
    3.1.1 药品与试剂  25
    3.1.2 仪器与软件  25
  3.2 试验方法  25-30
    3.2.1 研究对象  25-26
    3.2.2 生物样品的采集及患者临床资料的记录  26
    3.2.3. CYP3A5*3和MDR1 C3435T基因多态性的检测  26-29
    3.2.4 生物样品测定方法  29-30
    3.2.5 数据处理及统计分析  30
  3.3. 结果  30-36
    3.3.1 CYP3A5*3基因多态性在肾移植患者中的分布  30
    3.3.2 MDR1 C3435T基因多态性在肾移植患者中的分布  30-31
    3.3.3 基因多态性对环孢霉素血药浓度剂量比和尿中HOM的影响  31-33
    3.3.4 性别差异对环孢霉素血药浓度剂量比和尿中HOM的影响  33-34
    3.3.5 钙拮抗剂对环孢霉素血药浓度剂量比和尿中HOM的影响  34-35
    3.3.6 HOM及其它非遗传因素与环孢霉素血药浓度剂量比的相关性  35-36
  3.4. 讨论  36-38
  3.5 本章小结  38-39
结论  39-40
参考文献  40-45
综述  45-58
  参考文献  54-58
附录  58-66
攻读学位期间主要的研究成果  66-67
致谢  67

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