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视黄酸受体α在胆管癌发生发展中的作用及机理研究
作 者: 张秋燕
导 师: 陈清西
学 校: 厦门大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 胆管癌 RARα 侵袭
分类号: R735.8
类 型: 硕士论文
年 份: 2014年
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内容摘要
临床上胆管癌的发病率日益增高,且生长速度快、侵袭力强。手术加放、化疗的综合治疗已成为其治疗的主要方法,但胆管癌对放化疗敏感度低、抵抗力强,副作用明显等特点严重限制了放化疗药物的临床使用。因此,深入研究胆管癌发生发展具有重要的意义。本文主要以体外培养的三株人胆管癌QBC939、 SK-ChA-1和HCcc9810细胞为研究对象,阐明RARa参与胆管癌发生发展的分子机制,为胆管癌的基因靶向治疗提供新策略,为寻找胆管癌早期诊断指标及临床基因治疗靶点提供科学依据。本文主要运用免疫组织化学、Western blot、RT-PCR等方法研究胆管癌临床标本和胆管癌细胞中RARa的表达情况。通过MTT法、细胞集落形成、裸鼠皮下移植瘤、流式细胞术PI单染、药物联用等实验研究RARa对胆管癌细胞生长、成瘤、细胞周期、耐药性产生的影响;再采用明胶酶谱、划痕及Transwell实验研究RARa对胆管癌细胞迁移侵袭能力的影响;最后通过研究RARa与Akt、Wnt信号通路间联系来阐明RARa对胆管癌细胞生长、迁移侵袭、耐药性产生等生物学行为的调控机制。研究结果表明,胆管癌组织中RARa表达量显著高于癌旁组织。RARa表达下调明显抑制胆管癌细胞DNA合成及体外增殖能力,降低细胞集落形成和裸鼠体内成瘤能力,这可能与CyclinD1表达下调及p21表达上调有关,使细胞周期阻滞在G1/S期;RARa表达下调导致MMP2的mRNA及活性下降,从而抑制胆管癌细胞迁移与侵袭能力;RARa表达下调可能通过介导多药耐药相关蛋白MDR1的表达下降来增强胆管癌细胞对5-FU的敏感性,RARa特异性激动剂AM580能显著协同5-FU的抗肿瘤作用。进一步研究发现,RARa表达下调后P-β-catenin表达升高,β-catenin、P-Akt、(S9)P-GSK-3p表达下降;GSK-3p表达不变等结果提示,RARa可能是通过调控Akt和Wnt信号通路影响胆管癌的发生发展。
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全文目录
本文主要缩略表 4-5 目录 5-8 Contents 8-11 中文摘要 11-12 Abstract 12-14 1 前言 14-26 1.1 胆管癌概况 14-19 1.1.1 胆管癌的临床治疗 14-16 1.1.2 胆管癌发生的分子机制 16-17 1.1.3 胆管癌的分子生物学特性 17-19 1.1.3.1 细胞凋亡机制 17 1.1.3.2 细胞周期调控机制 17-18 1.1.3.3 细胞迁移与侵袭机制 18 1.1.3.4 细胞耐药性机制 18-19 1.2 核受体概述 19-24 1.2.1 视黄酸受体的结构 19-21 1.2.2 视黄酸受体α相关辅因子 21-22 1.2.3 视黄酸受体α的分布及其转位机制 22-23 1.2.4 视黄酸受体α调控肿瘤发生发展的分子机制 23-24 1.3 药物简介 24 1.4 研究价值 24-26 1.4.1 立题依据 24-25 1.4.2 研究内容 25 1.4.3 研究意义 25-26 2 材料与试剂 26-33 2.1 实验材料与试剂 26-30 2.2 试剂配制 30-33 2.2.1 药品配制 30 2.2.2 试剂配制 30-33 3 实验方法 33-43 3.1 免疫组织化学实验 33 3.2 细胞培养 33 3.3 瞬时转染 33-34 3.4 RNA提取 34 3.5 逆转录cDNA的合成 34-35 3.6 实时荧光定量PCR 35 3.7 免疫细胞化学实验 35-36 3.8 蛋白制备 36-37 3.8.1 细胞裂解方法 36-37 3.8.2 组织裂解方法 37 3.9 Western blot 37 3.10 MTT实验 37-38 3.11 EdU体外标记细胞增殖检测 38-39 3.11.1 EdU标记 38 3.11.2 细胞固定化 38 3.11.3 Apollo染色 38-39 3.11.4 DNA染色 39 3.12 PI单染流式细胞术 39 3.13 细胞集落形成实验 39 3.14 裸鼠皮下移植瘤实验 39-40 3.15 细胞划痕实验 40 3.16 Transwell迁移与侵袭实验 40-41 3.17 明胶酶谱法 41 3.18 化疗药物联用实验 41-42 3.19 统计分析 42-43 4 结果与分析 43-62 4.1 RARα在胆管癌组织、细胞中的表达情况 43-45 4.2 RARα促进胆管癌细胞的体外增殖 45-51 4.2.1 RARα促进胆管癌细胞DNA的合成 48-49 4.2.2 RARα对胆管癌细胞周期调控的影响 49-51 4.3 RARα促进胆管癌细胞集落形成 51 4.4 RARα促进胆管癌QBC939细胞裸鼠皮下移植瘤的形成 51-54 4.5 RARα对胆管癌细胞迁移与侵袭能力的影响 54-57 4.6 RARα对胆管癌细胞耐药性的影响 57-60 4.7 RARα调控Wnt和Akt信号通路 60-62 5 讨论 62-66 5.1 RARα干扰后抑制胆管癌细胞生长与成瘤 62-63 5.2 RARα干扰后MMP2表达下调抑制胆管癌细胞体外迁移与侵袭能力 63-64 5.3 RARα干扰后下调MDR1降低胆管癌细胞耐药性 64-65 5.4 RARα调控Wnt和Akt信号通路的分子机制 65-66 6 结论 66-67 创新点 67 展望 67-68 参考文献 68-76 在学期间发表论文 76-77 致谢 77
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胆囊、胆道肿瘤
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