学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

肝癌特异性靶向阿霉素的制备及体内外活性检测

作 者: 孟娇
导 师: 李恺
学 校: 华东师范大学
专 业: 动物学
关键词: 肝癌 阿霉素 肝癌特异性黏附肽 靶向治疗 细胞坏死
分类号: R735.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 36次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
 

内容摘要


肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一,由于其起病隐匿、发展迅速、死亡率高等特点,严重危害了患者的身体健康。如何有效地早期诊断和治疗肝癌已经成为目前迫切需要解决的问题之一。传统的化疗、放疗、手术治疗等虽然在一定程度上可以延长病人的生存时间、提高生存质量,但效果非常有限,近年来出现的肝移植技术又由于缺少供体而在应用中受到很大限制。因此,肝癌的靶向治疗作为一种有效的特异性治疗方案,成为科学工作者致力于探讨和研究的热点,显示出良好的应用前景。肿瘤靶向治疗就是借助于与肿瘤高度特异性结合的药物载体,将细胞毒性物质即弹头(如放射性核素、化疗药物、毒素等)选择性地运送到肿瘤部位,达到定向杀伤肿瘤细胞、同时不伤害正常细胞的治疗目的。靶向药物的最显著特点,就是能将药物最大限度地运送到靶区,使药物在靶区浓集,直接作用于病变组织、器官和细胞,延长药物与靶部位的作用时间,使到达需药部位的药量增加,从而减少用药量、药物的毒副作用,达到高效低毒的治疗效果。然而肿瘤靶向治疗在临床应用中还存在许多有待解决的技术问题,如药物载体的选择以及载体与弹头的偶联方式等,限制了肝癌靶向治疗的发展。因此,寻找一种更为安全有效的载体是目前肿瘤靶向治疗的研究重点。本实验室利用体内噬菌体展示肽库技术,筛选得到的肝癌组织特异性黏附肽A54(氨基酸序列AGKGTPSLETTP,中国发明专利200410017048.X),具有靶向载体分子量低、免疫原性小的特点,弥补了单克隆抗体分子量大、异源性等的不足。阿霉素(Doxorubicin)是一种经典的抗生素类广谱抗肿瘤药物,目前已经被广泛地应用于急性淋巴细胞白血病、前列腺癌、肝癌等多种不同肿瘤的治疗,取得了非常好的治疗效果。但是阿霉素在临床应用中最大的问题就是:阿霉素具有较为明显的骨髓抑制、心肌毒性和神经毒性等毒副作用,严重危害病人的身体健康,使阿霉素在临床上的应用大大受到限制。本实验采用化学偶联方法将阿霉素与肝癌特异性的靶向载体A54偶联,不但可以将肝癌细胞局部的药物浓度显著提高,增强药物对肝癌细胞的杀伤能力,还可能对阿霉素所引起的各种毒副作用起到明显抑制的作用。本论文主要分成以下几个部分:一、肝癌特异性黏附肽A54与阿霉素的化学偶联利用化学方法,将肝癌特异性黏附肽A54与阿霉素进行偶联,根据反应的过程以及原理不同,我们尝试两种合成方法,得到三种不同的偶联产物:DOX-A54-1、DOX-A54和DOX-A54H、并经过MTT实验,检测了三种偶联产物的细胞毒性。初步筛选出效果较好的靶向药物,并确定其化学偶联途径。二、肝癌特异性靶向药物的体外活性检测为了进一步探讨偶联产物DOX-A54H的体外靶向结合能力及杀伤细胞的作用机制,我们把多肽A54的氨基酸序列进行定点突变,将中间位点的P(脯氨酸)、S(丝氨酸)突变为A(丙氨酸)、A(丙氨酸),成为对照肽A54M,合成DOX-A54M,并以DOX-A54为对照,体外检测DOX-A54H的靶向作用。用MTS法检测DOX-A54H对正常肝细胞HL-7702和肝癌细胞BEL-7402、SMMC-7721、SK-Hep1的细胞毒性作用。将偶联产物DOX-A54、DOX-A54M、DOX-A54H和DOX与上述几种细胞共同孵育30min后,荧光显微镜观察药物与上述几种细胞的结合情况。进一步,我们通过细胞凋亡实验、细胞存活LIVE/DEAD实验,初步探讨了DOX-A54H对细胞的杀伤作用机制。三、肝癌特异性靶向药物的体内活性检测本论文建立了肝癌细胞BEL-7402的荷瘤裸鼠动物模型,并采用尾静脉注射药物的方法。分别注射PBS、DOX-A54M、DOX-A54H和DOX药物,来检测DOX-A54H的体内活性。通过体内毒性实验和抑瘤实验,包括监测裸鼠存活情况、体重增长情况、肿瘤体积大小变化情况等。经过一段时间的药物注射后,处理裸鼠,获取血清,全自动生化分析检测体内肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)等生化指标。通过分析各实验受试组体内指标的不同,来判断DOX-A54H的抗肿瘤活性。从以上实验结果,我们得到如下结论:(1)成功合成了三种肝癌特异性黏附肽与阿霉素的化学偶联物:DOX-A54-1、DOX-A54、DOX-A54H,并通过MTT实验,初步筛选出DOX-A54H具有明显的细胞杀伤作用,并呈现显著的浓度依赖关系,IC50为2.27gM;(2)通过MTS实验、细胞结合结合实验,进一步确立了DOX-A54H对正常肝细胞HL-7702,肝癌细胞BEL-7402、SMMC-7721、SK-Hep1的细胞毒性及亚细胞定位。细胞凋亡实验、细胞存活LIVE/DEAD实验,初步探讨了DOX-A54H对细胞的杀伤作用是引起细胞坏死,而非诱导细胞凋亡;(3)构建荷瘤裸鼠动物模型,体内抑瘤实验表明,DOX-A54H能够在一定程度抑制肿瘤的生长,且不影响裸鼠的存活时间,在肝癌的靶向治疗中具有潜在的应用价值。

全文目录


中文摘要  6-9
ABSTRACT  9-13
前言  13-18
第一章 肝癌特异性黏附肽与阿霉素的化学偶联  18-37
  一、实验材料、试剂与仪器  20-23
  二、实验方法  23-27
  三、结果与分析  27-34
  四、讨论  34-35
  五、本章小结  35-37
第二章 靶向药物的体外活性检测  37-53
  一、实验材料、试剂与仪器  37-39
  二、实验方法  39-40
  三、结果与分析  40-50
  四、讨论  50-52
  五、本章小结  52-53
第三章 靶向药物的体内活性检测  53-67
  一、实验材料、试剂与仪器  53-54
  二、实验方法  54-55
  三、结果与分析  55-61
  四、讨论  61-66
  五、本章小结  66-67
结论  67-68
参考文献  68-73
综述  73-84
  参考文献  81-84
附录  84-85
致谢  85

相似论文

  1. 塞来昔布与β-榄香烯联合给药的抗肿瘤作用及其机制研究,R96
  2. 基于导师临床经验的中医药治疗慢性肾脏病蛋白尿的研究,R277.5
  3. 恩替卡韦联合TACE治疗伴乙肝病毒复制的原发性肝癌效果分析,R735.7
  4. 核蛋白NDP52与肿瘤坏死因子受体相关因子TRAF6相互作用及临床意义的研究,R363
  5. MCFP对肝癌细胞生物行为学影响初步研究,R735.7
  6. 榄香烯体内外抑制小鼠肝癌H22细胞增殖与诱导凋亡作用的研究,R735.7
  7. 新城疫病毒治疗中晚期肝恶性肿瘤临床观察,R735.7
  8. 盐酸表阿霉素的光谱与电化学研究及其分析应用,TQ465
  9. 功能化纳米钻石材料与细胞相互作用的研究,R96
  10. 乳腺癌免疫分型与临床病理参数相关性及用于预后判断的可行性,R737.9
  11. VEGF在肝转移性结直肠癌中的表达及其对预后影响的临床研究,R735.3
  12. 瑞芬太尼和异氟醚对肝癌患者肝功能影响的比较,R614
  13. CXCR1/CXR2受体拮抗剂对小鼠腹水型肝癌淋巴转移潜能的影响,R735.7
  14. 维甲酸联合苦参素干预大鼠肝癌变进程中β-catenin、E-cadherin、MMP-7的动态变化,R735.7
  15. 大鼠肝癌演进中三种生化因子及相关药物干预的研究,R735.7
  16. 109例转移性结直肠癌患者三线治疗方案比较及其影响因素分析,R735.3
  17. Lupeol对肝细胞肝癌的抑制作用及其机制研究,R735.7
  18. MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型的建立及VEGF和NF-κB1基因在骨肉瘤裸鼠模型中表达的意义研究,R738.1
  19. 硫霉素生物合成基因簇的异源表达及其改造,R914
  20. 穿膜肽11R在携带P53基因的溶瘤腺病毒中抗肿瘤作用的研究,R735.7
  21. IL-6和TNF-α与原发性肝细胞肝癌的Meta分析,R735.7

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com