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吉马酮抑制肝癌HepG2细胞增殖机制研究

作　者: 方斌
导　师: 何光源
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 吉马酮肝癌 HepG2 细胞细胞周期信号通路
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

莪术为姜科植物蓬莪术，广西莪术和温郁金的干燥根茎，具有顺血调气，消肿止痛的功能，而吉马酮则为莪术挥发油中主要的活性成分。经研究报道，莪术挥发油具有良好的抗肿瘤、抗炎、抗病毒作用，并且有研究表明吉马酮具有显著抑癌效果，但尚未对其抗癌作用机制展开深入研究。本文以肝癌 HepG2 细胞作为研究材料，通过Western blotting，RT-PCR，以及流式细胞检测等方法研究吉马酮对HepG2细胞的增殖影响，主要研究结果有以下几个方面：（1）吉马酮剂量和时间依赖性地抑制肝癌HepG2细胞增殖。通过MTT比色法进行测定，其结果表明吉马酮能够显著抑制HepG2细胞的增殖，并且药物浓度越高，时间作用越长，其抑制效果越明显。当浓度高于160μM时，其细胞抑制效果无明显统计学差异。药物处理48小时与处理24小时相比，没有呈现时间依赖性。（2）吉马酮对HepG2细胞处理后呈现G2/M期周期阻滞。不同浓度吉马酮处理肝癌HepG2细胞后，进行PI单染，通过流式细胞仪检测细胞周期后呈现G2/M期阻滞。运用RT-PCR和Western Blotting技术检测G2/M期关键基因CyclinB1和CDK1的表达情况，其结果表明吉马酮能够显著抑制CyclinB1和CDK1在转录和翻译水平上的表达。随着吉马酮浓度的提高，CyclinB1和CDK1的表达量下降，而且细胞周期阻滞在G2期，说明吉马酮通过调节CyclinB1和CDK1的表达来诱导细胞G2/M期阻滞从而抑制癌细胞增殖。（3）通过Western Blotting检测吉马酮对抑癌基因P53表达情况，并检测凋亡相关基因Bcl-2家族中的Bax、Bcl-2的影响，其结果显示吉马酮能够增强抑癌基因P53的表达，并促进促凋亡因子Bax的表达量上升，抗凋亡因子Bcl-2的表达量随药物浓度增加而下降。（4）通过Hoechst33258染色检测吉马酮对HepG2细胞发生凋亡的影响，结果表明着色细胞明显增多，并且通过PI/Annexin V双染流式检测吉马酮对HepG2细胞发生凋亡的影响，结果发现正常细胞比例明显下降，早期凋亡和晚期凋亡细胞比例明显上升，这些结果都说明吉马酮能够促进HepG2细胞发生凋亡。（5）通过Western Blotting检测JAKs/STATs信号通路中p-JAK2和p-STAT3的表达情况，结果表明p-JAK2和p-STAT3的表达量随着药物浓度的增加而下降，说明吉马酮能够能够有效抑制JAK2/STAT3信号通路的异常活化，从而达到抑制肿瘤发生的目的。通过以上结果表明，吉马酮具有显著的抑癌效果，并且副作用小，为肝癌的治疗提供了新的思路。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
1 绪论  10-27
  1.1 癌症简介  10-13
  1.2 肝癌简介  13-18
  1.3 细胞周期调控与肿瘤发生  18-21
  1.4 细胞凋亡分子机制与肿瘤发生  21-22
  1.5 细胞信号通路相关研究与肿瘤发生  22-24
  1.6 中药抑癌机理及吉马酮相关简介  24-26
  1.7 本课题主要研究内容  26-27
2 吉马酮对人肝癌 HepG2 细胞周期调控作用  27-46
  2.1 实验材料  27
  2.2 实验方法  27-38
  2.3 实验结果  38-44
  2.4 实验讨论  44-46
3 吉马酮对人肝癌 HepG2 细胞凋亡的影响  46-54
  3.1 实验材料  46
  3.2 实验方法  46-48
  3.3 实验结果  48-53
  3.4 实验讨论  53-54
4 吉马酮抑制人肝癌 HepG2 细胞增殖信号通路研究  54-58
  4.1 实验材料  54
  4.2 实验方法  54
  4.3 实验结果  54-56
  4.4 实验讨论  56-58
5 总结与展望  58-61
  5.1 课题总结  58-59
  5.2 课题展望  59-61
致谢  61-62
参考文献  62-66

吉马酮抑制肝癌HepG2细胞增殖机制研究

内容摘要

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