学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

YAP的转录调控子GABP与肝癌的相关性研究

作　者: 田静
导　师: 周大旺
学　校: 厦门大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: GABP YAP 肝癌
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
下　载: 3次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


Hippo信号通路是一条进化上高度保守的信号转导通路,主要参与调控器官大小以及肿瘤的形成。这条通路包含几个肿瘤抑制子和一个潜在的原癌基因。这条蛋白激酶的级联反应负调控着原癌基因YAP和它的同源物TAZ,抑制它们转录调控的活性。上游肿瘤抑制子失去功能的突变及下游YAP的过表达的情况已经在不同的人类癌症中被证实。我们课题组之前发现：YAP基因的表达是被一个Ets转录家族的成员GABP所调控的。GABP是Ets转录家族唯一一个多聚体复合物,它包含GABPα和GABPβ两种不相关的蛋白。GABPα通过它的Ets区域来调节DNA的结合,但是无转录功能。GABPβ包含转录激活区域、核定位序列和四个重复的锚定蛋白来调节它和GABPα异源二聚体的形成。GABP结合在YAP的启动子上激活YAP的转录。在中国,肝癌是一种非常常见的恶性肿瘤。但是它发病的分子机制到目前为止仍然不是很清楚。很多的研究都表明了YAP参与肝癌的产生过程,由于GABP是一个新发现的YAP的转录激活子,我们还不清楚GABP在肝癌的发生发展中的作用,于是我们决定探索GABP和肝癌产生的关系。根据之前的研究,在肝脏中条件性双敲除Mst1/Mst2(DKO)会导致肝细胞的大量增殖并且在两个月内发生肝癌。我们首先用实时定量PCR技术检测了DKO小鼠肝脏中YAP的mRNA水平,发现其有两到三倍的增加。接下来我们想要验证YAP的mRNA的水平增加与GABP调控的关系。我们分别选取了六周大和四个月大的DKO小鼠以及它们各自的野生型对照小鼠,并获取了这些小鼠的肝脏组织细胞全裂解液,进行了蛋白免疫印迹的实验。结果显示：两种年龄的DKO小鼠GABPα蛋白表达水平都有增加,而只有四个月发生肝癌的小鼠GABPβ蛋白水平增加。同时这种YAP水平和GABP水平的上调也用免疫组化的方法得到了验证。为了验证GABP的这种上调是否在人类肝癌中也是同样的表现,我们收集了60对人类肝癌样品组织来进行研究。通过蛋白免疫印迹实验和实时定量PCR的技术都验证了：与正常肝脏组织比起来,癌组织中GABP的表达是上调的,并且免疫组化的实验还证实了GABP在癌细胞核内的聚集和高表达。综上,GABP作为YAP的转录激活子确实参与了肝癌的发生发展,GABP很可能成为一个治疗人类肝癌以及其他癌症的靶点。GABP的表达水平也很可能成为一个肝癌或其他癌症的诊断、治疗和预后的判断新依据。

全文目录


摘要  10-12
ABSTRACT  12-14
第一章 前言  14-30
  1.1 Hippo信号通路的概述  14-15
  1.2 Hippo信号通路重要分子的介绍  15-23
    1.2.1 MST1/2  15-16
    1.2.2 WW45  16-17
    1.2.3 Lats1/2  17-18
    1.2.4 Mob1  18
    1.2.5 GABP  18-19
    1.2.6 YAP  19-21
    1.2.7 TAZ  21-22
    1.2.8 TEAD  22-23
  1.3 Hippo的上下游  23-24
    1.3.1 Hippo的上游  23
    1.3.2 Hippo的下游靶基因  23-24
  1.4 中国癌症的现状  24
  1.5 Hippo信号通路与各种癌症的相关性  24-29
    1.5.1 与卵巢癌  25-26
    1.5.2 与胃癌  26-27
    1.5.3 与非小细胞肺癌  27-28
    1.5.4 与肝癌  28
    1.5.5 与结直肠癌  28-29
    1.5.6 与乳腺癌  29
  1.6 立题背景  29-30
第二章 实验材料与仪器设备  30-44
  2.1 实验材料  30-31
  2.2 仪器设备  31-33
  2.3 实验方法  33-44
    2.3.1 临床肝癌样品取样方法  33-35
    2.3.2 肝脏组织的全细胞裂解液制备方法  35
    2.3.3 Bradford测蛋白浓度方法  35-36
    2.3.4 SDS-PAGE蛋白电泳  36-38
    2.3.5 免疫组化相关实验  38-41
    2.3.6 Trizol法提取RNA  41
    2.3.7 浓度的测量以及纯度的鉴定  41-42
    2.3.8 RNA的反转录  42
    2.3.9 cDNA的质量检测  42-43
    2.3.10 qPCR引物  43
    2.3.11 LivaK法分析目的基因表达量  43-44
第三章 实验结果  44-57
  3.1 MST1/2 DKO小鼠肝脏中YAP和GABP的表达情况  44-47
    3.1.1 MST1/2 DKO小鼠肝脏中YAP基因的mRNA的表达显著增加  44-45
    3.1.2 MST1/2 DKO小鼠肝脏中YAP和GABP的蛋白表达水平上调  45-46
    3.1.3 免疫组化分析表明DKO小鼠肝脏GABP和YAP表达量明显增加且细胞核定位增强  46-47
  3.2 人类肝癌临床样本库的建立及分析  47-50
  3.3 人肝癌样品中Hippo信号通路重要分子的表达情况研究  50-57
    3.3.1 人肝癌中Hippo信号通路调控异常并伴随YAP和GABP表达量增加  50-52
    3.3.2 癌组织和非癌组织的YAP,GABPα和GABPβ的比值均大于1  52-53
    3.3.3 与非癌变的组织相比,癌变区域的YAP、GABPα和GABPβ均增加且更集中在细胞核  53-55
    3.3.4 与非癌变组织相比，癌组织中YAP、GABP的mRNA水平上调  55-57
第四章 讨论与展望  57-59
参考文献  59-66
致谢  66

相似论文

  1. L-4-硝基苯丙氨酸等5种氨基酸衍生物的生物学作用研究,R96
  2. L-4-氟苯丙氨酸等6种氨基酸衍生物的生物学作用研究,R96
  3. YAP和Survivin在子宫内膜腺癌中的表达及与雌激素受体（ER）的关系,R737.33
  4. YAP和Survivin在卵巢浆液性乳头状囊腺癌中的表达及与血清CA125水平的关系,R737.31
  5. 维生素E琥珀酸酯联合5-氟尿嘧啶抗人肝癌细胞增殖作用的研究,R965
  6. 罗格列酮对肝星状细胞生物学特性的影响及其作用机制浅析,R96
  7. 消癌平注射液及其与奥沙利铂和重组人血管内皮抑素联合抗肝癌血管生成的实验研究,R965
  8. 肝细胞肝癌患者腹水潜在代谢标志物的研究,R735.7
  9. 体外诱导甲胎蛋白抗原肽表位肽AFP_（158-166）特异性T细胞的研究,R735.7
  10. 肝细胞肝癌患者尿液的代谢组学研究,R735.7
  11. 41例胆管细胞型肝癌的临床特点及其预后分析,R735.7
  12. microRNA-122在肝细胞癌中的表达及其功能学研究,R735.7
  13. 肝癌根治性切除术后乙肝再激活诱导慢加急肝衰竭发生及远期肝癌复发：附病例报道1例,R735.7
  14. 氢离子调节通道在肝癌细胞的表达及其功能作用,R735.7
  15. 正常肝细胞系Chang Liver和肝癌细胞系HepG2的定量蛋白质组学研究,R735.7
  16. 肝癌中Mena蛋白的表达及其临床意义,R735.7
  17. 39例原发性肝癌介入治疗的研究分析,R735.7
  18. 体外联合化疗对HepG2人肝癌细胞株CD90/CD44表达的影响及意义研究,R735.7
  19. 奥曲肽温敏凝胶对Hca-F细胞增殖及凋亡的影响及其在实体瘤内滞留时间的研究,R735.7
  20. SNCG的表达和定位及其在肝癌高低淋巴道转移细胞株中的差异,R735.7
  21. CLIC1基因对小鼠肝癌淋巴道转移影响的研究,R735.7

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com