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黄连素对人结肠癌细胞凋亡和迁移作用的研究

作　者: 陈彬彬
导　师: 胡天惠
学　校: 厦门大学
专　业: 微生物学
关键词: 结肠癌黄连素凋亡和迁移
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,严重威胁着人们的健康。结肠癌可以通过手术予以切除治疗,但治疗后多半会出现复发和转移,因此寻求到有效的抗癌药物成为结肠癌治疗的关键问题之一。黄连素(Berberine)又称小檗碱,是从黄连、黄柏等中药中提取的一种生物碱,临床上长期用于胃肠消化道疾病的治疗。研究发现,黄连素具有广泛的药理作用,近年来,它在抗肿瘤方而所具有的药理价值也逐渐被人们所关注和认可,且因其价格低廉、毒副作用小、药源丰富等优点而广受喜爱。研究证实,黄连素对多种肿瘤细胞都具有抑制作用,但其作用机制至今仍未研究透彻。本文以人结肠癌细胞系KM12C、KM12SM、KM12L4A为研究对象,以黄连素为药物处理方式,来探索黄连素对人结肠癌细胞凋亡和迁移作用的影响及其分子机制。在凋亡方面,我们首先采用MTT法测定人结肠癌细胞系KM12C、 KM12SM、KM12L4A的增殖存活率,结果表明黄连素对它们均具有明显的存活抑制作用,且具有剂量依赖关系。其次,我们采用Hoechst33342染色法观测这三种人结肠癌细胞系的形态学变化,用Annexin V/PI双染法检测它们的细胞凋亡率,并用Rhodaminel23染色经流式细胞仪检测三者的线粒体膜电位变化,来探讨经黄连素对人结肠癌细胞的凋亡作用。结果证实,黄连素可以有效诱导三种人结肠癌细胞系发生凋亡,且同样具有剂量依赖关系。同时,我们还采用Western Blot对KM12C细胞进行蛋白分析,来阐明黄连素诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机制。结果发现,黄连素可以降低Bcl-2、Caspase-3,-9和]PARP的表达,使PARP出现剪切化激活,并提高Bax和AIF的表达,使AIF和Cyt c从线粒体被释放。此外,黄连素还能上调Fas和p53,并下调p65、Ras、p38、Akt和β-catenin等蛋白的表达。最后,我们建立裸鼠模型,研究并证实了黄连素可以在裸鼠体内抑制KM12C细胞的增殖生长。在迁移方面,我们采用细胞划痕实验、免疫荧光技术和蛋白免疫印迹法,证明黄连素可以有效抑制人结肠癌细胞系的迁移作用,并影响Exo70在KM12C细胞内的表达定位,且这种抑制作用可能与下调迁移相关蛋白MMP-2,-9和Exo70有关。

黄连素对人结肠癌细胞凋亡和迁移作用的研究

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