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芥子中MITC体外抗白血病细胞的效应研究

作　者: 侯杰
导　师: 曹献英
学　校: 海南大学
专　业: 生物化工
关键词: 甲代烯丙基异硫氰酸酯 慢性骨髓性白血病细胞k562 芥菜种子
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


目的：自然界植物是一个巨大的资源宝库,从天然植物中寻找抗癌有效成分是发展战略重点之一。海南十字花科蔬菜芥菜里含有丰富的异硫氰酸酯,异硫氰酸酯的提取和活性研究一直被人关注。本文筛选芥菜种子中异硫氰酸酯对慢性骨髓性白血病细胞k562增殖抑制效果较好的成分,并研究其抑制慢性骨髓性白血病细胞k562增殖的作用机制。方法：从异硫氰酸酯3-(甲硫基)苯基异硫氰酸酯、3-氰基苯基异硫氰酸酯、4-氰基苯基异硫氰酸酯、甲代烯丙基异硫氰酸酯(methlallyl isothiocyanate,MITC)中,采用MTT比色法筛选对慢性骨髓性白血病细胞k562增殖抑制效果较好的成分。MTT、细胞集落形成实验和细胞生长率评价MITC体外对慢性骨髓性白血病细胞k562增殖抑制效应,采用细胞形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、细胞凋亡率检测和细胞周期分析探究MITC作用慢性骨髓性白血病细胞k562机理。结果：筛选得到对慢性骨髓性白血病细胞k562增殖抑制效果较好的成分为MITC。MTT、细胞集落形成和细胞生长率测定实验综合判断MITC体外抑制白血病细胞增殖效果,MITC作用慢性骨髓性白血病细胞k56224h、48h、72h、96h、120h的半数有效抑制浓度(IC50)分别为250.0、100.5、39.0、54.7、88.7μM,72h时的IC50为39.0μM<100μM,最高的抑制率达83.8±0.5%。MITC对慢性骨髓性白血病细胞k562和人胚肾细胞293T的增殖抑制作用具有选择性,对人胚肾细胞293T的抑制率小于慢性骨髓性白血病细胞k562。瑞式-姬姆萨染色、4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和罗丹明123染色观察显示MITC作用慢性骨髓性白血病细胞k562出现细胞皱缩,细胞核固缩凹陷,线粒体膜电位降低。琼脂糖凝胶电泳中慢性骨髓性白血病细胞k562的DNA未出现梯状条带。流式细胞术测凋亡率显示MITC未诱导慢性骨髓性白血病细胞k562凋亡,流式细胞术测细胞周期显示MITC将慢性骨髓性白血病细胞k562阻滞在G2期。结论：MITC对慢性骨髓性白血病细胞k562具有增殖抑制效果。根据琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术凋亡率检测,MITC未诱导慢性骨髓性白血病细胞k562凋亡。流式细胞仪检测细胞周期显示MITC诱导了慢性骨髓性白血病细胞k562G2期阻滞。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
1 绪论  9-19
  1.1 慢性骨髓性白血病临床治疗现状  9-10
  1.2 异硫氰酸酯的抗肿瘤作用及其机制  10-18
  1.3 本课题的研究内容及意义  18-19
2 异硫氰酸酯抗肿瘤活性的筛选  19-24
  2.1 试剂与仪器  19-20
    2.1.1 试剂  19
    2.1.2 主要仪器  19-20
  2.2 实验方法  20-21
    2.2.1 实验材料  20
    2.2.2 MTT增殖抑制实验  20-21
    2.2.3 数据分析  21
  2.3 实验结果  21-22
  2.4 讨论  22-23
  2.5 小结  23-24
3 MITC抑制慢性骨髓性白血病细胞k562增殖  24-34
  3.1 试剂与仪器  24
    3.1.1 药品与试剂  24
    3.1.2 主要仪器  24
  3.2 实验方法  24-26
    3.2.1 实验材料  24-25
    3.2.2 MTT细胞增殖抑制实验  25
    3.2.3 集落形成率测定  25
    3.2.4 细胞生长率测定  25-26
    3.2.5 数据分析  26
  3.3 实验结果  26-31
    3.3.1 MITC对慢性骨髓性白血病细胞k562抑制效果  26-29
    3.3.2 MITC对慢性骨髓性白血病细胞k562增殖的影响  29-31
  3.4 讨论  31-33
  3.5 小结  33-34
4 MITC作用慢性骨髓性白血病细胞k562机制探究  34-47
  4.1 试剂与仪器  34
    4.1.1 药品与试剂  34
    4.1.2 主要仪器  34
  4.2 实验方法  34-36
    4.2.1 实验材料  34-35
    4.2.2 细胞一般形态学观察  35
    4.2.3 细胞凋亡的检测  35-36
    4.2.4 细胞周期检测  36
    4.2.5 数据处理  36
  4.3 实验结果  36-44
    4.3.1 慢性骨髓性白血病细胞k562一般形态学变化特点  36-40
    4.3.2 细胞DNA电泳及凋亡率变化  40-42
    4.3.3 MITC介导慢性骨髓性白血病细胞k562周期阻滞  42-44
  4.4 讨论  44-46
  4.5 小结  46-47
5 结论  47-48
参考文献  48-54
硕士期间发表论文  54-55
致谢  55

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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