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秦皮素抗乳腺癌作用机制及其对免疫的调节作用

作　者: 霍洪楠
导　师: 谢明杰
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 微生物学
关键词: 秦皮素抗乳腺癌雌激素受体信号通路免疫调节
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 23次
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内容摘要

乳腺癌已成为女性发病率最高的恶性肿瘤，占女性全部恶性肿瘤发病的16.8%。中国人口协会发布的《中国乳腺疾病调查报告》显示：我国城市中乳腺癌的死亡率增长了38.91%，其发病呈年轻化趋势，严重威胁女性健康。雌激素受体（estrogen receptor，ER）介导的信号通路在乳腺癌的发生、发展、浸润和转移过程中发挥着重要作用。雌激素与雌激素受体结合后，不但可以通过基因组信号通路与靶基因上的雌激素反应元件结合，促进靶基因转录，还可以通过非基因组信号通路快速激活下游丝裂原活化蛋白激酶（migoten-activated protein kinases，MAPKs）和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase， PI3K)通路，影响细胞增殖与凋亡。乳腺癌的发生往往伴随着患者免疫系统低下，抗癌药物毒副作用不仅会影响患者免疫系统发挥正常生理功能，而且易产生多药耐药，给乳腺癌治疗带来一定的困难。中药具有毒副作用低、抗癌效果好、调节免疫力等功效，近年来成为研究的热点。香豆素是具有苯并α吡喃酮母核的化合物，具有抗癌、提高免疫力、抗病毒、抗氧化、抗骨质疏松、抗菌、抗心律失常等多种生物活性，药用价值广泛。秦皮素属于简单香豆素类化合物，是中药秦皮的有效成分，因其具有抗肿瘤、抗氧化等多种药理作用是近年来研究的热点。本文以MCF-7细胞为模型，系统的研究了秦皮素抑制MCF-7细胞ERα信号通路的作用机制，以体外分离的小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞为模型，初步研究了秦皮素对免疫的调节作用。具体研究结果如下：1.采用MTT比色法，检测秦皮素对MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的影响，结果显示，秦皮素以时间和剂量依赖方式抑制乳腺癌细胞的增殖。2.采用划痕法，检测秦皮素对MCF-7细胞迁移能力的影响。结果显示，秦皮素能明显抑制MCF-7细胞的迁移。3.采用MTT比色法和流式细胞仪分析，检测秦皮素对E2促MCF-7细胞增殖和抗凋亡作用的影响。结果显示，E2具有促进MCF-7细胞的增殖和抗细胞凋亡作用，秦皮素能抑制E2促MCF-7细胞增殖和抗细胞凋亡的作用，将E2诱导的MCF-7细胞阻滞在G0/G1期。4.采用Western blot方法，检测秦皮素对MCF-7细胞ERα蛋白、E2诱导的靶基因蛋白cyclin D1、Bcl-2及下游MAPK/Erk1/2和PI3K/Akt信号通路的影响。结果显示，秦皮素能降低ERα的表达量、抑制E2诱导的cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达，对下游非基因组信号通路MAPK/Erk1/2和PI3K/Akt均有一定的抑制作用，其中，对MAPK/Erk1/2信号通路抑制作用更明显，说明MAPK/Erk1/2信号通路是秦皮素抗乳腺癌作用的主要靶点。5.采用尼龙毛柱法分离小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞，利用MTT比色法，分析秦皮素对小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖的影响。结果显示，在一定浓度范围内，秦皮素能促进小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖。6.采用MTT比色法和中性红吞噬法，检测秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力和吞噬能力的影响。结果显示，秦皮素能提高小鼠腹腔巨噬细胞的代谢活力和吞噬能力。7.采用靶细胞幼生法，检测秦皮素对小鼠NK细胞活性的影响。结果显示，秦皮素能提高小鼠NK细胞的活性。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
1 引言  11-18
  1.1 乳腺癌与 ERα信号通路  11-13
    1.1.1 ERα结构与功能  11-12
    1.1.2 乳腺癌与 ERα信号通路相关研究  12-13
  1.2 免疫调节作用与肿瘤  13-15
    1.2.1 肿瘤免疫的相关研究  13-14
    1.2.2 中药对机体的抗肿瘤和免疫调节作用  14-15
  1.3 香豆素的研究进展  15-17
    1.3.1 秦皮素的结构  15-16
    1.3.2 秦皮素的生理功能  16-17
  1.4 本文研究内容  17-18
    1.4.1 秦皮素的抗乳腺癌作用机制研究  17
    1.4.2 秦皮素对机体免疫调节的研究  17-18
2 秦皮素的抗乳腺癌作用机制  18-33
  2.1 实验材料和仪器  18-21
    2.1.1 材料和试剂  18-19
    2.1.2 主要仪器  19
    2.1.3 主要试剂配制  19-21
  2.2 实验方法  21-24
    2.2.1 细胞培养  21
    2.2.2 MTT 法检测  21-22
    2.2.3 蛋白质免疫印迹  22
    2.2.4 秦皮素对 MCF-7 细胞和 MDA-MB-231 细胞增殖的影响  22
    2.2.5 秦皮素对 MCF-7 细胞迁移的影响  22-23
    2.2.6 秦皮素对 E2 促 MCF-7 细胞增殖的影响  23
    2.2.7 秦皮素对 E2 诱导的 MCF-7 细胞周期分布和凋亡的影响  23
    2.2.8 秦皮素对 MCF-7 细胞 ERα蛋白表达的影响  23
    2.2.9 秦皮素对 E2 诱导的 cyclin D1 和 Bcl-2 表达的影响  23
    2.2.10 秦皮素对 E2 诱导的 MAPK/Erk1/2 和 PI3K/Akt 信号通路的影响  23-24
    2.2.11 统计学分析  24
  2.3 结果与分析  24-30
    2.3.1 秦皮素对 MCF-7 和 MDA-MB-231 细胞增殖的影响  24
    2.3.2 秦皮素对 MCF-7 细胞迁移的影响  24-25
    2.3.3 秦皮素对 E2 促 MCF-7 细胞增殖的影响  25-26
    2.3.4 秦皮素对 E2 诱导的 MCF-7 细胞周期分布和抗凋亡作用的影响  26-27
    2.3.5 秦皮素对 MCF-7 细胞 ERα蛋白表达的影响  27-28
    2.3.6 秦皮素对 E2 诱导的 cyclin D1 和 Bcl-2 表达的影响  28-29
    2.3.7 秦皮素对 E2 诱导的 MAPK/Erk1/2 和 PI3K/Akt 信号通路的影响  29-30
  2.4 讨论  30-32
  2.5 小结  32-33
3 秦皮素对机体的免疫调节  33-41
  3.1 实验材料和仪器  33-34
    3.1.1 材料和试剂  33
    3.1.2 主要仪器  33
    3.1.3 主要试剂配制  33-34
  3.2 实验方法  34-36
    3.2.1 免疫细胞的分离与纯化  34-35
    3.2.2 秦皮素对小鼠 T、B 淋巴细胞增殖的影响  35
    3.2.3 秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力的影响  35
    3.2.4 秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响  35-36
    3.2.5 秦皮素对小鼠 NK 细胞活性的影响  36
    3.2.6 统计学分析  36
  3.3 结果与分析  36-39
    3.3.1 秦皮素对小鼠 T、B 淋巴细胞增殖的影响  36
    3.3.2 秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力的影响  36-38
    3.3.3 秦皮素对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响  38
    3.3.4 秦皮素对小鼠 NK 细胞活性的影响  38-39
  3.4 讨论  39-40
  3.5 小结  40-41
4 结论  41-43
  4.1 本研究结论  41-42
  4.2 本研究有待深入的内容  42-43
5 本研究创新点  43-44
参考文献  44-50
附录 A  50-51
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  51-52
致谢  52

秦皮素抗乳腺癌作用机制及其对免疫的调节作用

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