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Graves病肠道菌群的改变：初步探索性研究

作　者: 张晓薇
导　师: 苏本利
学　校: 大连医科大学
专　业: 内科学
关键词: Graves病肠道菌群 16s rRNA基因序列聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）
分类号: R581.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：通过研究Graves病患者与健康对照者粪便样品中的微生物种类及数量，探索Graves病患者肠道菌群结构是否存差异及差异菌群与该病发生发展的关系。方法：收集Graves病患者（14例）及健康对照者（13例）的新鲜粪便作为研究标本，根据年龄、性别匹配入组，用试剂盒提取粪便样品中的细菌基因组DNA。根据细菌的16S rRNA基因序列设计V3区通用引物，用聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳法（PCR-DGGE）观察两组肠道菌群的差异，找出差异条带、切胶回收、纯化、克隆后进行基因测序，将测序结果经NCBI GenBank对比后确定菌群种类。结果：变性梯度凝胶电泳后，Graves患者与健康对照组可见差异性条带，各组经Quantity One4.6.2软件分析发现：第一组实验样品中，Graves病组与健康对照组的肠道菌群多样性差异无意义（P>0.05），Dice相似系数：组间相似度小于两组组内相似度，后经聚类分析可见，除G8、G10样品外，Graves病组与健康对照组样品均分别聚为一类；第二组实验样品中，Graves病组与健康对照组的肠道菌群多样性差异无意义（P>0.05），Dice相似系数：组间相似度小于两组组内相似度，除G6样品外，其他样品均分别聚为一类；第三组实验样品中，Graves病组与健康对照组的肠道菌群多样性差异有意义（P<0.05），Dice相似系数：组间相似度小于两组组内相似度，后经聚类分析可见，除C11样品外，其他样品均分别聚为一类。从肠道菌群多样性分析来看，Graves病组与健康对照组的肠道菌群多样性无显著差异。聚类分析结果显示，Graves病组聚为一类，健康对照组聚为一类，说明健康对照组和Graves病组的肠道菌群丰度有所不同，确实存在差异。进一步发现Graves病人肠道优势菌群与正常健康组的有所不同，第一组G2～G5样品第24号条带在Graves病肠道菌群中优势明显，但在健康对照组中并未显示出优势性，将其切割回收测序，经GenBank比对后，鉴定为普雷沃菌属。结论：本研究发现肠道菌群的变化，可能与Graves病的发生存在密切的联系，普雷沃氏菌属数量的改变可能与Graves病相关，进一步的定量分析研究有待进行。

全文目录

摘要  7-8
英文摘要  8-10
前言  10-11
材料与方法  11-18
  1.材料  11-13
    1.1 研究对象  11-12
    1.2 实验样品  12
    1.3 主要器材  12
    1.4 主要试剂  12-13
  2.实验方法  13-18
    2.1 提取肠道微生物基因组 DNA  13-14
    2.2 基因组 DNA 的 OD 值及浓度测定  14
    2.3 16SrDNA 基因序列 V3 区 PCR 扩增  14-15
    2.4 DGGE 电泳  15-17
    2.5 差异条带的回收、纯化、克隆和测序  17-18
  3.数据统计分析与处理  18
  4.技术路线图  18
结果  18-27
  1. Graves 病患者与健康对照者的一般资料  18-19
  2. 肠道微生物总 DNA 纯度及浓度测定  19-20
  3. 16SrDNA V3 区 PCR 产物电泳检测  20
  4. Graves 病组与健康对照组肠道菌群 DGGE 图谱  20-26
  5. 差异条带的测序结果  26-27
  6. 差异条带基因序列的同源性对比分析  27
讨论  27-32
  1. 肠道菌群与 Graves 病的相关性  28-29
    1.1 肠道菌群的研究现状  28-29
    1.2 肠道菌群与免疫相关  29
  2. 本研究的结果及意义  29-30
  3. 本课题研究的优略评价  30-32
    3.1 本课题的优点  30-31
    3.2 本研究的不足与展望  31-32
结论  32-33
参考文献  33-36
综述  36-45
  参考文献  41-45
致谢  45-46

Graves病肠道菌群的改变：初步探索性研究

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