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新疆寒燥型慢性阻塞性肺疾病的系统研究

作　者: 高振
导　师: 哈木拉提·吾甫尔（Halmurat·Upur）
学　校: 新疆医科大学
专　业: 药理学
关键词: 慢性阻塞性肺疾病中医寒燥型动物模型生物学基础
分类号: R563.9
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：选择中医药治疗COPD的常用治法,在运用系统评价和Meta分析确定中医药治疗COPD有效和安全的基础上,开展基于流行病学调查的新疆COPD和基于文献研究的内地COPD中医发病特点的对比研究,揭示新疆COPD的中医证型分布特点,找到特殊证型。在此基础上建立新疆寒燥型COPD动物模型,并从实验层面揭示寒燥型COPD的生物学基础,为COPD的方域化防治提供借鉴和参考。方法：利用系统评价和Meta分析的方法评价小青龙汤治疗COPD发作期和中医贴敷治疗COPD稳定期的疗效性和安全性；利用中医证候流行病学调查的方法揭示新疆COPD的发病特点,并将其和基于文献的内地COPD的发病特点进行对比研究,揭示新疆COPD的特殊证型。基于病因模拟-慢性应激-生物表征-药物反证的思路,利用气管滴注弹性蛋白酶结合熏烟90天建立COPD模型,在此基础上复合寒燥应激建立寒燥型COPD模型,通过肺功能、肺部病理观察和生物表征判断模型的成功建立,利用ELISA、Real-time PCR、Western-blot等方法检测模型内在病理生理状态,揭示寒燥型COPD的生物学基础。结果：1.小青龙汤联合西药内服可提高单纯西药治疗的有效率[MD=3.91,95%CI (2.50,6.12), P<0.00001],小青龙汤内服联合有创通气有效率优于单纯有创通气组[MD=3.48,95%CI (1.45,8.32), P=0.005];对于Pa02的改善小青龙汤联合西药内服优于单纯西药组[MD=7.55,95%CI (1.41,13.68), P=0.02];对于PaCO2的改善小青龙汤联合西药内服优于单纯西药组[MD=-7.11,95%CI (-9.89,-4.33),P<0.00001],小青龙汤内服联合有创通气优于单纯有创通气组[MD=-6.66,95%CI (-8.79,-4.54), P<0.00001];对于FEV1的改善小青龙汤联合西药内服优于单纯西药组[MD=6.97,95%CI (3.60,10.34), P<0.0001]。2.所有加用中医贴敷组的有效率均优于未用中医贴敷组[MD=3.63,95%CI(2.84,4.65),P<0.00001]；对于FEV1,贴敷加西药组优于西药组[MD=0.29,95%CI(0.06,0.52),P=0.01]；对于FEV1/FVC,贴敷加中药优于中药组[MD=5.29,95%CI(2.52,8.07),P=0.0002]。3.1)内地COPD总体症状中出现频次较多的是咳嗽(313,22.88%)、咳痰(204,14.91%)、气喘(124,9.06%)、喘息(120,8.77%)、气短(91,6.65%)、哮鸣音(54,3.95%)、胸闷(45,3.29%)、乏力(40,2.93%)、纳差(38,2.78%)、气促(36,2.63%)、自汗(28,2.05%)、易感冒(27,1.97%)；而新疆COPD出现频次较多的症状是气短(317次,4.43%),咳嗽(310例,4.33%),气喘(288,4.02%),咽干口干(259,3.62%),神疲乏力(244,3.41%),咳痰(235,3.28%),胸闷(227,3.17%),健忘(226,3.16%),汗出(211,2.95%),咽痒(207,2.89%),畏寒(206,2.88%),乏力(206,2.88%)；其中“燥”的表现(咽干、口干、鼻燥)为259例,占到全部调查病例的63%；“寒”的表现(恶风、畏寒、形寒怕冷、腰背冷痛、肢冷)为164例,占到全部调查病例的40%。“寒”兼“燥”的表现同时出现的为110例,占到全部调查病例的27%。内地COPD病位证素以肺(237,59.55%)、脾(81,20.35%)、肾(74,18.59%)为主,病性证素以痰(163,35.21%)、气虚(92,19.87%)、热(89,19.22%)、瘀(65,14.04%)、湿(14,3.02%)为主。证型主要以痰热蕴肺(69,19.77%)、痰瘀阻肺(43,12.32%)、肺脾气虚(33,9.46%)、肺。肾两虚(24,6.88%)、痰浊阻肺(20,5.73%)为主；新疆COPD病位证素以肺(287,61.46%),肾(142,30.41%),脾(38,8.14%)为主；病性为气虚(120,16.37%),寒(117,15.96%),阳虚(109,14.87%),痰(98,13.37%),阴虚(90,12.28%)为主。2)新疆和内地COPD患者相比舌质、舌苔和脉象总体分布不同。内地舌质瘀斑和舌质淡的多于新疆(P<0.01,P<0.05)；新疆舌质紫的则多于内地(P<0.01)；新疆舌质少津的构成比2.84%,内地舌质少津的构成比0.56%,新疆多于内地,但无统计学差异；内地患者舌质出现的胖、齿痕、绛、青则本次调查中新疆患者未见。内地黄苔和腻苔多于新疆(P<0.01),白苔和薄苔新疆多于内地(P<0.01),本次研究内地患者出现的浊苔、厚苔,本次调查新疆患者则未见。内地滑脉多于新疆(P<0.01),沉脉和弱脉多于新疆(P<0.05)；涩脉、紧脉新疆多于内地(P<0.05),浮脉和细脉新疆多于内地(P<0.01)；另外内地患者出现的无力、濡、结代、大脉本次调查新疆患者未见,迟脉则仅在新疆患者中出现,且占到7.93%。4.1) COPD组及寒燥型COPD组肺部均有肺泡断裂融合、炎症细胞浸润和小支气管下平滑肌增厚现象,肺功能寒燥型COPD组的PEF、Ti、Te、EF50均高于对照组和COPD组,COPD组的Te和EF50高于空白对照组；2)COPD组及寒燥型COPD组体质量、体质量指数和Lee’s指数均小于对照组(P<0.01),且寒燥型COPD组此三项指标均小于COPD组(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。寒燥型COPD组每10g体质量每天进食量大于对照组和COPD组；3)寒燥型COPD组血清IL-1β含量高于空白对照组(P<0.05), IL-6、IL-8、TNF-α含量寒燥型COPD组均高于空白对照组(P<0.055、P<0.01、P<0.01), COPD组此三项指标也均高于空白对照组(P<0.01、P<0.05、P<0.05)；IL-10三组相比无统计学意义。寒燥型COPD组肺泡灌洗液IL-1p含量高于空白对照组(P<0.01), IL-6、IL-8、TNF-α含量寒燥型COPD组均高于空白对照组(P<0.01、P<0.01、 P<0.01), COPD组此三项指标也均高于空白对照组(P<0.05、P<0.05、P<0.05)；而且对于IL-6、IL-8寒燥型COPD组高于COPD组(P<0.05、P<0.05)；IL-10三组相比无统计学意义；4) MMP-2mRNA的表达量寒燥型COPD组和COPD组均高于空白对照组(P<0.01),且寒燥型COPD组高于COPD组(P<0.01)；对于MMP-9mRNA的表达量寒燥型COPD组和COPD组均高于空白对照组(P<0.01),且寒燥型COPD组高于COPD组(P<0.05)：而对于TIMP-1mRNA的表达量寒燥型COPD组和COPD组均高于空白对照组(P<0.01)；对于MMP-9mRNA/TIMP-lmRNA的比值寒燥型COPD组>COPD组>空白对照组；5)外周血中CD4+含量寒燥型COPD组低于空白对照组和COPD组(P<0.01)；CD8+含量寒燥型COPD组和COPD组均高于空白对照组(P<0.01),同时寒燥型COPD组高于COPD组(P<0.01)；CD4+/CD8比值寒燥型COPD组和COPD组均低于空白对照组(P<0.01),同时寒燥型COPD组低于COPD组(P<0.05)；6)对于AQP-5mRNA的表达量寒燥型COPD组和COPD组均低于空白对照组(P<0.01),且寒燥型COPD组低于COPD组(P<0.05)：对于MUC5ACmRNA的表达量寒燥型COPD组和COPD组均高于空白对照组(P<0.01),且寒燥型COPD组高于COPD组(P<0.01)；对于MUC5BmRNA的表达量寒燥型COPD组和COPD组均高于空白对照组(P<0.01),且寒燥型COPD组高于COPD组(P<0.05)；对于MUC5ACmRNA/MUC5BmRNA的比值COPD组<寒燥型COPD组<空白对照组；7)对于AQP-4、AQP-5蛋白的表达量寒燥型COPD组低于COPD组,COPD组低于空白对照组；对于MUC5AC、MUC5B的表达量寒燥型COPD组高于COPD组,COPD组高于空白对照组；8)大鼠模型肺部IL-8与TIMP-1、MMP-2、MUC5B相关,IL-8与MMP-9、MUC5AC密切相关,IL-8与AQP5负相关；IL-10与MMP-2、MMP-9负相关,IL-10与AQP5相关；TNF-a与MUC5AC密切相关；IL-6与TIMP-1相关,IL-6与AQP5负相关,IL-6与MMP-2、MMP-9、MUC5AC、MUC5B密切相关；TIMP-1与MMP-2、MMP-9相关；MMP-2与MMP-9、MUC5AC、MUC5B密切相关,MMP-2与AQP-5负相关；MMP-9与MUC5AC、MUC5B密切相关,MMP-9与AQP-5负相关；AQP5与MUC5AC、MUC5B负相关；MUC5AC与MUC5B密切相关。结论：1.发现中医内、外疗法治疗COPD均可显示出一定的疗效,但针对性不同,可与西医治疗实现优势互补。小青龙汤内服联合西医治疗COPD,可一定程度提高临床疗效,具体表现在增加有效率,提升Pa02、降低PaCO2上,同时可以某种程度提高患者FEVI。中医贴敷作为外治法如果联合内服药,则应根据患者表现选择相应的西药或中药联合。中医贴敷可以提高西药对FVC和FEV1改善的疗效,而中医贴敷不能提高中药对FEV1的改善程度。中医贴敷可提高中药对FEV1/FVC的改善,但对西药反而没有协同作用。2.指出寒燥诱导和加剧了COPD的发病,是新疆COPD异于内地COPD发病、方域化发病的重要病因病机特点之一。体现在证型上则寒燥型是新疆COPD发病的特殊证型和多发证型之一,体现在病机上则该证型“局部燥,全身寒”、“内燥外寒”,体现在程度上则寒燥型属COPD的一个早期证型。内地COPD发病主要是痰、热、瘀为标,肺、脾、肾虚为本,痰、瘀、虚贯穿COPD发作期和缓解期的各个环节,是病机的主要环节所在,症状表现以咳嗽、咳痰、气喘、气短为主,临床治疗中应该注意祛痰、活血、补气药物的应用。而新疆COPD的发病则以气虚、寒、阳虚为主,肺、肾、脾虚为本,症状表现以气短、咳嗽、气喘、咽干口干、神疲乏力为主。临床治疗中应该注意祛痰止咳、温肺润燥、补气药的应用。3.证实熏烟结合气道滴注弹性蛋白酶90天可以成功复制COPD模型,而在此基础上施加寒燥环境刺激建立新疆寒燥型COPD模型是可行的。寒燥型COPD模型表现为体型消瘦、体重下降、毛色黄无泽,气道内可闻及痰鸣音,体质量指数和Lee’s指数减小,饮水、进食量增加且食物利用率低；PEF和EF50值降低、Ti、Te值增高。具有温肺润燥功效的中药止嗽散加减方对改善该病证的症状及肺功能有明显效果。但鉴于本证病机,法当辛开温润,不可过用温热而助燥伤津。4.揭示寒燥通过COPD肺部AQP5mRNA和MUC5ACmRNA、MUC5BmRNA表达及其相应蛋白分泌的调节,降低了水通道蛋白的分泌,增加了黏蛋白的分泌,打破了水通道蛋白和黏蛋白的平衡,进而影响了气道黏液的功能状态,增加气道阻塞程度,促进以肺部炎症反应为主的肺部及全身炎症反应,扰乱了机体的免疫功能,导致机体肺气虚、卫外功能减弱,加重COPD的蛋白酶-抗蛋白酶失衡,进而促进和加重了COPD发病,可能是寒燥型COPD的重要生物学基础。

全文目录

摘要  9-13
Abstract  13-19
前言  19-24
第一部分中医药治疗慢性阻塞性肺病临床疗效及安全性的系统评价  24-43
  1 研究内容与方法  24-26
    1.1 研究对象  24-25
    1.2 内容与方法  25-26
  2 结果与分析  26-39
    2.1 小青龙汤治疗COPD发作期临床疗效的系统评价  26-32
    2.2 中医贴敷治疗COPD稳定期临床疗效的系统评价  32-39
  3 讨论  39-41
    3.1 小青龙汤治疗COPD发作期临床疗效的系统评价  39-40
    3.2 中医贴敷治疗COPD稳定期临床疗效的系统评价  40-41
  4 小结  41-43
第二部分新疆与内地慢性阻塞性肺病中医发病特点的对比研究  43-78
  1 研究内容与方法  43-48
    1.1 研究对象  43
    1.2 内容与方法  43-48
  2 结果与分析  48-71
    2.1 基于文献的内地COPD中医发病特点  48-59
    2.2 基于流行病学调查的新疆COPD中医发病特点  59-65
    2.3 新疆和内地COPD患者中医特点的对比  65-71
  3 讨论  71-76
    3.1 内地COPD症状-证素-证的研究  71-72
    3.2 新疆COPD的流行病学调查  72-73
    3.3 基于隐结构分析新疆COPD的病机特点  73-74
    3.4 新疆与内地COPD中医特点的对比研究  74-76
  4 小结  76-78
第三部分新疆寒燥型慢性阻塞性肺病模型的生物学基础研究  78-123
  1 实验材料与方法  78-88
    1.1 实验动物  78
    1.2 实验仪器  78-79
    1.3 实验药品和试剂  79-80
    1.4 实验方法  80-88
  2 结果与分析  88-110
    2.1 新疆寒燥型COPD动物模型的建立  88-99
    2.2 模型全身及肺部炎症反应状态  99-102
    2.3 模型蛋白酶抗蛋白酶失衡  102-103
    2.4 模型免疫功能状态  103-105
    2.5 模型呼吸道點液形成相关蛋白表达  105-109
    2.6 相关性分析  109-110
  3 讨论  110-121
    3.1 新疆“寒燥型”COPD模型的建立  110-112
    3.2 寒燥对慢性阻塞性肺病模型体重及饮食量的影响  112-114
    3.3 寒燥型COPD病证模型全身及肺部炎症反应状态研究  114-115
    3.4 寒燥型COPD病证模型蛋白酶-抗蛋白酶失衡的研究  115-117
    3.5 寒燥型COPD病证模型免疫功能状态研究  117-118
    3.6 寒燥型COPD呼吸道點液形成相关蛋白表达研究  118-120
    3.7 各指标间的相关性研究  120-121
  4 小结  121-123
结论  123-124
致谢  124-125
参考文献  125-142
综述一：慢性阻塞性肺疾病动物模型研究概况  142-152
  参考文献  149-152
综述二：黏蛋白和水通道蛋白间的相互作用及与COPD发病  152-161
  参考文献  157-161
攻读博士学位期间获得的学术成果  161-164
个人简历  164-168
导师评阅表  168

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