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慢性炎症影响气道上皮细胞纤毛摆动频率的机制研究

作　者: 李童斐
导　师: 胡清华
学　校: 华中科技大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 纤毛摆动频率慢性炎症气道上皮细胞香烟提取物
分类号: R562
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 7次
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内容摘要

慢性气道炎症是促进呼吸系统疾病发生发展的常见原因之一，而在慢性气道炎症中，往往会出现纤毛摆动频率的下降，使得气道出现疾患。本研究为了探讨慢性炎症时气道上皮细胞纤毛摆动频率下降的机制，通过大鼠原代气道上皮细胞培养，高速显微摄像，Elisa检测蛋白，JC-1探针检测膜电位以及DCFHDA检测活性氧几种方法，分别检测细胞纤毛摆动频率，LTB₄含量，线粒体膜电位以及活性氧几种指标。发现大鼠气道上皮细胞在受到香烟提取物+脂多糖刺激3h后，活性氧产生增加，且线粒体膜电位下降，细胞胆碱能亢进导致LTB₄含量上升，细胞纤毛摆动频率下降，有显著性差异（p<0.05）。在使用胆碱能抑制剂异丙托溴铵和香烟提取物+脂多糖共同作用后，细胞内LTB₄含量下降，纤毛摆动频率恢复，与香烟提取物+脂多糖组相比有显著差异（p<0.05）。同时在使用H₂O₂刺激细胞引起的胆碱能功能亢进和香烟提取物+脂多糖刺激相似，无显著变化（p>0.05）。而在使用过氧化物清除剂PEG-SOD与PEG-catalase和香烟提取物+脂多糖共同刺激后活性氧浓度以及LTB₄含量均下降，有明显差异（p<0.05）。由此说明，在气道上皮细胞慢性炎症时，细胞纤毛摆动频率的下降是由于线粒体损伤导致活性氧产生增多进而引起细胞胆碱能亢进所造成的。目的本实验旨在通过大鼠气道上皮细胞原代培养后使用香烟提取物+脂多糖刺激诱导细胞慢性炎症，探讨在慢性气道炎症时引起细胞纤毛摆动频率下降的机制。方法1．根据Davidson等方法加以改进，使用大鼠气道环贴块法培养大鼠气道上皮细胞。.2．利用高速显微摄像技术记录纤毛上皮细胞的高速纤毛摆动情况，并且利用图像灰度分析软件对纤毛摆动频率进行分析。3.利用Elisa检测细胞上清中分泌的LTB₄蛋白的含量。4.利用JC-1探针检测细胞线粒体膜电位。5.利用DCFHDA染料检测细胞活性氧。结果大鼠气道上皮细胞在受到香烟提取物+脂多糖刺激3h后，活性氧浓度增加，且线粒体膜电位下降，细胞胆碱能功能亢进导致LTB₄含量上升，细胞纤毛摆动频率下降，有显著性差异（p<0.05）。而活性氧的增多导致胆碱能亢进，进而导致纤毛摆动频率下降，在使用胆碱能抑制剂异丙托溴铵和香烟提取物+脂多糖共同作用后，细胞胆碱能功能亢进逆转导致LTB₄含量下降，纤毛摆动频率回升，有显著差异（p<0.05）。同时在使用H₂O₂刺激细胞时产生LTB₄的量和香烟提取物+脂多糖刺激相似，无显著变化（p>0.05）。而在使用活性氧清除剂PEG-SOD与PEG-catalase和香烟脂多糖共同刺激后活性氧浓度以及LTB₄含量均下降，有明显差异（p<0.05）。结论本实验研究成功复制了气道上皮细胞纤毛摆动的模型，阐述了慢性炎症时气道上皮细胞纤毛摆动频率下降的机制；由本实验研究结果说明，在气道上皮细胞慢性炎症时，细胞纤毛摆动频率的下降是由于线粒体损伤导致活性氧增多进而引起了细胞胆碱能亢进所造成的；同时也为研究纤毛摆动以及相关机制奠定理论基础。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-12
材料与方法  12-17
结果  17-25
讨论  25-28
参考文献  28-31
综述  31-41
  参考文献  37-41
致谢  41-42

慢性炎症影响气道上皮细胞纤毛摆动频率的机制研究

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