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以Rho/ROCK信号通路为靶点探讨麻杏芎葶合剂干预低氧性肺动脉高压大鼠模型的机制研究

作　者: 苏琛
导　师: 杨仁旭
学　校: 成都中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 麻杏芎葶合剂 低氧性肺动脉高压 Rho/ROCK信号传导通路
分类号: R544.1
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：通过建立低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠模型,探讨HPH形成的病理机制,观察具有宣肺逐瘀化痰法的麻杏芎葶合剂对HPH大鼠肺动脉压增高和血管结构重建的干预作用。并通过观察rock-1基因及蛋白在HPH大鼠肺组织中的表达水平,探讨Rho/ROCK信号传导通路对低氧性肺动脉高压的调控作用及麻杏芎葶台剂对低氧性肺动脉高压干预的分子机制。方法：Sprague-Dawley大鼠50只,雌雄各半,随机均分为正常组、HPH模型组和法舒地尔对照组、中药中剂量组、中药高剂量组。采用常压间断低氧法：(10±0.5)%O2,每天间断低氧6-8小时,每周缺氧6天,持续3周,建立大鼠HPH模型。每日放入低氧舱前给药：法舒地尔组腹腔注射10mg/(kg·d)盐酸法舒地尔注射液；中药中剂量组给予10g/kg-d麻杏芎葶合剂药液灌胃；中药高剂量组给予20g/kg·d麻杏芎葶合剂药液灌胃；正常组、HPH模型组按每100g体重1ml的生理盐水灌胃。在第21天测定各组大鼠平均肺动脉压力(mean pulmonary artery pressure, mPAP)、平均颈动脉压力(mean cervical arterial pressure, mCAP)、右心肥厚指数(right ventricular hypertrophy index, RVHI);观察光镜下肺小动脉的形态学改变,利用图像分析计算血管壁厚度占外径的百分比(WT%)、管壁面积占血管总面积的百分比(WA%)及管腔面积与管总面积的百分比(LA%)。测定肌型动脉、部分肌型动脉和非肌型血管所占比例及肌型肺小动脉中膜细胞核密度,观察肺血管结构重建情况。在证实HPH建模成功后,应用Real time PCR、Westen bolt等技术,以分子生物学方法测定各组大鼠肺组织中Rho激酶ROCK-1基因及蛋白的表达量,并测定各组大鼠肺组织中Rho激酶底物——MBS Thr-697位的磷酸化的表达情况。结果：(1)低氧21天后,HPH模型组大鼠mPAP、RVHI、WT%、WA%。LA%、肌型动脉、部分肌型动脉和非肌型血管所占比例、肌型肺小动脉中膜细胞核密度分别为(30.27±1.47)mmHg、(41.41±3.71)%、(55.23±3.07)%、(83.12±5.90)%、(16.88±1.74)%、(57.26±0.26)%、(17.46±2.78)%、(25.28±3.07)%、(9.41±1.90),与正常组(16.14±0.38)mmHg、(24.65±1.85)%、(33.41±3.65)%、(54.23±4.61)%、(45.76±3.23)%、(7.88±0.83)%、(25.76±2.05)%、(66.36±3.65)%、(7.05±1.37)比较均有差异(P均<0.05)。(2)低氧21天后大鼠mPAP、RVHI、WT%、WA%、LA%、肌型动脉、部分肌型动脉和非肌型血管所占比例、肌型肺小动脉中膜细胞核密度,法舒地尔组大鼠分别为(18.85±0.65) mmHg、(30.24±1.82)%、(38.15±2.96)%、(68.49±4.16)%、(31.50±3.53)%、(12.49±0.65)%、(36.58±2.55)%、(50.94±2.96)%、(13.13±2.61)；中药中剂量组大鼠分别为(21.61±0.38)mmHg、(28.19±1.67)%、(43.12±3.61)%、(65.49±4.15)%、(34.51±3.38)%、(20.71±0.21)%、(30.86±2.03)%、(48.43±3.61)%、(11.28±1.08)；中药高剂量组大鼠分别为(23.25±1.19)mmHg、(27.6411.55)%、(44.5313.76)%、(69.9014.22)%、(30.10±3.37)%、(20.77±0.19)%、(29.08±2.57)%、(50.15±3.76)%、(7.26±1.68)：以上三组分别与HPH模型组(30.27±1.47)mmHg、(41.41±3.71)%、(55.2313.07)%±(83.12±5.90)%、(16.88±1.74)%、(57.26±0.26)%、(17.46±2.78)%、(25.28±3.07)%、(9.41±1.90)比较均有差异性(P均<0.05)。(3)各组间mCAP比较未见显著性差异(P均>0.05)。(4)HPH模型组大鼠肺小血管管壁明显增厚；出现明显肺小动脉重构特征：内皮细胞连续性破坏,血管内皮呈立方形或柱状突向血管腔,甚至坏死脱落,中膜平滑肌细胞肥大、增生,管腔变小。与HPH模型组比较,法舒地尔干预组、中药中、高剂量组大鼠肺小血管管壁较薄,管腔变宽,血管平滑肌细胞的肥大、增生程度以及内膜的增厚明显减轻。(5)经低氧干预三周(21天)后,HPH模型组大鼠Rho激酶ROCK-1mRNA (2.680±0.061)与正常组大鼠(1.094±0.051)比较增高,差别有统计学意义(P<0.05)。法舒地尔组、中药中、高剂量组大鼠Rho激酶ROCK-1mRNA(1.66110.0.90)、(2.03510.078)、(1.96210.066)较正常组(1.094±0.051)均增高,差别有统计学意义(P<0.05),较HPH模型组大鼠(2.680±0.061)均降低,差别亦有统计学意义(P均<0.05)。(6)应用Western印迹法检测,HPH模型组ROCK-1蛋白表达较正常组增加(P<0.05),经法舒地尔、麻杏芎葶合剂干预过的法舒地尔组、中药中、高剂量组ROCK-1蛋白表达较正常组升高(P<0.05),较HPH模型组有不同程度降低(P<0.05)。(7)免疫印迹结果显示,HPH模型组P-MYPT1蛋白表达较正常组增加(P<0.05),经法舒地尔、麻杏芎葶合剂干预过的法舒地尔组、中药中、高剂量组P-MYPT1蛋白表达较正常组升高(P<0.05),而较HPH模型组有所降低(P<0.05)。结论：(1)麻杏芎葶合剂可以减轻低氧引起的肺动脉压力的增加,改善右心室肥厚,肺血管结构重建,对低氧性肺动脉高压有明确防治、干预作用。(2) Rho/ROCK信号传导通路与HPH的发生、发展密切相关。麻杏芎葶合剂对低氧性肺动脉高压的干预作用,与其能调控Rho/ROCK信号传导通路,抑制肺血管Rho激酶的合成和表达有关。(3)按照传统中医理论,麻杏芎葶合剂的立方、配伍及药理分析,可知麻杏芎葶合剂具有宣肺、肃肺、泻肺、化痰、利水、活血之功效,全方将宣肺逐瘀化痰法融为一体,切中低氧性肺动脉高压的中医辨证病机,有确切疗效。

全文目录


目录  2-4
缩略词简表  4-6
中文摘要  6-9
Abstract  9-13
前言  13-18
1 宣肺逐瘀化痰法对低氧性肺动脉高压大鼠的干预作用——血液动力学和病理学研究  18-45
  1.1 材料和方法  18-26
    1.1.1 实验材料  18-20
    1.1.2 实验方法  20-24
    1.1.3 统计学分析  24-25
    1.1.4 技术路线图  25-26
  1.2 结果  26-37
    1.2.1 大鼠的一般情况与死亡情况  26-27
    1.2.2 大鼠血流动力学mPAP和mCAP的变化  27-29
    1.2.3 大鼠右心室肥厚的变化  29-30
    1.2.4 大鼠肺小血管光镜下形态学的改变  30-32
    1.2.5 大鼠肺小血管形态学的图像分析结果  32-37
  1.3 讨论  37-44
    1.3.1 低氧性肺动脉高压形成机制  37-38
    1.3.2 动物模型造模评价  38-39
    1.3.3 阳性对照药选择  39
    1.3.4 低氧造模对肺动脉血管收缩及血管结构重建的影响  39-41
    1.3.5 麻杏芎葶合剂对肺动脉血管收缩及血管结构重建的影响  41-44
  1.4 小结  44-45
2 以Rho/ROCK信号通路为靶点宣肺逐瘀化痰法对低氧性肺动脉高压大鼠模型干预作用的分子机制研究  45-65
  2.1 材料与方法  46-56
    2.1.1 实验材料  46-50
    2.1.2 实验方法和步骤  50-55
    2.1.3 统计学分析  55-56
  2.2 结果  56-62
    2.2.1 Ct值分析  56-57
    2.2.2 PCR产物的特异性分析  57
    2.2.3 麻杏芎葶合剂对HPH大鼠肺组织ROCK-1 mRNA表达水平的影响  57-59
    2.2.4 麻杏芎葶合剂对HPH大鼠肺组织ROCK-1蛋白表达水平的影响  59-60
    2.2.5 麻杏芎葶合剂对HPH大鼠肺组织Rho激酶活性指标MBS磷酸化水平的影响  60-62
  2.3 讨论  62-64
    2.3.1 Rho/ROCK信号传导通路与HPH形成的相关性  62
    2.3.2 麻杏芎葶合剂通过Rho/ROCK通路干预HPH的机理  62-64
  2.4 小结  64-65
3 麻杏芎葶合剂对低氧性肺动脉高压干预作用的中医认识  65-74
  3.1 中医对低氧性肺动脉高压的认识  65-69
    3.1.1 病名文献回顾  65
    3.1.2 病因、病机与治法  65-67
    3.1.3 目前中医防治HPH药理研究现状  67-69
  3.2 麻杏芎葶合剂的配伍组成及药理研究  69-71
    3.2.1 麻杏芎葶合剂的立法及组方方义分析  69-70
    3.2.2 麻杏芎葶合剂的相关药理研究  70-71
  3.3 宣肺逐瘀化痰法对低氧性肺动脉高压的疗效及机理探讨  71-73
  3.4 小结  73-74
4 结论  74-75
5 特色与创新点  75-76
  5.1 研究内容新  75
  5.2 研究思路新  75
  5.3 研究方法和实验设计具有现代中医特色  75-76
6 问题与展望  76-77
致谢  77-78
参考文献  78-86
综述 Rho/ROCK信号通路在HPH发病机制中的研究进展  86-97
  1.1 低氧性肺动脉高压概述  86-88
  1.2 Rho/ROCK信号通路正成为PAH病因学研究的的一个新靶点  88-93
    1.2.1 Rho/ROCK信号通路概述  88-89
    1.2.2 Rho/ROCK信号通路与HPH相关性的研究现状  89-93
  参考文献  93-97
在读期间公开发表的学术论文、科研及获奖情况  97-98

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管（循环系）疾病 > 血压异常 > 高血压
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