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丹参活性化合物对蚕豆根尖细胞的遗传毒性研究

作　者: 王婧
导　师: 朱靖博
学　校: 大连工业大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 丹酚酸A 丹酚酸B 原儿茶醛蚕豆遗传毒性抗突变
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

丹酚酸A、丹酚酸B及原儿茶醛为丹参活性化合物，可通过自身的强抗氧化活性对机体产生保护作用。本文研究了丹酚酸A、丹酚酸B及原儿茶醛对蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响，探究其抗突变活性，为丹参活性化合物的开发应用提供参考依据。本文建立了适于蚕豆根尖细胞的改良彗星实验，应用改良彗星实验研究丹酚酸A、丹酚酸B及原儿茶醛(1¹000μg·mL^-1)对蚕豆根尖细胞DNA损伤的影响，以及它们对环磷酰胺（Cyclophosphamide，CP）(100μg·mL^-1)的拮抗作用；应用微核实验研究丹酚酸A、丹酚酸B及原儿茶醛(1¹000μg·mL^-1)单独染毒对蚕豆根尖细胞的遗传毒性影响，研究丹酚酸A、丹酚酸B及原儿茶醛(1¹000μg·mL^-1)与CP之间不同染毒秩序（方法Ⅰ：同时加入丹参活性化合物和CP；方法Ⅱ：先加入丹参活性化合物，后加入CP；方法Ⅲ：先加入CP，后加入丹参活性化合物）对细胞遗传物质的影响，探讨其抗诱变机制；以微核实验研究丹酚酸A、丹酚酸B、原儿茶醛与100μg·mL^-1Cr（Ⅵ）联合染毒对蚕豆根尖细胞遗传物质的影响。研究结果表明：（1）改良彗星实验效果稳定。（2）彗星实验证明：丹酚酸A(5⁵00μg·mL^-1)、丹酚酸B(1⁵00μg·mL^-1)与原儿茶醛(5¹000μg·mL^-1)对蚕豆根尖细胞DNA无损伤；丹酚酸A、丹酚酸B(1¹000μg·mL^-1)，原儿茶醛(5¹000μg·mL^-1)能够有效抑制CP的诱变作用。（3）微核实验证明：丹酚酸A、丹酚酸B、原儿茶醛(1¹000μg·mL^-1)无致突变作用；它们在各种机制下都能够抑制CP诱导细胞形成微核，促进细胞分裂，减少畸变染色体；丹酚酸A(100μg·mL^-1)、丹酚酸B(50μg·mL^-1)、原儿茶醛(1000μg·mL^-1)的抗突变活性最强。（4）丹酚酸A、丹酚酸B及原儿茶醛能够有效抑制Cr（Ⅵ）的诱变活性；它们抗突变活性大小为丹酚酸B>丹酚酸A>原儿茶醛。通过蚕豆根尖细胞彗星实验、微核实验可以初步进行化合物的安全评价：丹酚酸A、丹酚酸B及原儿茶醛在一定的剂量范围内无致突变性；可以推测化合物作用机制：丹参活性化合物通过其抗氧化活性可以直接使诱变剂失活，也可以抵抗诱变剂诱变作用，而且能够修复遗传损伤，但其具体的作用机制，还需进一步探讨。此外，本论文的研究结果可为进一步研究丹参在防治突变方面的应用提供参考依据。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-11
第一章文献综述  11-23
  1.1 丹参活性化合物简介  11-13
    1.1.1 丹酚酸 A  11-12
    1.1.2 丹酚酸 B  12
    1.1.3 原儿茶醛  12-13
  1.2 彗星实验的研究进展  13-18
    1.2.1 彗星实验发展史  14
    1.2.2 彗星实验方法简介  14-16
    1.2.3 彗星实验的应用  16-18
    1.2.4 彗星实验特点  18
  1.3 微核实验的研究进展  18-21
    1.3.1 蚕豆根尖细胞微核实验发展史  18-19
    1.3.2 微核形成因素及机理的研究  19-20
    1.3.3 蚕豆根尖细胞微核实验的应用  20
    1.3.4 蚕豆根尖细胞微核实验特点  20-21
  1.4 选题意义  21-22
  1.5 本论文的主要研究内容  22-23
第二章蚕豆根尖细胞彗星实验的建立  23-33
  2.1 实验材料和仪器  23-25
    2.1.1 实验材料与试剂  23-24
    2.1.2 试剂配制  24
    2.1.3 实验仪器  24-25
  2.2 方法  25-27
    2.2.1 蚕豆根尖细胞核的提取  25
    2.2.2 电泳胶片制作  25-26
    2.2.3 裂解条件优化  26
    2.2.4 解旋条件优化  26
    2.2.5 电泳条件优化  26-27
    2.2.6 中和  27
    2.2.7 银染条件优化  27
    2.2.8 镜检与数据处理  27
    2.2.9 CP 对蚕豆根尖细胞的遗传毒性  27
  2.3 结果与分析  27-31
    2.3.1 电泳胶片制作  27-28
    2.3.2 裂解时间的确定  28
    2.3.3 解旋时间的确定  28-29
    2.3.4 电泳条件的确定  29-30
    2.3.5 银染  30
    2.3.6 CP 对蚕豆根尖细胞 DNA 损伤的影响  30-31
  2.4 讨论  31-32
    2.4.1 实验条件对彗星实验结果的影响  31-32
    2.4.2 银染法的效果  32
  2.5 本章小结  32-33
第三章丹参活性化合物对蚕豆根尖细胞 DNA 损伤影响的研究  33-45
  3.1 实验材料和仪器  33-34
    3.1.1 实验材料  33
    3.1.2 主要实验试剂  33
    3.1.3 主要实验仪器  33-34
  3.2 实验方法  34-35
    3.2.1 催芽与蚕豆根尖细胞核的提取  34
    3.2.2 制片过程  34
    3.2.3 裂解、解旋、电泳、中和、染色  34-35
    3.2.4 图像处理和数据分析  35
  3.3 结果与分析  35-41
    3.3.1 丹酚酸 A 对蚕豆根尖细胞 DNA 损伤的影响  35-36
    3.3.2 丹酚酸 B 对蚕豆根尖细胞 DNA 损伤的影响  36-37
    3.3.3 原儿茶醛对蚕豆根尖细胞 DNA 损伤的影响  37-38
    3.3.4 丹酚酸 A 对 CP 诱导蚕豆根尖细胞 DNA 损伤的影响  38-39
    3.3.5 丹酚酸 B 对 CP 诱导蚕豆根尖细胞 DNA 损伤的影响  39-40
    3.3.6 原儿茶醛对 CP 诱导蚕豆根尖细胞 DNA 损伤的影响  40-41
  3.4 讨论  41-44
    3.4.1 评价丹酚酸 A、丹酚酸 B、原儿茶醛对蚕豆根尖细胞 DNA 损伤的影响  41-42
    3.4.2 评价丹酚酸 A、丹酚酸 B、原儿茶醛对 CP 诱导细胞 DNA 损伤的影响  42-43
    3.4.3 丹酚酸 A、丹酚酸 B、原儿茶醛抗 CP 诱变机制  43-44
  3.5 本章小结  44-45
第四章丹参活性化合物的抗突变活性研究  45-63
  4.1 材料与方法  45-46
    4.1.1 材料  45
    4.1.2 主要实验试剂  45-46
    4.1.3 主要实验仪器  46
  4.2 实验方法  46-47
    4.2.1 催芽  46
    4.2.2 染毒处理  46
    4.2.3 固定、水解、压片  46-47
    4.2.4 蚕豆根尖细胞微核、有丝分裂、染色体畸变的观察  47
  4.3 结果与分析  47-59
    4.3.1 丹酚酸 A 对蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  47-48
    4.3.2 丹酚酸 A 对 CP 诱导蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  48-51
      4.3.2.1 丹酚酸 A 对 CP 诱导的蚕豆根尖细胞微核率(MNR)的影响  48-49
      4.3.2.2 丹酚酸 A 对 CP 诱导的蚕豆根尖细胞有丝分裂指数(MI)的影响  49-50
      4.3.2.3 丹酚酸 A 对 CP 诱导的蚕豆根尖细胞染色体畸变率(CAR)的影响  50-51
    4.3.3 丹酚酸 B 对蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  51-52
    4.3.4 丹酚酸 B 抗 CP 诱导蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  52-55
      4.3.4.1 丹酚酸 B 对 CP 诱导的蚕豆根尖细胞微核率(MNR)的影响  52-53
      4.3.4.2 丹酚酸 B 对 CP 诱导的蚕豆根尖细胞有丝分裂指数(MI)的影响  53-54
      4.3.4.3 丹酚酸 B 对 CP 诱导的蚕豆根尖细胞染色体畸变率(CAR)的影响  54-55
    4.3.5 原儿茶醛对蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  55-56
    4.3.6 原儿茶醛对 CP 诱导蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  56-59
      4.3.6.1 原儿茶醛对 CP 诱导的蚕豆根尖细胞微核率(MNR)的影响  56-57
      4.3.6.2 原儿茶醛对 CP 诱导的蚕豆根尖细胞有丝分裂指数(MI)的影响  57-58
      4.3.6.3 原儿茶醛对 CP 诱导的蚕豆根尖细胞染色体畸变率(CAR)的影响  58-59
  4.4 结论与讨论  59-62
    4.4.1 评价丹酚酸 A、丹酚酸 B、原儿茶醛对蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  59-60
    4.4.2 评价丹酚酸 A、丹酚酸 B、原儿茶醛对 CP 诱导蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  60
    4.4.3 丹酚酸 A、丹酚酸 B、原儿茶醛抗 CP 诱变机制  60-62
  4.5 本章小结  62-63
第五章丹参活性化合物抗金属离子诱变作用的研究  63-70
  5.1 材料与仪器  63-64
    5.1.1 材料与实验试剂  63
    5.1.2 主要实验仪器  63-64
  5.2 实验方法  64-65
    5.2.1 染毒处理  64
    5.2.2 根尖制片  64
    5.2.3 统计学方法  64-65
  5.3 结果与分析  65-68
    5.3.1 丹酚酸 A 与 Cr(Ⅵ)联合染毒对蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  65-66
    5.3.2 丹酚酸 B 与 Cr(Ⅵ)联合染毒对蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  66-67
    5.3.3 原儿茶醛与 Cr(Ⅵ)联合染毒对蚕豆根尖细胞遗传毒性的影响  67-68
  5.4 讨论  68-69
    5.4.1 丹酚酸 A、丹酚酸 B、原儿茶醛抗 Cr(Ⅵ)诱变机制  68-69
    5.4.2 丹酚酸 A、丹酚酸 B、原儿茶醛抗 Cr(Ⅵ)诱变活性比较  69
  5.5 本章小结  69-70
第六章结论  70-71
参考文献  71-78
致谢  78-79
附录  79-82

丹参活性化合物对蚕豆根尖细胞的遗传毒性研究

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