学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

厚朴酚抗氧化及诱导H460肿瘤细胞自噬的机制研究

作　者: 李海波
导　师: 李建春
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 药学
关键词: 厚朴酚抗肿瘤抗氧化细胞凋亡细胞自噬
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
下　载: 79次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

厚朴,为木兰科植物厚朴(Magnolia officinalis Rend.)或凹叶厚朴(Magnoliabiloba Rehd.)的干燥干皮、枝皮或根皮,是我国重要的传统中药,一直用于治疗咳嗽、泻泄和过敏性炎症等。厚朴酚(Magnolol)是厚朴的主要有效成分(Fig.1-1),是从厚朴中分离出的具烯丙基取代的联苯酚类化合物。近年来随着现代医学的发展,发现厚朴酚具有抗炎、抗菌、肌肉松弛、抗肿瘤和抗氧化的作用。但有关其抗肿瘤和抗氧化的作用机制缺乏探讨。本文研究了不同浓度的厚朴酚抗氧化和诱导肿瘤细胞自噬的机制。本文采用3-(4,5-dimethylthiazol-2-y1)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)法测定不同浓度的厚朴酚对H460细胞生存的影响;Wright-Giemsa染色观察H460细胞的形态学改变;胞浆空泡用monodansylcadaverine(MDC)染色;DNA合成用DNA合成分析试剂盒分析;流式细胞术检测细胞周期改变;乳酸脱氢酶(LDH)活性分析测定细胞凋亡和坏死的比率;彗星实验观察DNA的损伤;免疫印迹法分析相关的蛋白表达。结果表明厚朴酚对DNA的合成具有双相调节作用,在低浓度(≤20μM)时对H460细胞的生长具有刺激作用,而在高浓度(≥40μM)时具有抑制作用。在对DNA合成的抑制作用的过程中伴随着胞浆内空泡的出现,这些空泡通过自噬标记物MDC和3-甲基腺嘌呤(3-MA)证明是发生了自噬现象。流式细胞术结果证明高浓度厚朴酚诱导H460细胞周期S期阻滞,这些结果提示高浓度厚朴酚早期通过自噬起到抗肿瘤的作用。LDH活性的分析结果表明高浓度厚朴酚是通过自噬诱导肿瘤H460细胞坏死,而不是通过诱导凋亡。此外,Akt和PTEN等也参与到增殖和自噬的过程,包括ClassⅠPI3K/PTEN/Akt途径。ClassⅢPI3K在这一过程中刺激了自噬现象的发生。因此,进一步的研究,厚朴酚可能作为一种具有新机制的潜在的抗癌药物。同时,我们还观察了低浓度厚朴酚保护H460细胞免受叔丁基过氧化氢(TBHP)刺激诱导的氧化应激损伤。20μM的厚朴酚可增加TBHP刺激后细胞的存活率。低浓度厚朴酚对细胞的保护作用明显强于N-乙酰半胱氨酸(NAC)。彗星实验检测证明厚朴酚作用后的DNA损伤明显减少。TBHP(0.15mM)作用24小时后的细胞生存能力减弱,并诱导细胞的凋亡。TBHP诱导的细胞毒性与细胞凋亡被20μM预作用的厚朴酚明显抑制或减轻。厚朴酚通过下调P53磷酸化和PTEN的表达及上调Akt的磷酸化来增强细胞的存活率。低浓度厚朴酚具有对抗TBHP诱导的单链DNA破坏(SSB)形成、细胞毒性和脂质过氧化的作用,通过调整P53磷酸化,PTEN和Akt磷酸化而发挥抗氧化功能,这种保护作用部分是通过依赖P53的作用机制。因此,不同浓度厚朴酚对H460细胞呈现双相作用,低浓度厚朴酚呈现刺激细胞增殖,抗氧化的作用。高浓度厚朴酚还可以诱导肿瘤细胞自噬,使肿瘤细胞发生细胞周期S期阻滞,而不是凋亡。上述研究为阐明厚朴酚作用机制,为新药研究提供先导化合物,及进一步的进行活性追踪、开发新的用途及临床应用提供理论依据。

全文目录

摘要  10-12
ABSTRACT  12-14
缩略语说明  14-15
第一章绪论  15-39
  1.1 厚朴酚生物活性研究进展  15-18
    1.1.1 抗氧化作用  15-16
    1.1.2 抗肿瘤作用  16
    1.1.3 对心脑血管系统的作用  16-17
    1.1.4 抗炎作用  17
    1.1.5 抗菌作用  17
    1.1.6 对神经系统的作用  17
    1.1.7 肌肉松弛作用  17-18
    1.1.8 其他作用  18
  1.2 自由基概论  18-22
    1.2.1 自由基的产生  18-19
    1.2.2 自由基对机体生命活动的影响  19-21
    1.2.3 自由基对生命大分子的损害  21
    1.2.4 自由基与疾病的关系  21-22
  1.3 细胞自噬与肿瘤程序性细胞死亡  22-31
    1.3.1 细胞自噬的形态特征  23
    1.3.2 自噬的相关分子调控机制.  23-24
    1.3.3 细胞自噬与凋亡之间的关系  24-25
    1.3.4 自噬在肿瘤发生发展过程中的作用  25-26
    1.3.5 肿瘤细胞中的高自噬活性  26
    1.3.6 自噬在抗肿瘤药物中的不同作用  26-27
    1.3.7 抗肿瘤药调节自噬和肿瘤细胞生存的分子调控  27-28
    1.3.8 具有新靶点的抗肿瘤药物与自噬  28-29
    1.3.9 结语  29-31
  参考文献  31-39
第二章厚朴酚诱导H460细胞增殖和自噬的双相作用  39-58
  2.1 实验材料与方法  39-45
    2.1.1 实验材料  39-40
    2.1.2 实验方法  40-45
  2.2 实验结果  45-51
    2.2.1 不同浓度的厚朴酚对H460细胞生长双相作用  45
    2.2.2 不同浓度的厚朴酚对细胞DNA合成有双相作用  45-46
    2.2.3 高浓度厚朴酚处理的细胞中没有伴随凋亡的发生  46-48
    2.2.4 高浓度厚朴酚诱导H460细胞发生自噬  48-50
    2.2.5 厚朴酚对蛋白表达的影响  50-51
  2.3 讨论  51-54
  2.4 小结  54-55
  参考文献  55-58
第三章厚朴酚对H460细胞氧化损伤作用保护机制研究  58-71
  3.1 实验材料与方法  58-61
    3.1.1 实验材料  58-59
    3.1.2 实验方法  59-61
  3.2 实验结果  61-65
    3.2.1 TBHP抑制H460细胞的存活  61-62
    3.2.2 TBHP诱导的细胞凋亡DNA片段化  62
    3.2.3 厚朴酚抑制TBHP诱导的H460细胞死亡  62-63
    3.2.4 厚朴酚能保护TBHP诱导DNA损伤  63-64
    3.2.5 厚朴酚能抑制脂质过氧化  64-65
  3.3 讨论  65-68
  3.4 小结  68-69
  参考文献  69-71
个人简历  71-72
致谢  72

厚朴酚抗氧化及诱导H460肿瘤细胞自噬的机制研究

内容摘要

全文目录

相似论文