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独活寄生汤方对CIA模型大鼠RANKL-RANK系统影响的实验研究

作　者: 杨晓娇
导　师: 张杰
学　校: 辽宁中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 独活寄生汤 类风湿性关节炎 OPG/RANK/RANKL轴
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：通过建立II型胶原蛋白诱导的SD大鼠关节炎模型，观察独活寄生汤对大鼠骨损伤的保护作用，并尝试通过OPG/RANKL/RANK通路来探讨其机制。方法：1.分组与造模：将60只清洁级SD大鼠先适应性喂养一周后，按照随机表法抽取10只大鼠作为空白组，剩余50只用II型胶原蛋白诱导的方法建立CIA大鼠模型，10天后，选取造模成功大鼠，按照随机对照表法分为模型组、独活寄生汤组、来氟米特片组、非甾体抗炎药组和激素组，每组10只。2.干预治疗与取材造模成功10天后，各组分别给予独活寄生汤、来氟米特片、洛索洛芬钠片和强的松灌胃，同时空白组、模型组大鼠则给予0.9%生理盐水灌胃。以上各组在给药30天后处死，取双后肢做一般形态学观察，并拍摄双后肢X线片，取双侧踝关节,放置在含多聚甲醛和焦碳酸二乙酯(DEPC)的固定液中固定备用。3.观察指标3.1一般情况观察：按多发性关节炎指数评分标准对各组大鼠关节炎指数进行评分。3.2影像学及病理学观察：足部及踝关节处采用X线放射学检测，观察关节受累情况。HE染色观察和比较大鼠足部及踝关节处的组织形态学的改变。3.2原位杂交技术检测：大鼠踝关节及周围组织骨保护素（OPG）、核因子-κB受体活化因子其配体（RANKL）的平均光密度值。结果：1.独活寄生汤对模型大鼠关节炎指数影响造模后与空白组相比，在关节炎指数方面都有显著差异（p<0.01）,说明II型胶原蛋白诱导大鼠造模成功。与模型组比较，独活寄生汤组关节发病数目明显减少，关节肿胀程度明显减轻，皮肤红肿、红斑不明显，关节变形程度减轻。与模型组在关节炎指数方面比较有明显差异(P <0.01)。2.独活寄生汤对CIA大鼠关节X线影像学的影响模型组与空白组之间的差异相对明显：可见关节间隙的变窄甚至消失，骨端骨质疏松，掌指关节融合。与模型组相比，独活寄生汤组大鼠的掌肢关节、指间关节狭窄程度较低，骨端骨质疏松不明显。与来氟米特组的X线影像学表现差异并不是非常显著。3.病理HE染色观察独活寄生汤组关节腔可见排列基本正常滑膜组织细胞伴有少量炎细胞浸润，可见滑膜有少许粗糙，未见坏死组织。与来氟米特组比较，病理改变基本一致。独活寄生汤组和来氟米特组大鼠滑膜增生不明显,滑膜中未见血管翳形成、软骨破坏、骨侵蚀,仅有少量淋巴细胞浸润。与模型组相比，有较大差异。4.检测大鼠踝关节OPG、RANKLmRNA的表达水平。治疗后，与模型组比较，独活寄生汤组能显著升高OPG的表达水平，而RANKL的表达水平明显降低（P <0.01），OPG与RANKL的比值升高（P<0.05）。结论：独活寄生汤减轻CIA大鼠关节炎的关节炎指数，从而减轻急性期症状；减少CIA大鼠滑膜组织的炎性细胞浸润,减少血管翳形成，从而延缓软骨破坏、骨侵蚀；独活寄生汤能升高CIA大鼠踝关节组织中OPGmRNA的表达，降低RANKLmRNA的表达，从而提高OPG与RANKL比值,并可能是通过此途径来达到其延缓骨破坏的作用。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-10
文献综述  10-25
1 实验材料  25-27
  1.1 实验动物  25
  1.2 实验室  25
  1.3 实验主要仪器设备  25
  1.4 实验主要药品及试剂  25-26
  1.5 药品制备及试剂配制  26-27
2. 实验方法  27-28
  2.1 实验分组  27
  2.2 CIA 模型大鼠的复制  27
  2.3 分组给药  27-28
3. 指标检测  28-32
  3.1 大鼠多发性关节炎指数评分  28
  3.2 影像学 x 线检测  28
  3.3 取双踝关节切片进行病理学观察  28-30
  3.4 各组大鼠踝关节组织中 OPG mRNA 表达水平的检测  30-31
  3.5 各组大鼠踝关节组织中 RANKLmRNA 表达水平的检测  31-32
4. 统计分析  32
5. 实验结果  32-40
  5.0 CIA 模型大鼠的评价  32-33
  5.1 CIA 模型大鼠多发性关节炎指数的评分  33-34
  5.2 大鼠踝关节软骨与滑膜组织切片 HE 染色  34-35
  5.3 大鼠踝关节组织 OPGmRNA 平均光密度值  35-36
  5.4 踝关节组织中 RANKLmRNA 平均光密度值  36-37
  5.5 大鼠踝关节组织中 OPG 与 RANKL 的比值  37-38
  5.6 影像学 x 线检测结果  38-40
讨论分析  40-46
结论  46-47
参考文献  47-53
致谢  53-54
个人简历  54

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