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霍山石斛多糖对巨噬细胞的免疫调节活性及其与结构特征的关系

作　者: 袁晨琳
导　师: 罗建平
学　校: 合肥工业大学
专　业: 植物学
关键词: 霍山石斛 多糖 巨噬细胞 免疫调节活性 构效关系
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 64次
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内容摘要


霍山石斛是传统的名贵中草药，本文通过DEAE-Cellulose阴离子交换层析和SephadexG-100凝胶色谱层析对霍山石斛粗多糖HPS进行了分离纯化，得到七种组分多糖HPS1-A、HPS1-B、HPS1-C、HPS1-D、HPS1-E、HPS1-F、HPS1-G，它们均不含核酸和蛋白质，其中仅HPS1-A具有三维螺旋构型。HPGPC、GC和甲基化分析表明七种组分多糖的相对分子质量Mw分别为6743.50、339.69、8.90、6.81、4.97、3.72、2.59kDa，它们均由葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）和甘露糖（Man）以不同的摩尔比按1,4-linkedD-Glcp、1,6-linkedD-Glcp、1-linkedD-Galp、1,4,6-linkedD-Glcp和1,3,6-linkedD-Manp连接方式组成。免疫细胞活性实验表明，七种组分多糖均能够显著促进小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和TNF-α，并增强巨噬细胞吞噬中性红的能力。但HPS1-B和HPS1-C对巨噬细胞分泌IL-1β的影响不显著，其它五种多糖仅在一定浓度范围内对巨噬细胞分泌IL-1β的活性有促进作用。各组分多糖免疫调节活性的主成分分析表明，不同组分多糖所引发的巨噬细胞的免疫应答各不相同，其中HPS1-B与HPS1-D免疫调节活性相对较好，HPS1-G的活性最差。论文进一步以多糖刺激下巨噬细胞分泌的NO、TNF-α、IL-1β含量及巨噬细胞吞噬活性为因变量，多糖结构特征为自变量，对各组分多糖免疫调节活性与结构特征的关系进行了多元线性回归分析。根据多元线性回归方程中的自变量的偏回归系数推测出各结构特征对多糖免疫调节活性的影响，定量地描述了霍山石斛多糖对巨噬细胞的免疫调节活性与结构特征之间的关系，为霍山石斛多糖对巨噬细胞作用机制的研究提供了理论指导。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-8
致谢  8-14
一 前言  14-31
  1.1 巨噬细胞概述  14-15
    1.1.1 巨噬细胞的来源及特性  14
    1.1.2 巨噬细胞的功能  14-15
  1.2 植物多糖对巨噬细胞免疫功能的影响  15-23
    1.2.1 对巨噬细胞增殖的影响  16-17
    1.2.2 对巨噬细胞吞噬功能的影响  17
    1.2.3 对巨噬细胞活性氧簇及NO产量的影响  17-18
    1.2.4 对巨噬细胞相关因子及趋化因子产量的影响  18-19
    1.2.5 对巨噬细胞其它免疫应答的影响  19-23
  1.3 植物多糖对巨噬细胞活性的调节机制  23-26
    1.3.1 CD14和CR3介导的信号通路  23-24
    1.3.2 SR介导的信号通路  24
    1.3.3 MR介导的信号通路  24-25
    1.3.4 Dectin-1介导的信号通路  25
    1.3.5 TLR4/2介导的信号通路  25-26
  1.4 多糖中LPS污染的检测  26-29
    1.4.1 多糖特异性法  26
    1.4.2 罗丹明追踪法  26-27
    1.4.3 多粘菌素B（PMB）屏蔽法  27
    1.4.4 鲎试剂检测法  27
    1.4.5 基因缺失小鼠法  27-29
  1.5 本文研究目的意义内容及技术路线图  29-31
    1.5.1 研究目的及意义  29
    1.5.2 研究内容  29-30
    1.5.3 主要技术路线  30-31
二 材料与方法  31-39
  2.1 实验材料及动物  31
  2.2 主要试剂  31-32
  2.3 主要仪器  32-33
  2.4 实验方法  33-39
    2.4.1 霍山石斛粗多糖的分级分离  33
    2.4.2 霍山石斛水洗糖HPS1的纯化  33
    2.4.3 多糖相对分子量及均一性的测定  33-34
    2.4.4 多糖糖醛酸含量的测定  34
    2.4.5 多糖紫外光谱分析  34
    2.4.6 多糖刚果红实验  34-35
    2.4.7 多糖单糖组成分析  35
    2.4.8 多糖甲基化分析  35-36
    2.4.9 巨噬细胞的分离纯化  36
    2.4.10 多糖的细胞毒性检测  36
    2.4.11 多糖对巨噬细胞NO、TNF-α和IL-1β含量的影响  36-37
    2.4.12 多糖对巨噬细胞吞噬作用的影响  37
    2.4.13 多糖中LPS污染的检测  37
    2.4.14 主成分分析  37-38
    2.4.15 多元线性回归分析  38
    2.4.16 数据处理  38-39
三 结果与讨论  39-74
  3.1 霍山石斛多糖HPS1的纯化及理化性质分析  39-43
    3.1.1 霍山石斛多糖HPS1的纯化  39
    3.1.2 七种组分多糖的相对分子量及均一性  39-41
    3.1.3 七种组分多糖的糖醛酸含量  41
    3.1.4 紫外光谱分析  41-42
    3.1.5 刚果红实验结果  42-43
  3.2 HPS1七种组分多糖的结构特性分析  43-47
    3.2.1 单糖组成分析  43-44
    3.2.2 甲基化分析  44-47
  3.3 HPS1七种组分多糖对巨噬细胞免疫活性的影响  47-58
    3.3.1 细胞毒性检测结果  47-48
    3.3.2 多糖对小鼠腹腔巨噬细胞NO合成的影响  48-51
    3.3.3 多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的影响  51-53
    3.3.4 多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β的影响  53-55
    3.3.5 多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性的影响  55-57
    3.3.6 多糖中LPS污染的检测结果  57-58
  3.4 HPS1七种组分多糖对巨噬细胞免疫调节活性的评价  58-62
    3.4.1 原始数据的选择及标准化处理  58-59
    3.4.2 主成分分析  59-62
  3.5 HPS1七种组分多糖构效关系分析  62-74
    3.5.1 多糖结构特征的主成分分析  62-66
    3.5.2 多糖构效关系的多元线性回归分析  66-74
四 结论与展望  74-76
  4.1 结论  74-75
  4.2 展望  75-76
参考文献  76-87
攻读硕士学位期间发表的论文  87-89

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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