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中药液对麻黄素成瘾小鼠大脑皮层组织结构及相关活性物质的影响

作　者: 陈琛
导　师: 俞诗源
学　校: 西北师范大学
专　业: 动物学
关键词: 麻黄素中药液小鼠大脑额叶抗氧化酶活性组织结构免疫组织化学
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：通过成瘾小鼠大脑重量、体重，小鼠大脑额叶组织结构及Bax蛋白、c-Fos、 TGF-β1表达和小鼠大脑超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)含量等指标的变化来探讨中草药对兴奋剂成瘾动物的戒断作用，并为研发无毒副作用和具有戒断作用的中药制剂提供理论基础。方法：选出生3-5天的昆明小鼠120只（体重5～7g，购于兰州大学基础医学院），随机分为对照组和4个实验组（即模型组、中药A组、中药B组及混合液组），每组24只仔鼠，实验组用递增剂量连续腹腔注射麻黄素15天（剂量依次为：1～5d=2g/L，6～10d=3g/L，11～15d=4g/L），每天两次(9:00am，16:00pm)，每次0.2ml，对照组注射等量的生理盐水，建立麻黄素动物模型。然后各实验组再分别用生理盐水、中药A、中药B及中药混合液对小鼠灌胃进行戒断，每天灌胃两次(9:00am，16:00pm)，每次0.2ml，连续灌胃15天，对照组灌胃等量的生理盐水，小鼠自由进食。检测灌胃5d、10d和15d各组小鼠的体重和脑重；比色法检测各组小鼠大脑SOD、CAT活性及MDA含量；用显微技术法观察小鼠大脑额叶组织结构的变化并测量额叶皮层厚度；用免疫组织化学法检测小鼠大脑额叶皮层Bax蛋白、c-Fos和TGF-β1表达的变化。结果：1.中药液影响麻黄素成瘾小鼠体重和脑重。模型组小鼠5~15d时，体重和大脑重量均低于对照组；中药灌胃戒断后，中药A组、中药B组和混合液组小鼠体重和大脑重量均高于模型组，但低于对照组。2.中药液影响麻黄素成瘾小鼠大脑抗氧化酶活性。模型组小鼠大脑SOD和CAT活性在戒断5~15d过程中先下降后上升，但始终明显低于对照组，与对照组相比差异极显著（P<0.01）。各中药组小鼠大脑SOD和CAT活性有不同程度的升高，但始终低于对照组高于模型组。中药B和混合液组5d，中药A组10d，小鼠大脑SOD活性与模型组相比，差异显著（P<0.05）；中药B、混合液组10d，中药B、中药A和混合液组15d，小鼠大脑SOD活性与模型组相比，差异极显著（P<0.01）。中药A、中药B组5d，小鼠大脑CAT活性与模型组相比，差异显著（P<0.05）；中药A组和中药B组10d、15d，混合液组5~15d，小鼠大脑CAT活性与模型组相比，差异极显著（P<0.01）。模型组小鼠大脑MDA含量在5~15d之间一直上升，始终明显高于对照组，差异极显著（P<0.01）。各中药组小鼠大脑MDA含量逐渐升高，但始终低于模型组。中药A组、中药B、和混合液组10d，中药A组15d，小鼠大脑MDA含量与模型组相比，差异显著（P<0.05）；中药B、混合液组15d小鼠大脑MDA含量与模型组相比，差异极显著（P<0.01）。3.中药液可缓解麻黄素成瘾小鼠大脑额叶皮层的萎缩。麻黄素成瘾后，模型组小鼠大脑额叶皮层厚度始终小于对照组，差异极显著（P<0.01）。与模型组相比较，各中药组小鼠大脑额叶皮层厚度有不同程度的增加，中药A组、中药B组5d、10d，混合液组5d小鼠大脑额叶皮层厚度有所增加，但差异不显著（P>0.05）；中药A组、中药B组15d和混合液组10d，小鼠大脑额叶皮层厚度和模型组相比较，差异显著（P <0.05）；混合液组15d，小鼠大脑额叶皮层厚度和模型组相比较，差异极显著（P <0.01）。4.中药液可减轻麻黄素成瘾小鼠大脑额叶皮层的损伤。模型组小鼠大脑额叶皮层组织结构不清晰，各层结构间的界线模糊，无法界定出各层细胞的结构。细胞分散，形态发生明显改变，细胞数目严重减少，排列极不整齐，外锥体细胞层、内颗粒层、内锥体细胞层和多形细胞层损伤最为明显。中药戒断后部分细胞形态得到恢复，各层结构的清晰度与前组相比有所提升。5.中药液影响麻黄素成瘾小鼠大脑额叶皮层Bax蛋白、c-Fos和TGF-β1的表达强度。模型组5~15d小鼠大脑额叶皮层Bax蛋白、c-Fos和TGF-β1阳性表达强度高于对照组，差异极显著（P <0.01）。中药灌胃戒断后，各组小鼠大脑额叶皮层中特异性蛋白的阳性表达较模型组都有不同程度的减弱：中药A组5d，小鼠大脑额叶皮层Bax蛋白、c-Fos以及TGF-β1阳性表达强度与模型组相比，差异显著（P <0.05）；其余各组阳性表达强度与模型组相比，差异极显著（P <0.01）。6.中药液影响麻黄素成瘾小鼠大脑额叶皮层Bax蛋白、c-Fos和TGF-β1的阳性表达细胞数目。模型组小鼠大脑额叶皮层Bax蛋白、c-Fos和TGF-β1阳性表达细胞数目高于对照组，差异极显著（P <0.01）。中药灌胃戒断后，各组小鼠大脑额叶皮层中阳性表达细胞数目较模型组都有不同程度的减少：中药B、混合液组10d，中药A、中药B组15d，小鼠大脑额叶皮层Bax蛋白阳性表达细胞数量与模型组相比，差异显著（P <0.05）；混合液组15d，小鼠大脑额叶皮层Bax蛋白阳性表达细胞数量与模型组相比，差异极显著（P <0.01）。中药灌胃戒断后，各组小鼠大脑额叶皮层中阳性表达细胞数目较模型组都有不同程度的减少：中药B、混合液组5d，中药B组10d，中药A组15d，小鼠大脑额叶皮层c-Fos阳性表达细胞数量与模型组相比，差异显著（P <0.05）；中药B组15d、混合液组10d、15d，小鼠大脑额叶皮层c-Fos阳性表达细胞数量与模型组相比，差异极显著（P <0.01）。混合液组5d，中药A、中药B组10d，小鼠大脑额叶皮层TGF-β1阳性表达细胞数量与模型组相比，差异显著（P <0.05）；混合液组10d，中药A、中药B、混合液组15d，小鼠大脑额叶皮层TGF-β1阳性表达细胞数量与模型组相比，差异极显著（P <0.01）。结论：麻黄素成瘾小鼠的体重、脑重均低于正常小鼠，机体抗氧化系统被破坏，其脑组织抗氧化酶活性下降，自由基和脂质过氧化物超过机体清除能力。另外，麻黄素作为一种外界有害因子，毒害小鼠大脑额叶皮层组织结构，干扰、减缓皮层发育。还能增强大脑额叶皮层Bax蛋白、c-Fos和TGF-β1的表达，使细胞凋亡程度增强，加速脑组织损伤。中药A、中药B含有多种微量元素和活性物质，能够提高机体免疫力，调节机体代谢，改善微循环和脑血流，保护神经细胞。其中的活性成分黄芪多糖、四甲基吡嗪、阿魏酸和黄酮等能够清除自由基、提高SOD活性、促进机体产生清除自由基的酶，具有良好的抗氧化功能，对超氧自由基、过氧化亚基、过氧化氢、羟自由基都有很好的清除作用，有效减少脂质过氧化损伤。中药A、中药B还能够抑制损伤组织中NO水平、拮抗Ca2+、减轻钙超载、抑制炎症反应以及减少细胞凋亡，并且具有抗焦虑和抑郁、中枢镇静和镇痛的作用。通过以上途径来减轻麻黄素对小鼠脑组织的损伤，使机体各项指标趋于对照组，提高机体抗氧化酶活性，降低脂质过氧化水平，减弱组织中Bax蛋白、c-Fos和TGF-β1的表达强度，修复脑组织损伤，减轻兴奋剂的戒断症状。

全文目录

中文摘要  9-12
ABSTRACT  12-16
缩写词表  16-17
第一部分前言  17-31
  1 兴奋剂成瘾  17-18
    1.1 成瘾的定义  17
    1.2 药物成瘾的分类  17
    1.3 药物成瘾的现状  17-18
  2 麻黄与麻黄素  18
    2.1 麻黄的历史与药用价值  18
    2.2 麻黄的现代研究  18
  3 麻黄素概况及研究进展  18-21
    3.1 麻黄素的药理及毒理作用  19-21
      3.1.1 对中枢神经系统的副作用  19-20
      3.1.2 对输精管、气管、胃肠道等平滑肌的影响  20
      3.1.3 对神经肌肉传递的作用  20
      3.1.4 对肝脏、肾脏、性腺的副作用  20-21
      3.1.5 对心血管系统的作用  21
    3.2 麻黄素的体内代谢  21
  4 自由基生物学  21-24
    4.1 自由基对生物体的作用  22-23
    4.2 自由基的清除  23-24
  5 Bax 蛋白与细胞凋亡  24-26
    5.1 细胞凋亡的信号通路  24-25
    5.2 Bax 蛋白促调亡机制  25-26
  6 c-Fos 与胞外刺激  26-27
    6.1 c-fos 基因结构特征  26
    6.2 c-fos 基因的表达及调控  26
    6.3 c-fos 基因的生物学功能  26-27
  7 TGF-β1 与细胞调节  27-29
    7.1 转化生长因子结构特征  27-28
    7.2 TGF-β基因的表达及调控  28
    7.3 TGF-β基因的生物学功能  28-29
  8 中药对药物滥用治疗的研究进展  29-30
  9 本文研究内容及意义  30-31
第二部分中药液对麻黄素成瘾小鼠体重、脑重的影响  31-35
  1 材料和方法  31-32
    1.1 主要仪器及试剂  31
    1.2 实验动物及给药  31
    1.3 体重、脑重的称量  31
    1.4 数据统计与处理  31-32
  2 实验结果  32-33
    2.1 小鼠行为的变化  32
    2.2 小鼠体重的变化  32-33
    2.3 小鼠大脑重量的变化  33
  3 讨论  33-35
    3.1 中药液对麻黄素成瘾小鼠行为和体重的影响  33-34
    3.2 中药液对麻黄素成瘾小鼠大脑重量的影响  34-35
第三部分中药液对麻黄素成瘾小鼠大脑 SOD、CAT 活性和 MDA 含量的影响  35-43
  1 材料和方法  35-38
    1.1 主要仪器及试剂  35
    1.2 实验动物与给药  35
    1.3 酶活性测定  35-37
      1.3.1 总蛋白测定  35-36
      1.3.2 超氧化物岐化酶（SOD）测定  36
      1.3.3 过氧化氢酶（CAT）测定  36-37
      1.3.4 丙二醛（MDA）测定  37
    1.4 数据统计与处理  37-38
  2 实验结果  38-40
    2.1 小鼠大脑 SOD 活性的变化  38
    2.2 小鼠大脑 CAT 活性的变化  38-39
    2.3 小鼠大脑 MDA 含量的变化  39-40
  3 讨论  40-43
第四部分中药液对麻黄素成瘾小鼠大脑额叶组织结构及厚度的影响  43-49
  1 材料和方法  43
    1.1 主要仪器及试剂  43
    1.2 实验动物与给药  43
    1.3 组织结构观察  43
    1.4 数据处理  43
  2 实验结果  43-47
    2.1 小鼠大脑额叶皮层厚度的变化  43-44
    2.2 小鼠大脑额叶皮层组织结构的变化  44-47
  3 讨论  47-49
第五部分中药液对麻黄素成瘾小鼠大脑额叶组织相关蛋白表达的影响  49-61
  1 材料和方法  49-50
    1.1 主要仪器及试剂  49
    1.2 实验动物与给药  49
    1.3 免疫组化观察  49
    1.4 体视学测量  49-50
    1.5 图像分析  50
    1.6 数据处理  50
  2 实验结果  50-58
    2.1 小鼠大脑额叶 Bax 蛋白表达的变化  50-52
    2.2 小鼠大脑额叶 c-fos 表达的变化  52-53
    2.3 小鼠大脑额叶 TGF-β1 表达的变化  53-58
  3 讨论  58-61
    3.1 麻黄素对成瘾小鼠大脑额叶皮层 Bax 蛋白表达的影响  58
    3.2 麻黄素对小鼠大脑额叶皮层 c-fos 表达的影响  58-59
    3.3 麻黄素对小鼠大脑额叶皮层 TGF-β1 表达的影响  59
    3.4 中药液对麻黄素成瘾小鼠大脑额叶皮层的影响  59-61
结论  61-62
参考文献  62-73
在学期间的研究成果  73-74
致谢  74

中药液对麻黄素成瘾小鼠大脑皮层组织结构及相关活性物质的影响

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