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杜仲木脂素对HepG2细胞甘油三酯聚集的影响

作 者: 李慧
导 师: 欧阳冬生
学 校: 中南大学
专 业: 药学
关键词: 甘油三酯 自由脂肪酸 脂肪酸β氧化 杜仲木脂素 脂质
分类号: R285
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 27次
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内容摘要


背景:高甘油三酯血症是心血管疾病剩留风险的主要危险因素之一,目前,临床上针对性控制血浆甘油三酯的药物种类较少,疗效和安全性存在缺陷,开发新的降甘油三酯药物具有重要意义。杜仲含有多种药理活性成分,具有降血压、降血脂、抗氧化、抗动脉粥样硬化、保护心肌等作用。杜仲木脂素是从杜仲中提取的有效部位。在治疗高血压疾病的临床应用中,杜仲木脂素可降低伴随有高血脂的患者的血浆甘油三酯。因此,研究杜仲木脂素对甘油三酯代谢的影响,阐明其机制,将为杜仲木脂素降甘油三酯功效的开发和临床应用提供理论依据。目的:研究杜仲木脂素对油酸孵育的HepG2细胞甘油三酯聚集的影响及其机制。方法:本课题采用HepG2细胞作为实验材料。在研究杜仲木脂素对HepG2生长的影响实验中,实验分为7组(空白对照组,15mg/L,37.5mg/L,75mg/L,150mg/L,300mg/L,600mg/L木脂素干预组)。采用MTT一步法检测A490值来评估细胞数目。在研究杜仲木脂素对OA孵育的HepG2细胞甘油三酯聚集的影响实验中,实验共分为6组:空白对照组;油酸(OA)孵育模型组(0.5mM OA);低浓度(0.5mM OA+15mg/L杜仲木脂素)、中浓度(0.5mM OA+30mg/L杜仲木脂素)和高浓度杜仲木脂素组(0.5mM OA+45mg/L杜仲木脂素);非诺贝特组(0.5mM OA+100μmo/L非诺贝特)。采用酶法测定细胞的甘油三酯含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测细胞PPARα、FAS、CPTlA的mRNA,蛋白质印迹法检测细胞FAS、CPT1A、 PPARα蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,15mg/L~300mg/L杜仲木脂素组细胞数目差异不具有统计学意义,无细胞毒性。而600mg/L杜仲木脂素组的细胞数减少,差异具有统计学意义(0.83±0.17vs1.00±0.08,P=0.011)。与空白对照组相比,用0.5mM的OA孵育的HepG2细胞内甘油三酯的含量增加(3.13±0.27vs1.00±0.00,P<0.001);中高浓度杜仲木脂素可以抑制HepG2细胞内甘油三酯的聚集(2.25±0.12νs3.13±O.27,P<0.000;2.42±0.13νs3.13±0.27,P<0.001).与正常对照组相比,模型组的CPTlA mRNA表达增加,差异具有统计学意义(1.62±0.07νs1.00±0.02.P<0.001);PPARα mRNA表达减少(0.85±0.10vs1.00±0.03,P=0.019);与模型组相比,低中高不同浓度的杜仲木脂素组可增加CPTlAmRNA的表达,并具有剂量依赖性,差异具有统计学意义(1.89±0.07,2.06±0.11,2.26±0.11νs1.62±0.07,P=0.013,P<0.001,P<0.001);PPARαmRNA表达增加,差异具有统计学意义(1.06±0.05,1.19±0.03,1.24±0.06νs0.85±0.10,P=0.002,P<0.001,P<0.001);与模型组相比,非诺贝特组可显著增加CPTlA.FAS和PPARα mRNA的表达,差异具有统计学意义(2.78±0.21νs1.62±0.07, P=0.001;1.53±0.15νs0.88±0.19,P<0.001;0.97±0.09νs0.85±0.10,P=0.046).与正常对照组相比,模型组的CPTlA蛋白表达增加(1.14±0.03νs1.00±0.01,P<0.001),PPARα表达增加(1.22±0.01vs1.00±0.03,P<0.001),差异具有统计学意义;与模型组相比,低中高不同浓度的杜仲木脂素组可促进CPTlA(1.42±0.04,1.90±0.01,2.04±0.04νs1.14±0.03, P<0.001,P<0.001,P<0.001).FAS(1.11±0.01,1.39±0.01,1.50±0.03νs1.00±0.01,P=0.011,P<0.001,P=0.011)和PPARα(1.32±0.03,1.52±0.01,1.83±0.04νs1.22±0.01,P<0.001)的蛋白表达,差异具有统计学意义;与模型组相比,非诺贝特组可增加CPTlA.FAS和PPARα的蛋白表达(2.51±0.10νs1.14±0.03,P=0.010,1.21±0.01νs1.00±0.01,P=0.002,1.33±0.02νs1.22±0.01,P<0.001).结论:,杜仲木脂素可以抑制OA孵育的HepG2细胞的甘油三酯聚集,其机制可能与激活PPARα,上调CPTlA,促进脂肪酸氧化有关。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略词中英文对照表  10-12
第一章 前言  12-15
  1.1 血脂异常  12
  1.2 肝脏与脂肪酸代谢  12-14
  1.3 PPAR-α与脂肪酸代谢  14
  1.4 杜仲与脂肪酸代谢  14-15
第二章 实验材料与方法  15-29
  2.1 实验材料及试剂、仪器及溶液配制  15-18
  2.2 HEPG2细胞的培养  18-19
  2.3 实验设计和方法  19-28
  2.4 统计学处理  28-29
第三章 结果  29-40
第四章 讨论  40-43
第五章 结论  43-44
参考文献  44-47
综述  47-62
  参考文献  57-62
致谢  62-63
在读期间的研究成果  63-64

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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