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青藤碱对IgA肾病大鼠蛋白尿及足细胞损伤的影响

作　者: 段文吕
导　师: 金劲松
学　校: 湖北中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: IgA肾病足细胞 α-actinin－4蛋白 Nephrin蛋白
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：观察青藤碱对IgA肾病大鼠的治疗作用及对足细胞损伤的影响,并探讨其可能的机制。方法：1将SPF级雄性SD大鼠60只,适应性喂养1周后,随机取10只作为正常对照组,将其余50只大鼠随机分为模型组10只,对照组10只,青藤碱低、中、高剂量组各10只,每只大鼠以牛血清白蛋白(BSA)(400mg/kg)隔日以40mg/ml灌胃8周,皮下注射四氯化碳0.1ml+蓖麻油0.5ml持续8周,于第6周时给予0.025%脂多糖0.05mg(0.2m1)尾静脉注射,连续3周。2青藤碱低剂量组(30mg/kg)、青藤碱中剂量组(60mg/kg)、高剂量组(120mg/kg)大鼠分别灌胃给予3mg/ml、6mg/ml、12mg/ml青藤碱混悬液10ml/kg;阳性对照组(20mg/kg)大鼠灌胃给予缬沙坦10ml/kg;模型组与正常组灌胃给予等体积生理盐水。于第9周开始干预治疗,每天1次,疗程为5周。3记录各组大鼠一般情况。收集第6、8、13周24小时尿液测24h尿蛋白定量(24hupq)及尿红细胞计数；第8、13周末次给药24小时后取血测血肌酐,尿素氮；13周末取肾组织光镜下观察组织病理变化；免疫荧光检测肾小球IgA沉积强度；电镜下检测肾小球超微结构变化；免疫组化检测Nephrin和α-actinin-4蛋白；免疫荧光检测Nephrin和α-actinin-4蛋白；RT-PCR检测Nephrin和口α-actinin-4mRNA。4全部数据采用SPSS16.0统计软件进行统计分析,实验数据以均数±标准差表示,多个样本比较用单因素方差分析；组间比较分析采用LSD法。结果：1一般情况：各治疗组大鼠毛色、饮食进水及活动度较模型组改善。2尿液检测：模型组、缬沙坦组、青藤碱各剂量组在造模后第6、8周24hupq、尿红细胞均明显高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01)。第13周末,与正常组比较,模型组24hupq、尿红细胞明显升高(P<0.01)；与模型组比较,各药物治疗组24hupq、尿红细胞明显减少(P<0.01)；与缬沙坦组比较,青藤碱各剂量组24hupq无显著差异(P>0.05),青藤碱各剂量组尿红细胞计数有显著差异(P<0.01),且青藤碱高剂量组优于青藤碱中、低剂量组(P<0.01)。3血液检测：第8、13周各组大鼠血肌酐与尿素氮无显著差异,(P>0.05)。4Nephrin和α-actinin-4检测：Nephrin和α-actinin-4免疫组化及免疫荧光平均光密度(IOD)显示,与正常组比较,模型组Nephrin和α-actinin-4平均光密度表达明显减少(P<0.01)；与模型组比较,各药物治疗组Nephrin和α-actinin-4的平均光密度表达明显升高(P<0.01)；与缬沙坦组比较,青藤碱高剂量组Nephrin平均光密度表达有明显差异(P<O.01),且青藤碱高剂量组Nephrin平均光密度表达高于青藤碱中、低剂量组(P<0.01),青藤碱各剂量组α-actinin-4平均光密度表达无显著差异(P>0.05)。5RT-PCR检测：与正常组比较,模型组Nephrin mRNA和α-actinin-4mRNA表达明显减少(P<0.01)；与模型组比较,各药物治疗组Nephrin mRNA和α-actinin-4mRNA表达明显升高(P<0.01)；与缬沙坦组比较,青藤碱各剂量组Nephrin mRNA和α-actinin-4mRNA表达无显著差异(P>0.05)。6肾脏病理：(1)光镜：PAS染色显示,与正常组比较,模型组大鼠系膜基质增多,各治疗组系膜基质较模型组不同程度改善。(2)免疫荧光：模型组大鼠IgA呈团块状沉积于系膜区,各治疗组IgA荧光强度均较模型组不同程度的减弱。(3)电镜：正常组大鼠基底膜均匀,足突清晰可见,基质均匀；模型组可见系膜基质明显增生,系膜区电子致密物沉积,可见细胞凋亡,足突广泛融合；各治疗组部分足突融合及少量电子致密物沉积。结论：本研究结果显示：青藤碱能够降低24小时尿蛋白定量,减少尿红细胞计数,改善肾脏病理变化,保护肾小球足细胞；提示其机制可能是青藤碱通过调节Nephrin mRNA和α-actinin-4mRNA的表达,提高Nephrin和α-actinin-4蛋白的表达等多种途径,减轻肾小球足细胞损伤,改善工gA肾病肾脏病理,减少IgA肾病大鼠的尿蛋白及尿红细胞,从而发挥治疗的作用。

全文目录

中文摘要  5-8
ABSTRACT  8-13
缩略词表  13-14
前言  14-16
材料与方法  16-22
  1 实验材料  16-17
  2 实验方法  17-21
  3 统计学方法  21-22
结果  22-29
  1 各组大鼠的一般情况观察  22
  2 各组大鼠尿红细胞计数  22-23
  3 各组大鼠24小时尿蛋白定量  23-24
  4 各组大鼠Bun、Scr  24
  5 各组大鼠免疫组化Nephrin、α-actinin-4  24-25
  6 各组大鼠免疫荧光Nephrin、α-actinin-4  25-26
  7 各组大鼠Nephrin和α-actinin-4 mRNA  26-28
  8 肾脏病理检测结果  28-29
讨论  29-36
  1 西医对IgA肾病的治疗  29
  2 中医对IgA肾病的认识  29-30
  3 青藤碱药理作用及临床应用的研究  30-31
  4 IgA肾病动物模型的探讨  31-33
  5 指标选择依据  33-34
  6 青藤碱的疗效作用机理的分析  34-36
结语  36-37
参考文献  37-41
附录  41-53
  1 文献综述  41-48
    参考文献  46-48
  2 附图  48-53
致谢  53

青藤碱对IgA肾病大鼠蛋白尿及足细胞损伤的影响

内容摘要

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