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加减薯蓣丸对VD大鼠行为及海马CA1区CREB表达干预的研究

作　者: 唐贤彪
导　师: 谭子虎
学　校: 湖北中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 加减薯蓣丸血管性痴呆 cAMP反应元件结合蛋白
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的观察VD模型大鼠行为学,海马CA1区脑组织形态学及CREB蛋白和基因表达变化。并探讨海马CA1区神经元损伤与VD的关系,以及加减薯蓣丸对上述变化的干预机制。方法将SPF级SD雄性大鼠40只随机分为正常对照组、假手术组、模型组、加减薯蓣丸治疗组,每组10只。采用双侧颈总动脉结扎缺血／再灌注加尾部放血法制备血管性痴呆模型,造模3天后分别给予生理盐水、加减薯蓣丸药液灌胃干预,持续8周。观察大鼠的一般情况；Morris水迷宫实验检测各组大鼠行为学变化；行为学检测结束后,用HE染色光学显微镜观察海马CA1区脑组织形态学改变；免疫荧光和Real-Time PCR技术检测海马CA1区CREB蛋白和mRNA表达水平。结果1.学习记忆能力检测：在定位航行实验期间,各组大鼠6天中逃逸潜伏期都有所下降,加减薯蓣丸组较模型组大鼠的逃逸潜伏期时间明显缩短(P<0.01),正常组和假手术组之间逃逸潜伏期时间比较差异不明显(P>0.05)；空间探索实验,以大鼠跨越平台次数为指标,加减薯蓣丸组较模型组大鼠跨越平台次数明显增多(P<0.01),假手术组与正常组之间大鼠跨越平台次数比较差异无统计学意义(P＜O.05)。2.大鼠海马CA1区脑组织HE染色：模型组大鼠海马CA1区大量神经元锥体细胞固缩不清晰且结构破坏、排列分布散乱,可见胞体肿胀、细胞核明显变形固缩、胞质深染、胞膜溶解、正常锥体细胞数量明显减少；加减薯蓣丸组大鼠海马CA1区神经元椎体细胞的损伤与模型组比较,正常锥体细胞数量明显增多且结构层次排列分布较清晰、整齐,细胞核形状规则、核仁清晰、染色质丰富、可见少量核固缩变性的神经元。假手术组和正常组之间比较差异不明显。3.大鼠海马组织石蜡切片免疫荧光技术检测大鼠海马CA1区CREB蛋白表达：以各组大鼠海马CA1区CREB阳性细胞相对吸光度为观测指标,加减薯蓣丸组较模型组吸收的荧光强度明显增加,胞浆染色较深,差异有显著性(P＜O.01),假手术组和正常组比较无明显差异(P＜0.05)。4.大鼠海马CA1区CREB基因表达的测定：各组大鼠海马CA1区CREB mRNA的表达,加减薯蓣丸组较模型组大鼠海马CA1区CREB mRNA表达明显增加,差异有显著性(P＜O.01),假手术组和正常组之间大鼠海马CA1区CREB mRNA比较无明显差异(P>O.05)。结论1.采用大鼠双侧颈总动脉结扎缺血/再灌注+尾部放血构建的大鼠VD模型稳定可靠,重复性好。2.VD模型大鼠学习和记忆功能障碍的形态学基础可能是海马神经元等结构的损伤和丢失。3.加减薯蓣丸有健脾补肾、填精益髓,活血通络、化痰开窍之功,可明显改善VD大鼠学习记忆能力、以及增加海马CA1区CREB mRNA和蛋白表达,减轻海马组织的病理改变,这可能是加减薯蓣丸治疗血管性痴呆的重要作用机制。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-11
本文常用缩略词简表  11-12
前言  12-18
  参考文献  15-18
第一部分 VD模型大鼠的构建及加减薯蓣丸对其学习记忆能力和海马组织形态学的影响  18-30
  1.1 实验材料和设备  18-19
  1.2 试验方法  19-23
  1.3 运用统计学方法对实验数据的统计学处理  23
  1.4 结果  23
  1.5 讨论  23-27
  1.6 小结  27
  参考文献  27-30
第二部分加减薯蓣丸对VD模型大鼠海马CA1脑组织CREB蛋白及基因表达干预的研究  30-45
  2.1 实验研究材料及实验设备  30-31
  2.2 试验方法  31-35
  2.3 数据统计学处理  35
  2.4 本研究实验结果  35-36
  2.5 讨论  36-42
  2.6 结论  42
  参考文献  42-45
结语  45-47
附录  47-62
  1. 本实验研究中的数据和图片结果(包含第一部分、第二部分)  47-51
  2. 本实验研究技术路线图  51-52
  3. 硕士期间发表的论文  52
  4. 文献综述研究  52-62
    参考文献  58-62
致谢  62

加减薯蓣丸对VD大鼠行为及海马CA1区CREB表达干预的研究

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