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红景天苷的抗衰老作用：口服红景天苷改善老龄大鼠免疫反应和增强谷氨酰半胱氨酸连接酶活性

作　者: 芦琳琳
导　师: 张士璀
学　校: 中国海洋大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 红景天苷大鼠免疫反应抗衰老谷氨酰半胱氨酸连接酶
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

众所周知，机体的免疫应答能力随着衰老而逐渐下降。红景天苷（Salidroside,SDS），是一种由中国传统中药红景天（Rhodiola L.）植物根茎中提取的抗氧化成分，一直以来以抗衰老，促进健康等功能而著称。然而，这种功能的内在机制却还不太明了。本研究明确证实（1）SDS口服吸收可使老龄Wistar雄性大鼠脾内CD3+T细胞和CD4+辅助性T细胞显著增加；（2）SDS能显著增强老龄大鼠体内迟发型超敏反应（DTH反应），该反应是由T细胞介导的免疫反应；（3）SDS口服吸收能在不影响体内免疫平衡的基础上，显著性增加抗KLH特异性的IgG，IgG1和IgG2α的数量。以上实验结果证明SDS具有对抗免疫衰老的作用，进而具有延年益寿的功效。因此，SDS可以被用来帮助老年个体提高对疫苗的反应，促进老年个体细胞和体液介导的免疫应答。谷氨酰半胱氨酸连接酶（Glutamate cysteine ligase, GCL）是谷胱甘肽（Glutathione, GSH）生物合成过程中的限速酶。许多数据显示衰老过程可能与机体内GCL水平的下降有关。本研究结果表明在老龄大鼠肝脏，心脏及脑组织中，GCL催化亚基（GCLc）和调节亚基（GCLm）基因的表达均显著下降，GCL酶活也显著降低。然而，通过口服红景天苷，则能够逆转上述状况，使老龄大鼠肝脏、心脏、脑中GCLc和GCLm基因的表达显著增加，GCL的活性显著增强，GCLC与GCLM亚基的蛋白含量也明显升高。除此之外，通过该实验结果，认为利用红景天苷进行营养干预，可有助于老年个体提高其抗氧化能力。综上，本实验结果表明在老龄大鼠中，红景天苷通过促进免疫应答，对抗免疫衰老，提高抗氧化能力，从而发挥其抗衰老作用。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-8
缩略语  8-16
第一章文献综述  16-51
  1. 红景天苷概述  16-24
    1.1 红景天  16-19
      1.1.1 红景天的形态与种类  16-17
      1.1.2 红景天的应用简史  17-18
      1.1.3 红景天的组成成分  18-19
    1.2 红景天苷  19-24
      1.2.1 红景天苷的理化性质  19-20
      1.2.2 红景天苷及红景天的现代药理作用  20-24
  2. 免疫功能在衰老过程中的变化  24-32
    2.1 非特异性免疫应答  25-26
    2.2 特异性免疫应答  26-27
    2.3 衰老过程中免疫功能的变化  27-28
    2.4 衰老与细胞免疫应答  28-31
    2.5 衰老与体液免疫应答  31-32
  3. 衰老与中枢淋巴器官  32-40
    3.1 概述  32-33
    3.2 衰老与骨髓  33-36
    3.3 衰老与胸腺  36-40
  4. 衰老与非特异性免疫应答  40-44
    4.1 衰老与巨噬细胞  40-42
    4.2 免疫老化与自然杀伤细胞（NK)  42-43
    4.3 衰老与树突状细胞（DC）  43
    4.4 衰老与吞噬细胞  43-44
  5. 谷胱甘肽（GSH）在衰老过程中的变化  44-47
    5.1 谷胱甘肽概述  44-45
    5.2 谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）与 GSH  45-47
  6. 本文的研究目的及技术路线  47-51
    6.1 研究目的  47-49
    6.2 技术路线  49-51
      6.2.1 红景天苷对老龄大鼠适应性免疫应答的研究路线  49-50
      6.2.2 红景天苷对老龄大鼠 GCL 的表达影响研究路线  50-51
第二章红景天苷对老龄大鼠适应性免疫应答的影响  51-69
  1. 前言  51-52
  2. 材料与方法  52-60
    2.1 实验材料  52-53
      2.1.1 实验动物  52
      2.1.2 实验试剂  52
      2.1.3 主要仪器  52-53
    2.2 红景天苷给药及免疫注射  53-54
      2.2.1 红景天苷给药方法  53
      2.2.2 免疫注射  53-54
    2.3 迟发性免疫应答的诱导  54-55
      2.3.1 KLH 皮内注射和大鼠耳朵厚度的测量  54
      2.3.2 DTH 应答的计算公式  54-55
    2.4 血液标本的采集和检测  55
      2.4.1 血液标本的采集  55
      2.4.2 血液学和生物化学指标的检测  55
    2.5 KLH 抗原特异性 IgG、IgG1、IgG2 的 ELISA 检测  55-57
      2.5.1 各种试剂的配制  55-56
      2.5.2 实验步骤  56-57
    2.6 脾细胞中主要 T 细胞亚群的流式细胞分析  57-59
      2.6.1 脾细胞的获取  57-58
      2.6.2 流式细胞分析  58-59
    2.7 脾细胞的增殖实验  59
      2.7.1 脾细胞的获取  59
      2.7.2 脾细胞的增殖分析  59
    2.8 数据的统计学分析  59-60
  3. 实验结果  60-67
    3.1 红景天苷对大鼠体重变化的影响  60-61
    3.2 红景天苷对大鼠血液学和生物化学指标的影响  61-63
    3.3 红景天苷对脾细胞中 T 细胞类型的影响  63-64
    3.4 红景天苷对脾细胞增殖的影响  64
    3.5 红景天苷对抗原特异性体液和细胞免疫应答的影响  64-67
      3.5.1 抗 KLH 特异性抗体分析  64-66
      3.5.2 DTH 反应  66-67
  4. 讨论  67-69
第三章红景天苷对老龄大鼠谷氨酰半胱氨酸连接酶表达的影响  69-99
  1. 前言  69-70
  2. 材料和方法  70-83
    2.1 实验材料  70-71
      2.1.1 实验动物  70
      2.1.2 实验试剂  70
      2.1.3 实验仪器  70-71
      2.1.4 实验所用软件  71
    2.2 大鼠肝脏、心脏及脑组织的获取  71-72
    2.3 荧光定量 PCR 分析不同组织中 GCLc 和 GCLm 基因的表达  72-78
      2.3.1 实验准备  72
      2.3.2 RNA 的提取  72-73
      2.3.3 cDNA 的获得  73-74
      2.3.4 cDNA 的质量检测  74-75
      2.3.5 Real-time PCR 分析  75-77
      2.3.6 数据分析处理  77-78
    2.4 Western-blot 检测肝脏、心脏及脑组织中 GCLC 和 GCLM 蛋白表达  78-82
      2.4.1 不同组织蛋白匀浆液的制备  78
      2.4.2 不同组织蛋白匀浆液中蛋白含量的测定  78-79
      2.4.3 不同组织中 GCLC 和 GCLM 蛋白表达情况检测  79-82
    2.5 大鼠肝脏、心脏及脑组织中 GCL 酶活性检测  82-83
      2.5.1 溶液配置  82
      2.5.2 酶活分析  82-83
  3. 结果  83-97
    3.1 GCLc 与 GCLm 的 mRNA 表达变化  83-93
      3.1.1 各组大鼠不同组织中总 RNA 的质量  83-85
      3.1.2 cDNA 质量检测  85-87
      3.1.3 引物的特异性检测  87-90
      3.1.4 GCLc 和 GCLm 基因在不同年龄大鼠及不同组织中的表达  90-91
      3.1.5 红景天苷对老龄大鼠不同组织中 GCLc 和 GCLm 基因表达的影响  91-93
    3.2 不同年龄大鼠 GCL 活性的变化  93-95
      3.2.1 GCL 活性在大鼠不同年龄及不同组织中的变化  93
      3.2.2 红景天苷对老龄大鼠不同组织中 GCL 活性的影响  93-95
    3.3 大鼠不同年龄 GCL 亚基蛋白含量的变化  95-97
      3.3.1 GCLC 蛋白含量在不同年龄段大鼠不同组织中的表达  95
      3.3.2 GCLM 蛋白含量在不同年龄段大鼠不同组织中的表达  95-96
      3.3.3 红景天苷对老龄大鼠不同组织中 GCLC 和 GCLM 蛋白含量的影响  96-97
  4. 讨论  97-99
结论  99-100
参考文献  100-115
作者简介  115-116
已发表的学术论文  116-117
致谢  117-119

红景天苷的抗衰老作用：口服红景天苷改善老龄大鼠免疫反应和增强谷氨酰半胱氨酸连接酶活性

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