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丹参酮ⅡA对TGF-β1诱导的HK-2细胞TGF-β1/Smads信号通路影响的实验研究
作 者: 赵斐
导 师: 秦英
学 校: 北京中医药大学
专 业: 中医内科学
关键词: 肾小管上皮细胞 TGF-β1 丹参酮IIA TGF-β1/smad信号通路
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2014年
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内容摘要
背景:肾间质纤维化(RIF)几乎是所有慢性肾脏疾病进展到终末期肾病的病理基础。多项研究表明,在肾间质纤维化形成的过程中,由肾小管上皮细胞转分化形成的成纤维细胞是重要的效应细胞,其过度增殖也导致细胞外基质累积增多,转化生长因子-β1(TGF-β1是目前公认的致纤维化因素,能够启动并且完成肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)。近年来发现的Smads蛋白是TGF-β家族信号从受体到核的细胞内转导分子,TGF-β/Smad信号转导通路在肾间质纤维化的发生发展中起重要作用,因此有效的切断TGF-β1的信号转导,是终止和减轻肾纤维化的关键。实验选用中药单体丹参酮ⅡA来源于活血祛瘀中药丹参,已证实具有抗肺纤维化、肝纤维化以及肾纤维化等方面的作用。但是其对肾间质纤维化的干预及其具体发生作用的阶段尚不完全清楚,需要进一步的实验研究进行验证。目的:在体外环境下,观察丹参酮ⅡA对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)在细胞增殖、细胞外基质分泌以及信号通路蛋白smad2、smad3以及smad7表达等方面的影响,来探讨丹参酮ⅡA在抗肾间质纤维化中的作用机制,为更好的应用于临床提供理论依据。方法:将体外正常培养的人肾小管上皮细胞分为以下5组:空白对照组、TGF-β110ng组、丹参酮ⅡA低剂量组(丹参酮ⅡA1μg/ml+TGF-β110ng)、丹参酮ⅡA中剂量组(丹参酮ⅡA5μg/ml+TGF-β15ng)、丹参酮ⅡA高剂量组(丹参酮ⅡA10μg/ml+TGF-β110ng)。1、倒置显微镜下观察各组细胞形态的变化2、MTT法检测各组细胞的增殖情况3、ELISA法检测各组细胞上清液中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的含量变化4、Western-blot法检测信号各组通路蛋白smad2、smad3、smad7的表达情况结果:1、倒置显微镜下观察:TGF-β110ng/ml组中肾小管上皮细胞形态发生改变,变成长梭形,类似于成纤维细胞,且细胞间的缝隙变大,丹参酮ⅡA各个剂量组作用后,细胞的形态趋向于正常,并且剂量越大变化越明显。2、MTT噻唑盐比色实验结果显示:TGF-β110ng/ml组能明显促进人肾小管上皮细胞的增殖,与空白对照组相比差异明显(P<0.05),但和丹参酮IIA(1、5、10μg/ml)共同作用后,其促细胞增殖作用受到明显抑制,与单纯TGF-β110ng/ml组相比差异明显(P<0.05)且呈明显的剂量效应关系。3、Elisa结果显示,TGF-β110ng/ml能促进HK-2细胞Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05),但是与丹参酮ⅡA共同作用后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达受到抑制,与单纯TGF-β110g/ml相比差异明显(P<0.05)。4、Western-blot结果显示TGF-β110ng组能促进smad2、smad3蛋白的表达,与对照组相比具有显著性差异,加入丹参酮ⅡA后smad2蛋白、smad3蛋白的表达量低于TGF-β110ng组,但是无明显的剂量效应关系。TGF-β110ng组能降低smad7蛋白的表达,丹参酮ⅡA不同剂量组作用后,均能增加其蛋白表达,但是无明显的剂量效应关系。结论:丹参酮ⅡA能够维持HK-2细胞形态的稳定性,阻止细胞向成纤维细胞方向发展,对于TGF-β1诱导的细胞增殖及促进Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌的作用,丹参酮ⅡA均发挥了明显的抑制作用。同时丹参酮ⅡA能够调控由TGF-β1介导的人肾小管上皮细胞信号通路的表达,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。
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全文目录
中文摘要 5-7 ABSTRACT 7-9 英文缩略词 9-10 第一部分 文献综述 10-29 综述一:TGF-β1/Smads信号转导通路与肾间质纤维化 10-21 1 肾小管上皮细胞间充质细胞转分化(EMT)与肾间质纤维化 10-11 2 与肾间质纤维化相关的细胞因子 11-15 2.1 转化生长因子(TGF-β) 11-12 2.2 结缔组织生长因子(CTGF) 12 2.3 血管内皮生长因子(VEGF) 12-13 2.4 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) 13 2.5 血小板源性生长因子(PDGF) 13 2.6 肝细胞生长因子(HGF) 13-14 2.7 骨形成蛋白7(BMP-7) 14 2.8 基质金属蛋白酶(MMPS) 14 2.9 其他 14-15 3 TGF/Smads信号转导通路与肾间质纤维化 15-17 3.1 Smads蛋白的结构 15-16 3.2 TGF/Smads信号通路的组成 16 3.3 TGF/Smads信号通路对肾间质纤维化的影响 16-17 4 结语 17 5 参考文献 17-21 综述二:中医药防治肾间质纤维化的研究进展 21-29 1 中医对肾间质纤维化的认识 21 2 单味中药的研究 21-24 2.1 黄芪 21-22 2.2 丹参 22 2.3 三七 22 2.4 大黄 22 2.5 冬虫夏草 22 2.6 红景天 22-23 2.7 川芎 23 2.8 黄芩 23 2.9 姜黄 23 2.10 黄蜀葵花 23 2.11 红花 23 2.12 斑蝥 23-24 3 中药复方的研究 24-26 3.1 六味地黄丸含药血清 24 3.2 黄芪当归合剂 24 3.3 止消通脉宁 24-25 3.4 益气活血降浊方 25 3.5 怡肾汤 25 3.6 大黄蟅虫丸 25 3.7 复方积雪草 25 3.8 丹参红景天合剂 25 3.9 抗纤灵 25-26 3.10 复方鳖甲软肝片 26 4 结语 26 5 参考文献 26-29 前言 29-30 第二部分 实验研究 30-48 实验一:丹参酮ⅡA对TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞增势影响的实验研究 30-35 1 材料和方法 30-32 1.1 材料 30-31 1.2 方法 31-32 2 结果 32-33 3 讨论 33-34 4 参考文献 34-35 实验二:丹参酮ⅡA对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞分泌细胞外基质的影响 35-40 1 材料和方法 35-36 1.1 材料 35-36 1.2 方法 36 2 结果 36-38 2.1 丹参酮ⅡA对Ⅰ型胶原的分泌的作用 36-37 2.2 丹参酮ⅡA对Ⅲ型胶原的分泌的影响 37-38 3 讨论 38 4 参考文献 38-40 实验三:丹参酮ⅡA对人肾小管上皮细胞TGF-β1/Smad信号通路的干预作用 40-48 1 材料和方法 40-44 1.1 材料 40-42 1.2 方法 42-44 2 结果 44-46 3 讨论 46-47 4 参考文献 47-48 结论 48-49 致谢 49-50 个人简历 50-51 附图 51
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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