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氧化低密度脂蛋白对大鼠肾小球系膜细胞的炎症性影响与活血化瘀法干预研究

作　者: 廖江铨
导　师: 杜金行
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 大鼠肾小球系膜细胞氧化低密度脂蛋白炎症性损害活血化瘀血府逐瘀汤
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

临床和实验研究表明,脂质代谢紊乱在肾脏疾病的发生发展中起重要作用,尤其是高脂血症。其中ox-LDL是重要的危险因子。血凝素样氧化低密度脂蛋白受体(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)是ox-LDL特异性受体,在产生动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)和血管炎性反应中发挥重要作用。近期的研究也证实,ox-LDL在AS病变过程中可促进炎症因子的表达,并伴随AS病变的始末。研究表明炎症因子如TNF-α在AS的发生和发展过程中起着重要的作用。本实验旨在探索ox-LDL对大鼠肾脏系膜细胞(RMC)的炎症性影响,证实ox-LDL可能通过特异性受体LOX-1介导而促进TNF-a的表达,初步探讨其可能的分子机制,为脂质过氧化导致炎症作用提供理论依据,并使用血府逐瘀汤含药血清进行干预,研究活血化瘀法对ox-LDL所致RMC炎症性损伤的干预作用。本论文包括文献综述和实验研究两部分。文献综述第一篇综述从动脉粥样硬化性肾动脉狭窄导致肾缺血性损害、高血压导致血管动脉粥样硬化性肾损害、高脂血症引起肾损害等方面,综述关于动脉粥样硬化性肾损害的相关研究进展。第二篇综述阐述了氧化低密度脂蛋白受体、氧化低密度脂蛋白对内皮细胞、平滑肌细胞、系膜细胞等组织生理病理作用的相关研究进展。实验研究目的：通过观察ox-LDL对RMC的损伤,明确ox-LDL对RMC的致炎症性作用,并使用血府逐瘀汤含药血清进行干预,探讨活血化瘀法对ox-LDL引起的炎症性损伤的干预作用与机制。方法：体外培育RMC,使用不同浓度ox-LDL刺激不同时间,使用MTT检测增殖情况,评估其损伤程度。根据MTT结果选择50μg/ml ox-LDL刺激RMC24h,分别使用辛伐他汀、血府逐瘀汤不同剂量含药血清及空白培养基干预24h,使用RT-PCR和Westernblot法检测各组TNF-α和LOX-1的mRNA和蛋白水平。结果：1.ox-LDL刺激RMC24小时,在1-30μg/ml范围内呈促进RMC生长,浓度大于30μg/ml后对RMC呈生长抑制效应,浓度越大,抑制效应越大。刺激RMC48小时,在1-20μg/ml范围内呈促进作用,大于20μg/ml后即开始产生抑制效应。刺激72小时组在各个浓度均显示出抑制效应,且随着浓度增加,抑制效果更强；2.50p g/m1ox-LDL刺激RMC24h,模型组TNF-α和LOX-1的mRNA和蛋白水平较空白组明显升高(P<0.05)；3.使用含药血清干预经50μg/ml ox-LDL刺激24h的RMC,TNF-α和LOX-1的蛋白水平较模型组有不同程度下降。与模型组相比,TNF-α蛋白的表达在辛伐他汀组及血府逐瘀汤高剂量组中均有所下降(P<0.01)。与模型组相比,LOX-1蛋白的表达在辛伐他汀组及血府逐瘀汤低剂量、高剂量组中均有所下降(辛伐他汀组、血府逐瘀汤高剂量组尺P<0.01,血府逐瘀汤低剂量组P<0.05)。4.使用含药血清干预经50μg/ml ox-LDL刺激24h的RMC,TNF-α和LOX-1的mRNA水平较模型组有不同程度下降。与模型组相比,TNF-αmRNA的含量在辛伐他汀组及血府逐瘀汤高、中、低剂量组中均有所下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,LOX-1mRNA的含量在血府逐瘀汤中、高剂量含药血清组中有所下降(P<0.05)。结论：ox-LDL对RMC增殖的影响呈浓度-时间依赖性,较低浓度和较短时间可促进增殖,较高浓度和较长时间可抑制增殖。ox-LDL可引起炎症性损伤,血府逐瘀汤含药血清可下调经ox-LDL刺激RMC后TNF-α的表达,同时抑制其LOX-1的表达,减轻ox-LDL所导致RMC的炎症性损害。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-10
英文缩略语  10-12
第一部分文献综述  12-41
  综述一、动脉粥样硬化性肾损害机制研究进展  12-26
    1 动脉粥样硬化性肾动脉狭窄导致肾缺血性损害  12-16
    2 高血压导致血管动脉粥样硬化性肾损害  16-19
    3 高脂血症  19-21
    参考文献  21-26
  综述二、氧化低密度脂蛋白的病理作用研究进展  26-41
    1 氧化低密度脂蛋白受体  26-28
    2 氧化低密度脂蛋白对内皮细胞的损伤  28-30
    3 氧化低密度脂蛋白对平滑肌细胞的作用  30-33
    4 氧化低密度脂蛋白与系膜细胞  33
    5 其他作用  33-34
    参考文献  34-41
第二部分实验研究  41-65
  实验一、氧化低密度脂蛋白对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响  41-47
    前言  41
    材料与方法  41-45
      1. 实验材料  41-43
      2. 实验方法  43-45
      3. 统计方法  45
    结果  45-47
      1 RMC形态  45
      2 MTT法结果  45-47
  实验二、血府逐瘀汤含药血清对氧化低密度脂蛋白导致大鼠肾小球系膜细胞损伤的干预作用  47-56
    前言  47-48
    材料与方法  48-53
      1 实验材料  48
      2 实验方法  48-53
      3 数据统计和分析  53
    结果  53-56
      1 Western blot结果  53-55
      2 RT-PCR结果  55-56
  讨论  56-60
    1 脂质代谢异常导致肾脏病变的机制  56-57
    2 细胞因子与脂质成分在肾脏损害中的作用  57-58
    3 ox-LDL对大鼠系膜细胞增殖影响的浓度-时间依赖性  58
    4 ox-LDL对大鼠肾小球系膜细胞的炎症性影响  58-59
    5 中医学对脂代谢紊乱致肾脏疾病的认识及血府逐瘀汤对ox-LDL引起的炎症性影响的干预作用与机制  59-60
  结论  60
  存在问题与展望  60-61
  参考文献  61-65
致谢  65-66
个人简介  66-68
附图  68-69

氧化低密度脂蛋白对大鼠肾小球系膜细胞的炎症性影响与活血化瘀法干预研究

内容摘要

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