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矽肺发生发展过程中CC16和SP-D变化规律研究

作 者: 王辉
导 师: 王瑞
学 校: 济南大学
专 业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 矽肺 二氧化硅 免疫组织化学 CC16 SP-D
分类号: R135.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要


【研究目的】探讨CC16SP-D矽肺发生发展过程中变化及作用,为矽肺早期诊断和早期治疗疗效评估提供依据。【研究方法】1.动物实验:选择SPF级雄性Wistar大鼠84只,体重160-180克。随机将大鼠分为对照组和染矽尘组,每组42只。染矽尘组采用非气管暴露法1ml浓度为100mg/ml矽尘悬液一次性的气管内注入,对照组注入灭菌0.9%NaCl。染尘后分别在第3d、7d、14d、21d、28d、60d这6个时间点各取7只大鼠处死,进行在体支气管肺泡灌洗,取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF,bronchoalveolarlavage fluid)。肺组织经多聚甲醛固定后石蜡包埋,切片,并做HE染色及免疫组织化学实验。观察肺组织病理变化及免疫组化阳性表达结果。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠BALF中CC16,SP-D浓度变化并做统计分析。2.人群研究:选取某金矿工人240名,其中Ⅰ期矽肺患者80人,Ⅱ期矽肺患者40人,接尘组80人,对照组40人。ELISA法检测血清中CC16及SP-D含量并进行分析比较。【研究结果】1染尘大鼠肺组织病理学观察对照组大鼠肺组织结构完整,未见明显病变;染矽尘组大鼠染尘3d肺组织出现充血,炎性细胞(中性粒细胞,巨噬细胞)浸润;7d充血明显,肺泡间隔增宽且水肿,炎性细胞浸润;14d肺泡间隔进一步增宽,大量巨噬细胞增生、聚集;21d肺泡腔萎缩,部分消失,肺泡间隔断裂,炎性细胞主要为淋巴细胞和浆细胞;28d肺泡结构大部分遭到破坏,成纤维细胞增生,胶原纤维增多,部分肺组织呈肺不张样改变;60d肺泡结构遭到严重破坏,肺广泛纤维化。2染尘大鼠肺组织免疫组化染色对照组大鼠Clara细胞形态正常完整,排列整齐,Clara细胞的胞浆中大量表达CC16蛋白。染矽尘3d组,与对照组相比无明显改变,Clara细胞胞浆内仍然高表达CC16蛋白;7d组细支气管Clara细胞受损,有少许细胞脱落;14d组细支气管受损,Clara细胞大量脱落,CC16蛋白表达减少;21d时,CC16蛋白表达明显减少,且Clara细胞受损加重,脱落明显,呈现破损状;28d组Clara细胞被成纤维细胞及胶原纤维细胞所取代;第60d时,CC16阳性表达极少,肺组织广泛纤维化。正常肺组织中的SP-D表达于肺泡Ⅱ型细胞和Clara细胞中,主要表达于肺泡Ⅱ型细胞。染矽尘组3d后,肺组织SP-D阳性细胞增多不明显;7d组,肺泡Ⅱ型细胞SP-D阳性表达增多,肺泡结构未有明显改变;14d时,肺泡结构遭到破坏,SP-D强阳性表达;21d时,SP-D表达减少,肺泡结构遭到破坏;第28d时,肺泡结构遭到大量破坏,SP-D阳性表达大量减少,细胞界限模糊;60d时,肺泡Ⅱ型细胞受破坏严重,肺组织广泛纤维化,SP-D阳性表达模糊不清。3大鼠BALF中CC16,SP-D含量变化染矽尘大鼠BALF中CC16含量在各时间点与对照组相比较,均有不同程度的降低,差异有统计学意义(P<0.05),并且随时间的延长,含量逐渐减少。染矽尘大鼠BALF中SP-D含量在3d、7d、14d、21d时间点较对照组均有不同程度的升高,28d、60d较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),呈先增加后降低趋势,在第14d时增高达高峰,此后开始降低。4人血清中CC16,SP-D含量变化与对照组相比,接尘组,矽肺Ⅰ期组、矽肺Ⅱ期组CC16及SP-D含量都明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),但接尘组、矽肺Ⅰ期组、矽肺Ⅱ期组之间CC16及SP-D含量差异无统计学意义(P>0.05)。【研究结论】1CC16和SP-D在矽尘引起的炎症反应过程中发挥重要调节作用,两者量的表达与肺组织病理改变密切相关。2矽尘诱导大鼠BALF和接尘工人血清中CC16含量的不断降低,检测CC16可反映矽肺早期肺组织中Clara细胞的损伤情况。3染矽尘大鼠肺组织及BALF中SP-D表达增加,且其量随时间延长而有规律变化;接尘人群血清中SP-D含量较对照组降低,提示检测SP-D含量可反映矽肺早期发生发展过程中矽尘对肺泡Ⅱ型细胞及肺泡结构的损伤程度。4CC16和SP-D对矽肺的早期诊断及治疗疗效评估有一定的辅助意义。检测两者在血清中的含量可辅助判断矽肺病情的严重程度。

全文目录


研究生导师及课题指导小组成员简介  5-6
目录  6-8
中文摘要  8-11
ABSTRACT  11-15
主要符号表  15-16
前言  16-21
技术路线  21-22
第一部分 染矽尘大鼠 CC16SP-D 变化的实验研究  22-39
  材料与方法  22-29
    1 材料  22-23
      1.1 实验动物  22
      1.2 主要试剂与仪器设备  22-23
    2 方法  23-29
      2.1 实验试剂配制  23-24
      2.2 实验动物分组  24-25
      2.3 实验动物染矽尘模型建立  25
      2.4 支气管肺泡灌洗液的收集  25-26
      2.5 大鼠 BALF 中 CC16、SP-D 测定  26
      2.6 大鼠肺组织病理学观察及免疫组织化学测定  26-28
      2.7 统计学分析  28-29
  结果  29-39
    1 不同时间点大鼠肺组织标本肉眼观察  29-30
    2 大鼠肺组织切片 HE 染色  30-32
    3 大鼠肺组织免疫组织化学染色结果  32-35
    4 大鼠 BALF 中 CC16 含量变化  35-37
    5 大鼠 BALF 中 SP-D 含量变化  37-39
第二部分 矽肺不同发展阶段 CC16、SP-D 变化的现场研究  39-44
  对象与方法  39-41
    1 研究对象  39
    2 主要试剂与仪器设备  39-40
    3 方法  40-41
      3.1 问卷调查  40
      3.2 血样收集  40
      3.3 血清 CC16、SP-D 测定  40
      3.4 统计学分析  40-41
  结果  41-44
    1 人群一般资料  41
    2 各观察组血清中 CC16、SP-D 含量比较  41-44
讨论  44-48
结论  48-49
参考文献  49-55
附表  55-56
综述  56-64
  参考文献  61-64
攻读硕士期间已(待)发表论文  64-65
致谢  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 劳动卫生 > 职业性疾病预防 > 生产性粉尘及尘肺
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