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矽肺发生发展过程中CC16和SP-D变化规律研究
作 者: 王辉
导 师: 王瑞
学 校: 济南大学
专 业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 矽肺 二氧化硅 免疫组织化学 CC16 SP-D
分类号: R135.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
【研究目的】探讨CC16和SP-D在矽肺发生发展过程中变化及作用,为矽肺早期诊断和早期治疗疗效评估提供依据。【研究方法】1.动物实验:选择SPF级雄性Wistar大鼠84只,体重160-180克。随机将大鼠分为对照组和染矽尘组,每组42只。染矽尘组采用非气管暴露法1ml浓度为100mg/ml矽尘悬液一次性的气管内注入,对照组注入灭菌0.9%NaCl。染尘后分别在第3d、7d、14d、21d、28d、60d这6个时间点各取7只大鼠处死,进行在体支气管肺泡灌洗,取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF,bronchoalveolarlavage fluid)。肺组织经多聚甲醛固定后石蜡包埋,切片,并做HE染色及免疫组织化学实验。观察肺组织病理变化及免疫组化阳性表达结果。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠BALF中CC16,SP-D浓度变化并做统计分析。2.人群研究:选取某金矿工人240名,其中Ⅰ期矽肺患者80人,Ⅱ期矽肺患者40人,接尘组80人,对照组40人。ELISA法检测血清中CC16及SP-D含量并进行分析比较。【研究结果】1染尘大鼠肺组织病理学观察对照组大鼠肺组织结构完整,未见明显病变;染矽尘组大鼠染尘3d肺组织出现充血,炎性细胞(中性粒细胞,巨噬细胞)浸润;7d充血明显,肺泡间隔增宽且水肿,炎性细胞浸润;14d肺泡间隔进一步增宽,大量巨噬细胞增生、聚集;21d肺泡腔萎缩,部分消失,肺泡间隔断裂,炎性细胞主要为淋巴细胞和浆细胞;28d肺泡结构大部分遭到破坏,成纤维细胞增生,胶原纤维增多,部分肺组织呈肺不张样改变;60d肺泡结构遭到严重破坏,肺广泛纤维化。2染尘大鼠肺组织免疫组化染色对照组大鼠Clara细胞形态正常完整,排列整齐,Clara细胞的胞浆中大量表达CC16蛋白。染矽尘3d组,与对照组相比无明显改变,Clara细胞胞浆内仍然高表达CC16蛋白;7d组细支气管Clara细胞受损,有少许细胞脱落;14d组细支气管受损,Clara细胞大量脱落,CC16蛋白表达减少;21d时,CC16蛋白表达明显减少,且Clara细胞受损加重,脱落明显,呈现破损状;28d组Clara细胞被成纤维细胞及胶原纤维细胞所取代;第60d时,CC16阳性表达极少,肺组织广泛纤维化。正常肺组织中的SP-D表达于肺泡Ⅱ型细胞和Clara细胞中,主要表达于肺泡Ⅱ型细胞。染矽尘组3d后,肺组织SP-D阳性细胞增多不明显;7d组,肺泡Ⅱ型细胞SP-D阳性表达增多,肺泡结构未有明显改变;14d时,肺泡结构遭到破坏,SP-D强阳性表达;21d时,SP-D表达减少,肺泡结构遭到破坏;第28d时,肺泡结构遭到大量破坏,SP-D阳性表达大量减少,细胞界限模糊;60d时,肺泡Ⅱ型细胞受破坏严重,肺组织广泛纤维化,SP-D阳性表达模糊不清。3大鼠BALF中CC16,SP-D含量变化染矽尘大鼠BALF中CC16含量在各时间点与对照组相比较,均有不同程度的降低,差异有统计学意义(P<0.05),并且随时间的延长,含量逐渐减少。染矽尘大鼠BALF中SP-D含量在3d、7d、14d、21d时间点较对照组均有不同程度的升高,28d、60d较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),呈先增加后降低趋势,在第14d时增高达高峰,此后开始降低。4人血清中CC16,SP-D含量变化与对照组相比,接尘组,矽肺Ⅰ期组、矽肺Ⅱ期组CC16及SP-D含量都明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),但接尘组、矽肺Ⅰ期组、矽肺Ⅱ期组之间CC16及SP-D含量差异无统计学意义(P>0.05)。【研究结论】1CC16和SP-D在矽尘引起的炎症反应过程中发挥重要调节作用,两者量的表达与肺组织病理改变密切相关。2矽尘诱导大鼠BALF和接尘工人血清中CC16含量的不断降低,检测CC16可反映矽肺早期肺组织中Clara细胞的损伤情况。3染矽尘大鼠肺组织及BALF中SP-D表达增加,且其量随时间延长而有规律变化;接尘人群血清中SP-D含量较对照组降低,提示检测SP-D含量可反映矽肺早期发生发展过程中矽尘对肺泡Ⅱ型细胞及肺泡结构的损伤程度。4CC16和SP-D对矽肺的早期诊断及治疗疗效评估有一定的辅助意义。检测两者在血清中的含量可辅助判断矽肺病情的严重程度。
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全文目录
研究生导师及课题指导小组成员简介 5-6 目录 6-8 中文摘要 8-11 ABSTRACT 11-15 主要符号表 15-16 前言 16-21 技术路线 21-22 第一部分 染矽尘大鼠 CC16、SP-D 变化的实验研究 22-39 材料与方法 22-29 1 材料 22-23 1.1 实验动物 22 1.2 主要试剂与仪器设备 22-23 2 方法 23-29 2.1 实验试剂配制 23-24 2.2 实验动物分组 24-25 2.3 实验动物染矽尘模型建立 25 2.4 支气管肺泡灌洗液的收集 25-26 2.5 大鼠 BALF 中 CC16、SP-D 测定 26 2.6 大鼠肺组织病理学观察及免疫组织化学测定 26-28 2.7 统计学分析 28-29 结果 29-39 1 不同时间点大鼠肺组织标本肉眼观察 29-30 2 大鼠肺组织切片 HE 染色 30-32 3 大鼠肺组织免疫组织化学染色结果 32-35 4 大鼠 BALF 中 CC16 含量变化 35-37 5 大鼠 BALF 中 SP-D 含量变化 37-39 第二部分 矽肺不同发展阶段 CC16、SP-D 变化的现场研究 39-44 对象与方法 39-41 1 研究对象 39 2 主要试剂与仪器设备 39-40 3 方法 40-41 3.1 问卷调查 40 3.2 血样收集 40 3.3 血清 CC16、SP-D 测定 40 3.4 统计学分析 40-41 结果 41-44 1 人群一般资料 41 2 各观察组血清中 CC16、SP-D 含量比较 41-44 讨论 44-48 结论 48-49 参考文献 49-55 附表 55-56 综述 56-64 参考文献 61-64 攻读硕士期间已(待)发表论文 64-65 致谢 65
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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 劳动卫生 > 职业性疾病预防 > 生产性粉尘及尘肺
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