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Wnt信号通路抑制蛋白SOST/DKK1在氟性骨损伤骨周化骨中的作用机制研究
作 者: 刘晓利
导 师: 刘克俭
学 校: 华中科技大学
专 业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 硬骨素 DKK1 核心结合因子α1 成纤维细胞 氟性骨损伤
分类号: R131
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
目的建立大鼠成纤维细胞原代培养模型,进行不同剂量及时段的染氟,观察氟对成纤维细胞增殖活性的影响,并观察不同浓度的氟在不同时间段对成纤维细胞Cbfal、ALP及Wnt/β-catenin信号通路抑制蛋白SOST和DKK1表达的影响,探讨Cbfal、ALP、SOST及DKK1在氟性骨损伤发生发展中的作用机制。方法将体外培养的成纤维细胞分为对照组和7个染氟剂量组(0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、20mg/L),采用MTT法观察成纤维细胞增殖活性的变化,采用ELISA法测定细胞上清液Cbfal、SOST和DKK1的含量,用AMP法测定ALP的含量。结果MTT结果可见,与对照组相比,氟离子浓度为0.0001mg/L、0.001mg/L和0.01mg/L的组,其成纤维细胞增殖活性增加;氟离子浓度为0.1mg/L的剂量组,除96h组外,其他时间段与对照组比较均表现为增殖活性增加;氟离子浓度为1mg/L的剂量组,成纤维细胞增殖活性在12、24、48h时间段与对照组相比增殖活性增加,96h与对照组相比比增殖活性降低;氟离子浓度为10mg/L的剂量组,2、4、96h时间组与对照组相比增殖活性降低,24、48h时间组与对照组相比增殖活性增加(P<0.05)。氟离子浓度为20mg/L的剂量组,在各个时间段内均表现为增殖活性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,成纤维细胞Cbfal的表达量在氟离子浓度为0.01mg/L的48h组、0.01、0.1、10、20mg/L的72h组及96h的所有组均显著性升高;染氟成纤维细胞Cbfal的表达量在染氟48h的0.0001、0.001、0.1mg/L组、染氟72h的0.0001、1、20mg/L及染氟96h的0.0001、0.001、1、20mg/L组均较染氟24h组相比明显升高(P<0.05)。氟对成纤维细胞ALP表达的影响作用与对照组相比不明显,仅在72h的20mg/L组和96h的0.1mg/L组较对照组相比升高(P<0.05)。染氟成纤维细胞SOST的表达量在染氟48h的0.0001、0.001、0.01mg/L组,染氟72h的1、10mg/L组及染氟96h的0.001、0.01、0.1、1mg/L组均较染氟0mg/L组相比明显降低;染氟成纤维细胞SOST的表达量在染氟48h的0.01mg/L组,染氟96h的0.001、0.01、0.1、1、10mg/L组均较染氟24h组相比明显降低(P<0.05)。染氟成纤维细胞DKK1的表达量在染氟48h的0.001mg/L组、染氟72h的0.01、0.1、1、10、20mg/L组及染氟96h的0.01、0.1、1、10、20mg/L组均较染氟0mg/L组相比明显降低;染氟成纤维细胞DKK1的表达量在染氟48h的0.0001、0.001、0.01mg/L组,染氟72h的0.001、0.01、1、10、20mg/L及染氟96h的0.01、0.1、1、20mg/L组均较24h组相比明显降低(P<0.05)。结论氟对成纤维细胞增殖活性的影响呈一定的剂量-效应关系,低浓度氟作用时增殖活性增高,高浓度氟作用时增殖活性降低。氟能提高成纤维细胞Cbfal的表达,而氟对成纤维细胞ALP表达的影响作用不明显。氟可导致成纤维细胞SOST和DKK1蛋白表达的下调,从而对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用下降,导致β-catenin降解减少,引起成骨活跃,促使成纤维细胞向前成骨细胞和成骨细胞转化,最终导致氟性骨损伤骨周化骨的发生发展。
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全文目录
英文缩略词 6-7 中文摘要 7-9 Abstract 9-11 前言 11 第一部分 大鼠皮肤成纤维细胞体外培养模型的建立及染氟对成纤维细胞增殖活性的影响 11-22 1 材料与方法 12-15 2 结果 15-20 3 讨论 20-22 第二部分 核心结合因子α1(Cbfal)和碱性磷酸酶(ALP)在染氟成纤维细胞中的表达 22-27 1 材料与方法 22-23 2 结果 23-26 3 讨论 26-27 第三部分 Wnt/β-catenin 信号通路抑制蛋白 SOST 及 DKK1 在染氟成纤维细胞中的表达 27-36 1 材料与方法 27-28 2 结果 28-31 3 讨论 31-36 结论 36 研究展望 36-37 参考文献 37-44 综述 44-51 参考文献 47-51 硕士研究生期间工作小结 51-53 致谢 53
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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 劳动卫生 > 劳动生理学
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