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喹乙醇诱导胰岛细胞DNA损伤及其机制探讨

作　者: 于欣
导　师: 刘晓芳
学　校: 大连医科大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 喹乙醇 DNA损伤氧化应激溶酶体膜稳定性 Western Blot
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：喹乙醇(olaquindox),是一种抗菌促生长剂，被广泛应用在禽畜和水产养殖业，已有实验表明喹乙醇对肝肾均有损害，但尚未有关于喹乙醇对胰岛损害的研究，本实验通过彗星实验观察喹乙醇是否会对大鼠胰岛细胞的DNA有损伤并探讨其损害可能的机制，通过western blot实验观察喹乙醇对p53蛋白表达的影响，从而探讨由持续DNA损伤可能引起的与癌有关基因表达的增加，为更全面的评估喹乙醇多脏器的损害提供依据。方法：喹乙醇引起的DNA损伤是通过单细胞凝胶电泳实验检测，用2，7，-二氢二氯荧光素（DCFH）检测细胞内活性氧（ROS）含量，用吖啶橙（AO）检测细胞内溶酶体膜稳定性，通过辣根过氧化物酶标记的荧光指示剂来检测westernblot实验中P53蛋白表达量，通过碱性保护剂NH4Cl和NAC来干预彗星实验及分别干预溶酶体实验和ROS实验。结果：喹乙醇（0~1600ug/ml）作用于INS-1细胞1h后，彗星实验中尾长、尾距、尾DNA％含量均增加，并呈剂量依赖，在对800、1600ug/ml剂量组分别加NH4Cl和NAC干预后均有保护作用。喹乙醇同样作用于INS-1细胞1h，可使细胞内溶酶体膜稳定性下降、ROS含量增加，分别用NH4Cl和NAC干预后均有保护作用。喹乙醇分别作用于INS-1细胞24h和48h后，P53蛋白表达量增加。结论：喹乙醇可以诱导大鼠胰岛细胞DNA损伤，对大鼠胰岛细胞有遗传毒性， NAC和NH4Cl均可对喹乙醇所致的DNA损伤起到保护作用，说明喹乙醇DNA损伤的途径是氧化应激和溶酶体途径。喹乙醇可使p53蛋白表达量增加，表明喹乙醇可使与癌有关基因表达增加，其机制可能是DNA的持续损伤。

全文目录

摘要  7-8
Abstract  8-9
前言  9
材料与方法  9-13
  1 药品试剂与材料  9-10
  2 细胞培养  10
  3 实验方法  10-13
  4 统计学方法  13
结果  13-18
  1 喹乙醇的细胞毒性  13
  2 喹乙醇诱导下的 DNA 损伤  13-15
  3 喹乙醇对溶酶体膜稳定性影响  15-16
  4 喹乙醇对细胞内活性氧的测定  16-17
  5 Western blot 检测 INS-1 细胞内 p53 蛋白的变化  17-18
    5.1 喹乙醇染毒 24h p53 蛋白表达  17
    5.2 喹乙醇染毒 48h p53 蛋白表达  17-18
讨论  18-21
结论  21-22
参考文献  22-24
综述  24-30
  参考文献  28-30
致谢  30-31

喹乙醇诱导胰岛细胞DNA损伤及其机制探讨

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