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亚硫酸盐对肝细胞脂肪代谢相关因素的影响

作　者: 王幼萍
导　师: 白剑英
学　校: 山西医科大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: 亚硫酸钠 二酰甘油酰基转移酶1(DGAT1) 载脂蛋白E(apoE) 载脂蛋白B100(apoB100) 免疫共沉淀 定量-聚合酶链式反应(Q-PCR) 酶联免疫吸附测定法(ELISA)
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的：有文献提示亚硫酸钠具有致突变作用、脂质过氧化作用,一些在体实验也显示了亚硫酸钠的肝损伤作用。本课题组在前期研究二氧化硫毒性时发现高浓度的二氧化硫可以引起肝细胞内脂滴数量的明显增加。为了进一步研究亚硫酸钠对肝脏脂肪代谢的干扰作用,本课题以人正常二倍体HL-7702肝细胞作为模型,检测食品添加剂亚硫酸钠作用肝细胞以后,肝细胞内与脂肪代谢密切相关的分子二酰甘油酰基转移酶1(DGAT1)、载脂蛋白E (apoE)以及载脂蛋白B100(apoB100)在转录以及翻译水平的变化,以期探讨亚硫酸钠诱发肝细胞脂肪积累效应及作用途径。方法：以正常人二倍体肝细胞株HL-7702为研究对象,经不同浓度的Na2SO3及阳性对照1.0mmol/L的油酸作用12h、24h、48h以后,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清中载脂蛋白B100(apoB100)以及载脂蛋白E (apoE)的分泌情况；采用免疫沉淀法和Western Blotting法检测肝细胞内DGAT1、apoB100和apoE的蛋白表达水平；采用定量聚合酶链反应法(Q-PCR)检测肝细胞内DGAT1、apoE以及apoB100mRNA的表达水平。结果：1、Na2SO3对肝细胞内DGAT1mRNA表达水平的影响：染毒12h,2.5mmol/L、10.0mmol/L Na2SO3组肝细胞内DGAT1mRNA的表达水平明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)；染毒24h和48h,仅10.0mmol/L Na2SO3染毒组肝细胞内DGAT1mRNA的表达水平明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)。2、Na2SO3对肝细胞内apoE mRNA表达水平的影响：染毒12h,2.5mmol/L、10.0mmol/L Na2SO3染毒组肝细胞内apoE mRNA的表达水平明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)；染毒24h,仅10.0mmol/L Na2SO3染毒组肝细胞内apoE mRNA的表达水平明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)。3、Na2SO3对肝细胞内apoB100mRNA表达水平的影响：染毒12h,2.5mmol/L、10.0mmol/L Na2SO3染毒组肝细胞内apoB100mRNA的表达水平明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)；染毒24h和48h后,仅10.0mmol/L Na2SO3染毒组肝细胞内apoB100mRNA的表达水平明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)。4、Na2SO3对肝细胞内DGAT1蛋白含量的影响：染毒12h和24h,仅10.0mmo/L Na2SO3处理组肝细胞内DGAT1蛋白表达明显升高,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)；染毒肝细胞48h后,10.0mmo/L Na2SO3染毒组以及1.0mmol/L油酸组肝细胞内DGAT1蛋白表达均明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)。5、Na2SO3对肝细胞内apoE蛋白表达的影响：染毒12h和24h,各Na2SO3染毒组以及1.0mmol/L油酸组肝细胞内apoE的蛋白表达水平均明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)；染毒48h,各Na2SO3染毒组肝细胞内apoE的蛋白表达水平明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)。6、Na2SO3对肝细胞内apoB100蛋白表达的影响：染毒12h、24h、48h,各Na2SO3染毒组肝细胞内apoB100的蛋白表达水平均有明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)。7、Na2SO3对肝细胞培养上清中apoB100含量的影响：染毒12h、24h、48h,各Na2SO3染毒组以及1.0mmol/L油酸组肝细胞外培养上清中apoB100的表达量均有明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)；8、Na2SO3对肝细胞培养上清中apoE含量的影响：染毒24h后,10.0mmol/L Na2SO3处理组以及1.0mmol/L油酸组肝细胞培养上清中apoE的含量明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)；染毒48h后,0.1mmol/L以及10.0mmol/L Na2SO3染毒组肝细胞外培养上清中apoE的含量有明显增加,与阴性对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05)。结论：1.一定剂量的Na2SO3可增加肝细胞内DGAT1的含量,促进肝细胞内甘油三酯的合成。2.一定剂量的Na2SO3可增加肝细胞内apoE的蛋白表达量,但是对apoE的基因表达影响不明显。表明apoE可能是通过受体途径促进了肝细胞内甘油三酯的分泌外排。3.一定剂量的Na2SO3可增加肝细胞apoB100的含量,从而可能会促进肝细胞极低密度脂蛋白(VLDL)的分泌外排,影响肝细胞的脂肪代谢。

全文目录


中文摘要  5-7
Abstract  7-10
中英文缩写词对照表  10-11
前言  11-12
第一章 材料与方法  12-22
  1.1 材料  12-13
  1.2 方法  13-21
  1.3 数据处理和统计分析  21-22
第二章 结果  22-30
  2.1 不同浓度Na_2SO_3对肝细胞内DGAT1、apoE、apoB100 mRNA表达的影响  22-26
  2.2 不同浓度Na_2SO_3对肝细胞内DGAT1、apoE、apoB100蛋白表达的影响  26-28
  2.3 不同浓度Na_2SO_3对肝细胞外培养上清中apoB100含量的影响  28-29
  2.4 不同浓度Na_2SO_3对肝细胞外培养上清中apoE含量的影响  29-30
第三章 讨论  30-34
  3.1 不同浓度Na_2SO_3对肝细胞DGAT1的影响  30-31
  3.2 不同浓度Na_2SO_3对肝细胞apoE的影响  31-32
  3.3 不同浓度Na_2SO_3对肝细胞apoB100的影响  32-34
第四章 结论  34-35
参考文献  35-39
附录  39-48
  综述  39-48
    参考文献  45-48
个人简历  48-49
致谢  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 卫生基础科学 > 卫生毒理
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