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四川、重庆地区鸭源沙门氏菌分离鉴定及耐药性研究

作　者: 程平
导　师: 蒋文灿
学　校: 四川农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 沙门氏菌血清型耐药基因
分类号: S858.32
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 73次
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内容摘要

本文采用常规试验方法对采自四川、重庆地区种鸭场,其中死胚292份,弱雏76份,共计368份疑似被沙门氏菌感染样品的肝脏进行分离,经鉴定共有163份样品呈阳性；用60种沙门氏菌阳性血清进行血清定型,用Kirby-Bauer法检测了163株沙门氏菌对20种常规抗菌药物的耐药性,用PCR法检测了已确定血清型96株沙门氏菌的耐药基因,结果表明：1.163株沙门氏菌中有96株能进行血清定型,分属A群,B群、C群,F群；另有67株属粗糙型菌落不能分型。其中A群有26株(27.1%),B群有2株(2.1%),C群有65株(69.8%),F群有1株(1.0%)2.163株沙门氏菌的药敏试验结果表明,沙门氏菌耐药性十分严重。所有试验菌株都表现出对P-G.OXA耐药；耐药率较严重的有CRL.ERY.CFM.CFX. AMP.NW和TET,分别是42.3%、66.3%、77.9%、85.3%、83.5%,90.8%；耐药率在20%-30%之间的有2种,分别为CFA(23.9%)和MOK(23.9%)；在10%-20%之间的有5种抗生素,分别是CFX(14.1%).CFM(12.3%).PIP(11.7%);耐药率低于10%的有KAN(4.3%).CRO(1.8%).CTD(1.8%).CFP(7.4%).3.所有菌株通过对四环素耐药基因tetA.氨基糖苷类耐药基因aada2,β-内酰胺类耐药基因blatem耐药基因的检测。检测结果表明,96株鸭源沙门氏菌中,有64.6%(62株)检测到耐药基因blatem:有82.3%(79株)检测到耐药基因tetA;有51.0%(49株)检测到耐药基因aadA2,3种耐药基因在7个地区都相应被检测出。

全文目录

中文摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
文中常用缩略词  7-12
第一部分文献综述  12-22
  1 沙门氏菌病原学特征  12
  2 沙门氏菌检测方法  12-17
    2.1 常规检测法  12-13
    2.2 分子生物学检测法  13-15
      2.2.1 核酸扩增技术检测法  13-15
      2.2.2 核酸探针检测技术(Nuclear acid probe)  15
    2.3 免疫学技术  15-17
      2.3.1 酶标抗体法(ELISA)  15-16
      2.3.2 免疫荧光法  16
      2.3.3 免疫酶标法  16
      2.3.4 免疫学其它检测方法  16-17
    2.4 其它检测沙门氏菌的方法  17
  3 沙门氏菌的公共卫生学意义  17-18
  4 沙门氏菌耐药机制  18-21
    4.1 酶对抗菌药物的修饰引起的耐药  18
    4.2 膜通透性发生改变引起的耐药  18-19
    4.3 靶位基因发生突变引起的耐药  19
    4.4 质粒介导引起的耐药性  19-20
    4.5 其它机理引起的耐药性  20-21
  5 研究目的及意义  21-22
第二部分试验研究  22-53
  第一章鸭源沙门氏菌分离鉴定及血清定型  22-35
    1 试验材料  22-23
      1.1 试验样品  22
      1.2 参考菌株  22
      1.3 试验药品及培养基配制  22-23
      1.4 实验仪器  23
      1.5 试验动物  23
    2 试验方法  23-26
      2.1 沙门氏菌分离纯化  23-24
      2.2 生化试验  24
      2.3 沙门氏菌PCR鉴定  24-25
        2.3.1 引物合成  24
        2.3.2 模板提取  24
        2.3.3 沙门氏菌invA基因PCR扩增  24-25
        2.3.4 PCR产物分析  25
      2.4 沙门氏菌血清型鉴定  25-26
        2.4.1 抗原制备  25
        2.4.2 玻片准备  25
        2.4.3 菌体抗原(O)鉴定  25
        2.4.4 鞭毛抗原(H)鉴定  25-26
        2.4.5 荚膜抗原(Vi)测定  26
      2.5 动物致病性实验  26
    3 结果与讨论  26-32
      3.1 沙门氏菌分离鉴定结果  26-29
        3.1.1 沙门氏菌阳性检出结果  26
        3.1.2 沙门氏菌分离培养  26-27
        3.1.3 分离菌株生化试验鉴定结果  27-28
        3.1.4 分离株PCR鉴定结果  28-29
      3.2 分离株血清定型结果  29-30
      3.3 动物致病性试验结果  30-32
    4 讨论  32-33
      4.1 沙门氏菌分离鉴定及血清定型  32-33
      4.2 动物致病性试验  33
    5 结论  33-35
  第二章鸭源沙门氏菌药敏试验、多重耐药试验分析  35-46
    1 试验材料  35-37
      1.1 试验样品  35-37
      1.2 试验仪器及设备  37
    2 试验方法  37-38
      2.1 菌液稀释  37
      2.2 药敏试验  37-38
    3 试验结果和讨论  38-43
      3.1 药敏试验结果  38-43
        3.1.1 163株鸭源沙门氏菌药敏试验结果  38-39
        3.1.2 不同地区鸭源沙门氏菌耐药情况  39-41
        3.1.3 不同地区多重耐药性  41-42
        3.1.4 不同地区沙门氏菌多重耐药情况  42-43
    4 讨论  43-46
  第三章沙门氏菌耐药基因检测及表型分析  46-53
    1 试验材料  46
      1.1 试验菌株  46
      1.2 试验主要试剂  46
      1.3 试验主要仪器  46
    2 试验方法  46-48
      2.1 沙门氏菌耐药基因引物设计  46-47
      2.2 模板提取  47
      2.3 沙门氏菌耐药基因PCR扩增  47-48
      2.4 PCR产物分析  48
    3 沙门氏菌耐药基因检测结果  48-52
      3.1 B-内酰胺类耐药基因检测  48
      3.2 四环素类耐药基因检测  48-49
      3.3 氨基糖苷类耐药基因  49
      3.4 鸭源沙门氏菌三种耐药基因检出情况  49-50
      3.5 7个地区耐药基因分布概况  50-51
      3.6 含耐药基因的菌株数与耐药菌株数的比较  51-52
    4 结论  52-53
参考文献  53-62
致谢  62

四川、重庆地区鸭源沙门氏菌分离鉴定及耐药性研究

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