学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
鸭坦布苏病毒对小鼠的分子致病机制
作 者: 彭珊
导 师: 何文兴
学 校: 济南大学
专 业: 生物化工
关键词: 鸭坦布苏病毒 致病性 荧光定量PCR 嗅上皮
分类号: S855.3
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 15次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
2010年4月,最先在我国南方地区爆发了一种以蛋鸭产蛋量急剧下降、采食量减少、生长迟缓甚至死亡为特征的新发病毒性疾病,给蛋鸭饲养业带来巨大的经济损失。几个实验室相继分离鉴定出引起该病的病原体。核苷酸序列分析表明该病原体为黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)恩塔亚病毒群(Ntaya virus group)的鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)。黄病毒属的其它大部分成员能够引起严重的人畜共患性传染病,因此,到目前为止我们尚不能排除DTMUV感染人类的可能性。为了研究DTMUV对哺乳动物的致病性,本研究以BABL/c小鼠为实验动物模型,以DTMUVFX2010株为代表株,将该病毒通过脑内直接接种方式传25代、然后经鼻腔接种继续传代至28代。通过比较FX2010、P7、P14、P21和P28对小鼠的致病性发现,FX2010鼻腔攻毒不感染小鼠,而P7、P14、P21和P28均能够通过鼻腔接种致死小鼠。为了进一步研究DTMUV与其传代毒株对小鼠和鸭的致病性,本研究根据DTMUV的E基因保守区域设计了特异反转录引物、核酸探针和扩增引物,建立了一种定量组织中的DTMUV含量的TaqMan荧光定量PCR方法。之后,分别选择不同攻毒剂量和不同攻毒方式进行致病性研究,结果发现,FX2010、P7和P28通过肌肉注射方式感染小鼠均不致死,也无任何明显症状;通过鼻腔接种小鼠其致病力却显著不同,103ELD50的P7和P28病毒能够致死小鼠,而105ELD50的FX2010不能使小鼠死亡。本研究应用荧光定量PCR技术进一步监测了FX2010、P7、P28病毒通过鼻腔接种小鼠后,在小鼠脏器内的增值情况,结果显示,FX2010、P7和P28都能在小鼠的鼻和肺内增殖,但前者病毒含量高于后者;三者都不感染小鼠的脾脏和肾脏;FX2010不能在小鼠的脑内复制,而P7和P28能够感染小鼠脑且病毒含量较高。鸭子实验证明,FX2010和P28都能引起鸭的全身性感染,它们对鸭的致病力差异不显著。通过对全基因组序列比较发现,FX2010与P7之间只有两个氨基酸位点突变(E蛋白上的E597K和NS3蛋白上的A2001T),FX2010和P28之间有12个核苷酸位点突变,导致6个氨基酸位点突变。结果表明E蛋白上的E597K和NS3蛋白上的A2001T在DTMUV对小鼠致病性增强中起到了关键作用。为研究DTMUV传代毒由鼻腔进入脑组织的扩散路径,本研究利用5%ZnSO4溶液,通过灌鼻破坏小鼠的嗅上皮,然后用P7病毒经鼻腔接种小鼠,实验结果显示,相对于对照组,破坏嗅上皮的小鼠死亡率明显降低,而且死亡时间延迟。本研究发现FX2010非常容易适应小鼠,E蛋白上的E597K和NS3蛋白上的A200-1T突变在DTMUV对小鼠的致病过程中发挥重要作用,同时发现DTMUV传代毒利用嗅上皮来通过鼻腔进入脑组织。
|
全文目录
目录 5-8 摘要 8-10 Abstract 10-12 第一章 绪论 12-26 1.1 鸭坦布苏病毒概述 12 1.2 鸭坦布苏病毒的病原学特性 12-13 1.2.1 分类和理化性质 12-13 1.2.2 血凝特性 13 1.2.3 培养特性 13 1.3 鸭坦布苏病毒的分子生物学特性 13-16 1.3.1 基因组结构特点 13-14 1.3.2 基因组编码产物及功能 14-16 1.4 鸭坦布苏病毒的流行病学 16-17 1.5 鸭坦布苏病毒的检测 17-20 1.5.1 病毒分离鉴定 17 1.5.2 血清学检测 17-18 1.5.3 核酸检测方法 18-20 1.6 鸭坦布苏病毒的防控 20 1.7 实时荧光定量 PCR 技术概述 20-24 1.7.1 实时荧光定量 PCR 技术原理 21 1.7.2 实时荧光定量 PCR 技术中荧光标记方法的分类 21-24 1.8 本文研究的目的及意义 24-26 第二章 鸭坦布苏病毒对小鼠的适应性研究 26-34 2.1 材料 26-27 2.1.1 病毒株、试验动物 26 2.1.2 主要试剂 26 2.1.3 主要仪器设备和器材 26-27 2.2 方法 27-30 2.2.1 DTMUV 在小鼠体内传代 27 2.2.2 FX2010、P7、P14、P21、P28 基因组序列测定 27-30 2.2.3 FX2010、P7、P14、P21、P28 对小鼠的致病力研究 30 2.3 结果 30-32 2.3.1 传代过程中小鼠的临床症状表现 30 2.3.2 FX2010、P7、P14、P21、P28 的全基因序列比较 30-31 2.3.3 致病力实验结果 31-32 2.4 本章小结 32-34 第三章 鸭坦布苏病毒 TaqMan 荧光定量 PCR 方法的建立 34-40 3.1 材料 34 3.1.1 病毒株 34 3.1.2 主要试剂及仪器 34 3.2 方法 34-36 3.2.1 探针与反转录特异性引物的设计 34-35 3.2.2 RNA 的提取和反转录反应 35 3.2.3 建立标准质粒 DNA 模板 35 3.2.4 荧光定量 PCR 标准曲线的建立 35 3.2.5 荧光定量 PCR 特异性试验 35-36 3.2.6 荧光定量 PCR 敏感性试验 36 3.2.7 荧光定量 PCR 重复性试验 36 3.2.8 临床样品检测 36 3.3 结果 36-39 3.3.1 荧光定量 PCR 标准曲线 36-37 3.3.2 荧光定量 PCR 特异性 37 3.3.3 荧光定量 PCR 敏感性 37-38 3.3.4 荧光定量 PCR 重复性 38 3.3.5 临床样品检测结果 38-39 3.4 本章小结 39-40 第四章 鸭坦布苏病毒与其传代毒株的致病性差异研究 40-50 4.1 材料 40 4.1.1 病毒株、试验动物 40 4.1.2 主要试剂及仪器 40 4.2 方法 40-42 4.2.1 FX2010、P7、P28 对小鼠致病力研究 40-41 4.2.2 间接 ELASA 抗体检测 41 4.2.3 FX2010、P7、P28 在小鼠体内的增殖过程检测 41 4.2.4 P28 对鸭子的敏感性实验 41-42 4.3 结果 42-47 4.3.1 FX2010、P7、P28 对小鼠致病力的研究结果 42-44 4.3.2 间接 ELASA 抗体检测结果 44 4.3.3 病毒在小鼠体内的增殖过程检测结果 44-46 4.3.4 P28 对鸭子的敏感性实验结果 46-47 4.4 本章小结 47-50 第五章 鸭坦布苏病毒传代毒由鼻腔进入脑组织的扩散路径研究 50-60 5.1 材料 50-51 5.1.1 病毒株、试验动物 50 5.1.2 主要试剂及仪器 50-51 5.1.3 主要溶液的配制 51 5.2 方法 51-52 5.2.1 5% ZnSO4溶液实验 51 5.2.2 免疫组织化学观察 51-52 5.3 结果 52-57 5.3.1 5% ZnSO4溶液实验结果 52-54 5.3.2 免疫组织化学观察结果 54-57 5.4 本章小结 57-60 第六章 结论 60-62 参考文献 62-68 致谢 68-70 附录 70
|
相似论文
- 稻瘟病菌转录因子Moswi6的功能研究,S435.111.4
- 草菇采后生理生化及保鲜方法的研究,S646.13
- 小麦黄花叶病毒(WYMV)RNA2编码基因的功能研究,S435.121
- 溶藻弧菌毒力相关基因的检测与保藏方法的研究,S943
- 微生物有机肥防治土传棉花黄萎病的效果及对根际微生物影响,S144.1
- 新疆紫草细胞的稀土生物学效应及遗传转化,S567.239
- 鸭ADSL与PurH基因序列特征及表达与肌肉肌苷酸(IMP)含量的相关性分析,S834
- 鸡源禽致病性大肠杆菌分离鉴定及其毒力相关基因分布特征分析,S852.61
- 荧光定量PCR方法在土传烟草青枯病生防研究中的应用,S435.72
- 梨火疫病菌致病相关基因crp与tatC的克隆及功能分析,S436.612
- 瓜类细菌性果斑病菌hrp基因簇部分基因的克隆及功能研究,S436.5
- 大白菜霜霉菌诱导抑制性消减cDNA文库的构建及防御相关基因的表达分析,S436.341
- 棉铃虫与烟夜蛾寄主选择机制的比较研究,S435.622.3
- 玉米光周期敏感基因ZmELF4的克隆及功能验证,S513
- 苹果Ca2+/H+反向转运体活性及其基因表达特性研究,S661.1
- 寒胁迫下佛手差异表达基因的研究,S666.9
- 萝卜镉胁迫响应相关基因克隆及其表达分析,S631.1
- PCV2分离株增殖特性研究及板蓝根多糖、黄芪多糖对PCV2体外复制的影响,S858.28
- 河南省樱桃谷鸭乙型肝炎病毒(DHBV)分子流行病学调查及FNC抗DHBV体内试验研究,S858.32
- 我国11株H5N2亚型AIV的基因特征及对禽的致病性研究,S852.65
- 五个棉花逆境相关锌指蛋白基因的克隆与功能研究,S562
中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 兽医传染病学 > 病毒病
© 2012 www.xueweilunwen.com
|