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SLCO1B3基因在缙云麻鸭输卵管中表达与蛋壳颜色的相关研究
作 者: 孙思维
导 师: 卢立志
学 校: 浙江师范大学
专 业: 动物学
关键词: 选育 实时荧光定量PCR 青壳 白壳
分类号: S834
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 22次
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内容摘要
蛋鸭的青壳性状一直以来都是选育的重要经济指标,能够选育出含有稳定遗传的青壳蛋系具有重要的经济意义。为了筛选纯合青壳系,本实验根据系谱信息,挑选具有高产性能的缙云麻鸭青壳系公鸭40只,按照1:20的比例与产白壳蛋的缙云麻鸭配对,组成40个家系(F0代),进行测交实验。根据F1代蛋壳颜色辨别父代公鸭是否为青壳纯合型,结果表明有6只公鸭为含有纯合青壳基因型。目前应用最多的青壳性状选育方法还是以传统育种的方式进行,虽然近几年分子育种技术不断发展,针对蛋鸭青壳性状的候选基因也有报道,但是将实验室研究成果应用在实际生产的还没有报道,本次试验将进行SLCO1B3基因表达量与青壳性状相关性研究,旨在为缙云麻鸭的青壳性状选育提供候选基因。实验中以缙云麻鸭青壳系与白壳系的测交子代为研究对象,随机采取四只产青壳蛋和四只产白壳蛋的母鸭输卵管子宫部组织,根据NCBI上查找到的鸡SLCO1B3基因的序列,与其他物种的基因序列进行比对后,找到保守的区域,设计跨内含子的引物,利用SYBR Green I实时荧光定量PCR (qPCR)技术,采用相对定量的方法,以β-肌动蛋白(p-actin)为内参,检测SLCO1B3基因在青壳与白壳系的不同个体的输卵管子宫部的表达情况,利用2-△△Ct分析实验结果;发现SLCO1B3基因在产白壳系输卵管子宫部的表达量要高于在青壳系输卵管子宫部,且差异显著(P<0.05),初步推测该基因可以作为鉴别蛋鸭青壳性状的候选基因之一。基因调控区域一般处在基因的上游位置,为进一步研究SLCO1B3基因在青壳系和白壳系中表达量差异的机制,我们克隆了SLCO1B3基因的5’-UTR区域序列,将会对后续研究其表达调控机制打下良好的理论基础。实验中以产白壳蛋的缙云麻鸭输卵管子宫部提取的RNA为材料,扩增出SLCO1B3基因5’-UTR区域。测序结果显示通过5’-RACE技术得到了一段长度约为320bp大小的一段序列,利用NCBI比对发现这段基因与鸡的LOC422031和LOC422032基因具有83%的相似率,说明鸭与鸡SLCO1B3基因在调控区域存在相似性。综上所述,40只待测缙云麻鸭中含有青壳纯合型的个体6只;SLCO1B3基因在产不同蛋壳颜色的缙云麻鸭输卵管壳腺部位置存在表达差异,通过NCBI比对发现该基因与鸡SLCO1B3基因存在相似性。该基因的进一步研究,可能会有助于探索缙云麻鸭青壳性状的分子标记。
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全文目录
摘要 5-7 ABSTRACT 7-9 缩写表 9-12 第一章 文献综述 12-26 1.1 研究背景 12-13 1.2 禽类蛋壳颜色及其基因的遗传研究进展 13-15 1.2.1 禽类蛋壳颜色形成的遗传机制 13-14 1.2.2 青壳性状相关候选基因研究进展 14-15 1.3 国内优秀的蛋鸭品种——缙云麻鸭种质资源概述 15 1.3.1 缙云麻鸭简介 15 1.3.2 缙云麻鸭生产性能 15 1.4 现代分子实验技术在畜牧学研究方面的应用 15-24 1.4.1 常见的几种应用于畜禽方面的分子实验研究 16-17 1.4.2 试验中所用技术简介 17-23 1.4.3 分子实验在生产性能研究方面的应用 23-24 1.5 关于SLCO1B3基因的研究 24-25 1.5.1 SLCO1B3基因发现及结构 24 1.5.2 SLCO1B3基因的功能 24-25 1.6 本研究的目的和意义 25-26 第二章 缙云麻鸭测交实验 26-31 2.1 试验动物 26 2.2 试验工具 26 2.3 试验基地 26-27 2.4 实验原理 27 2.5 试验方法 27 2.6 实验结果 27-28 2.7 讨论 28-31 第三章 鸭SLCO1B3基因在不同蛋鸭蛋壳颜色输卵管位置的表达差异性表达研究 31-45 3.1 试验动物 31 3.2 主要仪器设备与试剂 31 3.3 实验方法 31-34 3.3.1 RNA提取 31-32 3.3.2 RNA样品检测 32-33 3.3.3 cDNA反转录 33 3.3.4 实时荧光定量PCR引物设计 33-34 3.4 结果 34-38 3.5 实验结果 38-41 3.6 讨论 41-45 3.6.1 实验动物的挑选 41 3.6.2 RNA样品和cDNA样品的制备 41-43 3.6.3 SLCO1B3基因在产青壳蛋鸭与产白壳蛋鸭输卵管中的表达差异机理初探 43-45 第四章 鸭SLCO1B3基因5’UTR区延伸初探 45-59 4.1 材料与方法 45-46 4.1.1 材料 45-46 4.2 试验方法 46-51 4.2.1 RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)实验方法 46-48 4.2.2 胶回收试验步骤 48-50 4.2.3 5’-Race产物克隆试验步骤 50-51 4.3 实验结果 51-57 4.3.1 5’-Race产物验证 51-52 4.3.2 克隆结果 52-53 4.3.3 测序结果 53-57 4.4 讨论 57-59 第五章 结论与展望 59-60 5.1 结论 59 5.2 展望 59-60 参考文献 60-66 附录 66-71 攻读学位期间取得的研究成果 71-72 致谢 72-73
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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家禽 > 鸭
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