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草莓试管苗玻璃化的发生及其恢复技术研究

作　者: 周书利
导　师: 汤浩茹
学　校: 四川农业大学
专　业: 果树学
关键词: 草莓试管苗玻璃化恢复生理生化
分类号: S668.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本文以‘丰香’(Fragaria×ananassa cv. Toyonaka)草莓品种为材料,用其匍匐茎茎尖为外植体对其进行组织培养。研究的目的在于探讨草莓组培过程中造成草莓试管苗玻璃化的主要影响因素,并在此基础上以玻璃化试管苗为材料探索草莓玻璃化试管苗的恢复措施。研究的主要内容有：(1)以正交设计的方法研究6-BA、琼脂、铵离子(硝酸铵)三种物质的不同浓度组合对草莓试管苗玻璃化的影响。(2)对获得的玻璃化苗与正常试管苗的生理生化指标(组织含水量、可溶性糖含量、相对电导率、叶绿素含量、抗氧化酶活性)进行测定。(3)以草莓玻璃化试管苗为材料,用正交设计的方法,在继代培养基中添加不同浓度组合的活性炭、聚乙烯醇和钙离子(氯化钙),研究不同组合对草莓玻璃化试管苗恢复的影响。(4)测定恢复后的正常试管苗各项生理生化指标,并将其与原来的玻璃化苗及正常苗的生理生化指标进行比较分析,以验证各处理对玻璃化苗的恢复效果是否达到了正常苗的生理生化水平,从而筛选出对玻璃化试管苗恢复效果最佳的处理方法,以便生产应用。研究的主要结果是：(1)对试验结果进行方差分析得知,6-BA、琼脂和铵离子对草莓试管苗的玻璃化都有显著影响,影响大小依次是6-BA>铵离子>琼脂,能有效地降低试管苗玻璃化的组合为正交设计中的组合2即1mg/L6-BA+6g/L琼脂+1650mg/L铵离子,增殖倍数也较高。(2)草莓玻璃化苗的组织含水量和相对电导率较正常苗高,可溶性糖含量恰好相反。玻璃化苗的叶绿素含量较正常苗显著降低,Ca/Cb在玻璃化苗与正常苗间无显著差异,玻璃化苗较正常苗的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性降低,过氧化物酶(POD)活性升高。(3)正交设计的9种处理对草莓玻璃化苗的恢复效果差异显著,恢复率最高的是处理9(1g/L活性炭+2g/L聚乙烯醇+166mg/L钙离子),恢复率为89.07%,其次是处理4(0.5g/L活性炭+166mg/L钙离子),81.05%、处理8(1g/L活性炭+1g/L聚乙烯醇),73.87%。方差分析表明,活性炭、聚乙烯醇、钙离子浓度对草莓玻璃化苗恢复的影响都极为显著,影响大小依次是钙离子>活性炭>聚乙烯醇。(4)恢复后的正常试管苗的各项生理生化指标与玻璃化苗差异显著,与正常苗差异不显著,表明经过处理逆转的恢复苗的生理生化水平达到了正常苗的水平。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
縮略词  7-8
目录  8-10
引言  10-11
1 文献综述  11-21
  1.1 草莓组织培养研究进展  11-12
    1.1.1 草莓茎尖的组织培养  11
    1.1.2 草莓叶片、叶柄和匍匐茎等器官的组织培养  11
    1.1.3 草莓花药的组织培养  11-12
    1.1.4 草莓离体胚的组织培养  12
    1.1.5 草莓原生质体的组织培养  12
    1.1.6 草莓转基因的研究进展  12
  1.2 植物试管苗玻璃化的研究进展  12-21
    1.2.1 组培试管苗玻璃化现象发生的普遍性  13
    1.2.2 影响组培试管苗玻璃化的因素  13-16
    1.2.3 玻璃化苗的生理生化特性研究进展  16-19
    1.2.4 玻璃化苗的发生机制研究进展  19-20
    1.2.5 玻璃化苗的预防措施研究进展  20
    1.2.6 玻璃化苗的恢复技术研究进展  20-21
2 研究内容、研究目标和拟解决的关键问题  21-22
  2.1 研究内容  21-22
  2.2 研究目标  22
  2.3 拟解决的关键问题  22
3 试验材料和方法  22-30
  3.1 试验材料  22-24
    3.1.1 植物材料  22-23
    3.1.2 试剂  23
    3.1.3 仪器设备  23-24
  3.2 试验方法  24-30
    3.2.1 技术路线  24
    3.2.2 草莓试管苗无性系的获得  24-25
    3.2.3 影响草莓试管苗玻璃化的主要因素筛选  25
    3.2.4 玻璃化苗和正常苗各项生理生化指标的测定  25-30
    3.2.5 玻璃化苗的恢复研究  30
    3.2.6 恢复苗生理生化指标的测定  30
    3.2.7 统计分析  30
4 结果与分析  30-40
  4.1 不同处理对草莓试管苗玻璃化率的影响  30-31
  4.2 各单因素对草莓试管苗玻璃化的影响  31-32
  4.3 玻璃苗(轻、重)与正常苗生理生化指标的差异比较  32-34
    4.3.1 组织含水量、可溶性糖含量、膜透性的比较  33
    4.3.2 叶绿素含量的比较  33-34
    4.3.3 SOD、POD、CAT酶活性的比较  34
  4.4 各处理对草莓玻璃化苗恢复的的影响  34-36
  4.5 各单因素对草莓玻璃化苗恢复的影响  36-37
  4.6 恢复苗与玻璃化苗及正常苗生理生化指标的差异比较  37-40
    4.6.1 组织含水量、可溶性糖含量、膜透性比较  37-38
    4.6.2 叶绿素含量比较  38-39
    4.6.3 SOD、POD、CAT酶活性比较  39-40
5 讨论  40-43
  5.1 草莓试管苗玻璃化的发生  40-42
  5.2 草莓玻璃化试管苗的恢复  42-43
6 小结  43-44
进一步研究  44-45
参考文献  45-52
致谢  52-53
硕士期间发表的论文  53

草莓试管苗玻璃化的发生及其恢复技术研究

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