学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
蛹虫草组氨酸激酶基因(CmHK)和Kexin基因(CmKexin)的研究
作 者: 金华燕
导 师: 付鸣佳
学 校: 江西师范大学
专 业: 生物化工
关键词: 蛹虫草 组氨酸激酶基因 CmKexin基因 原核表达 实时荧光定量PCR
分类号: S567.39
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 11次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
蛹虫草是传统的药食两用真菌,其含有丰富的虫草素与虫草酸等药用有效成分,现代药理学研究表明,蛹虫草具有抗肿瘤、降糖、抗肝纤维化、提高免疫功能、抗菌、消炎、抗氧化和调节人体内分泌等显著作用。由于其活性成分和药理作用与冬虫夏草相似,因此具有很高的研究价值。本论文对蛹虫草中的组氨酸激酶基因(CmHK)和Kexin基因(CmKexin)进行了基因克隆、序列分析和蓝光诱导调控的研究:(1)通过3’RACE法克隆测序得到CmHK和CmKexin基因的3’端部分序列,分别为985个碱基和725个碱基。(2)根据已报道的蛹虫草序列和上述得到的3’端碱基设计引物,经过PCR、测序、比对得到CmHK和CmKexin基因的开放阅读框(ORF)序列,全长分别为2931bp、2562bp。CmHK基因可编码976个aa,对其进行序列分析表明,其中存在着4个HAMP功能域、1个HisKA功能域、1个HATPase_c功能域和1个REC功能域。CmKexin基因可编码853个aa,对其进行序列分析表明,其中存在1个属于蛋白转化酶的肽酶S8家族功能域和1个蛋白转化酶P功能域。(3)根据得到的CmHK基因ORF序列设计引物,通过PCR得到部分功能域片段,与pEASY-E1Expression Vector进行连接后,导入到Trans-T1受体细胞中,将阳性重组子振荡培养后提取质粒,转入到BL21(DE3)表达细胞中,挑取阳性重组子进行菌落PCR鉴定,完成CmHK基因ORF部分功能域原核表达载体的构建。(4)运用实时荧光定量PCR方法研究蓝光对CmHK、CmKexin基因表达量的影响,结果表明CmHK基因的表达在蓝光照射之初其表达量有明显下降,随后有一个震荡上升,在蓝光照射16h时达顶峰,随后快速下降;CmKexin基因在蓝光照射的前48h里的表达量比较稳定,之后急剧上升,50h时达顶峰,随后快速下降,之后又趋于稳定。
|
全文目录
摘要 3-4 Abstract 4-8 1 前言 8-16 1.1 蛹虫草简介 8 1.2 双组分系统 8-12 1.2.1 磷酸化与去磷酸化 8-9 1.2.2 TCS 概述 9 1.2.3 TCS 的基本结构、分类及反应机制 9-11 1.2.4 组氨酸激酶 11 1.2.5 RR 11-12 1.3 类枯草杆菌蛋白酶 12-15 1.3.1 枯草杆菌蛋白酶的发现及家族分类 12-13 1.3.2 细菌中的枯草杆菌蛋白酶 13 1.3.3 真菌中的类枯草杆菌蛋白酶 13-14 1.3.4 植物中的类枯草杆菌蛋白酶 14 1.3.5 动物中的类枯草杆菌蛋白酶 14-15 1.4 本研究的目的与意义 15-16 2 蛹虫草组氨酸激酶基因(CmHK)的克隆、序列分析和蓝光调控 16-39 2.1 蓝光诱导下 CmHK 基因 3'端部分序列获得及测序 16-22 2.1.1 实验材料 16-18 2.1.2 引物设计 18 2.1.3 实验方法 18-20 2.1.4 实验结果及分析 20-22 2.2 CmHK 基因开放阅读框(ORF)的获得及测序 22-29 2.2.1 实验材料 22 2.2.2 引物设计 22-23 2.2.3 实验方法 23-24 2.2.4 实验结果及分析 24-29 2.3 CmHK 基因 ORF 部分功能域原核表达载体的构建 29-34 2.3.1 实验材料 29-30 2.3.2 引物设计 30 2.3.3 实验方法 30-33 2.3.4 实验结果及分析 33-34 2.4 实时荧光定量 PCR 测定蓝光诱导下 CmHK 基因表达量变化 34-37 2.4.1 实验材料 34 2.4.2 引物设计 34-35 2.4.3 实验方法 35-36 2.4.4 实验结果及分析 36-37 2.5 讨论与结论 37-39 3 蛹虫草 Kexin 基因(CmKexin)的克隆、序列分析和蓝光调控 39-52 3.1 蓝光诱导下 CmKexin 基因 3'端部分序列获得及测序 39-42 3.1.1 实验材料 39 3.1.2 引物设计 39 3.1.3 实验方法 39-41 3.1.4 实验结果及分析 41-42 3.2 CmKexin 基因开放阅读框(ORF)的获得及测序 42-49 3.2.1 实验材料 42 3.2.2 引物设计 42-43 3.2.3 实验方法 43 3.2.4 实验结果及分析 43-49 3.3 实时荧光定量 PCR 测定蓝光诱导下 CmKexin 基因表达量变化 49-51 3.3.1 实验材料 49 3.3.2 引物设计 49 3.3.3 实验方法 49-50 3.3.4 实验结果及分析 50-51 3.4 结论与讨论 51-52 4 总结 52-53 参考文献 53-58 致谢 58-59 在读期间公开发表论文(著)及科研情况 59
|
相似论文
- 拟南芥胱硫醚-γ-合成酶(D-AtCGS)基因在大肠杆菌中的表达及抗血清制备,Q943.2
- 草菇采后生理生化及保鲜方法的研究,S646.13
- 小麦黄花叶病毒(WYMV)RNA2编码基因的功能研究,S435.121
- 红笛鲷清道夫受体B型Ⅰ类和抗冻蛋白Ⅱ型基因的克隆、表达与定量分析,S917.4
- 微生物有机肥防治土传棉花黄萎病的效果及对根际微生物影响,S144.1
- 新疆紫草细胞的稀土生物学效应及遗传转化,S567.239
- 猪细小病毒河南流行株的分离、鉴定及部分生物学特性研究,S852.65
- 人源β-防御素-6的原核表达及纯化,Q78
- 圆眼珍珠蛙(Lepidobatrachus laevis)皮肤cDNA文库的构建、筛选及胰蛋白酶抑制剂的原核表达和活性研究,Q78
- 新型菊酯类农药降解酶的生化鉴定及分子改造研究,X172
- 大白菜霜霉菌诱导抑制性消减cDNA文库的构建及防御相关基因的表达分析,S436.341
- 棉铃虫与烟夜蛾寄主选择机制的比较研究,S435.622.3
- 萝卜镉胁迫响应相关基因克隆及其表达分析,S631.1
- 五个棉花逆境相关锌指蛋白基因的克隆与功能研究,S562
- 兔源支气管败血波氏杆菌PRN蛋白的表达及其免疫保护性研究,S855.12
- 兔支气管败血波氏杆菌fimN基因的克隆表达及快速检测方法的建立,S858.291
- 栽培大豆和滩涂野大豆及其杂交后代苗期耐盐性与NHX1基因功能的初步研究,S565.1
- 蛹虫草多糖及虫草素提取分离技术研究,TQ461
- 草鱼NCCRP-1和IL-10基因的克隆和表达,S917.4
- 不同水稻品种对灰飞虱抗性机理的初步研究,S511
- 甲型H1N1流感病毒(2009)HA蛋白的原核表达及酶免检测研究,R392.1
中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 药用作物 > 菌类 > 其他
© 2012 www.xueweilunwen.com
|