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蛹虫草组氨酸激酶基因(CmHK)和Kexin基因(CmKexin)的研究

作 者: 金华燕
导 师: 付鸣佳
学 校: 江西师范大学
专 业: 生物化工
关键词: 蛹虫草 组氨酸激酶基因 CmKexin基因 原核表达 实时荧光定量PCR
分类号: S567.39
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要


蛹虫草是传统的药食两用真菌,其含有丰富的虫草素与虫草酸等药用有效成分,现代药理学研究表明,蛹虫草具有抗肿瘤、降糖、抗肝纤维化、提高免疫功能、抗菌、消炎、抗氧化和调节人体内分泌等显著作用。由于其活性成分和药理作用与冬虫夏草相似,因此具有很高的研究价值。本论文对蛹虫草中的组氨酸激酶基因(CmHK)和Kexin基因(CmKexin)进行了基因克隆、序列分析和蓝光诱导调控的研究:(1)通过3’RACE法克隆测序得到CmHK和CmKexin基因的3’端部分序列,分别为985个碱基和725个碱基。(2)根据已报道的蛹虫草序列和上述得到的3’端碱基设计引物,经过PCR、测序、比对得到CmHK和CmKexin基因的开放阅读框(ORF)序列,全长分别为2931bp、2562bp。CmHK基因可编码976个aa,对其进行序列分析表明,其中存在着4个HAMP功能域、1个HisKA功能域、1个HATPase_c功能域和1个REC功能域。CmKexin基因可编码853个aa,对其进行序列分析表明,其中存在1个属于蛋白转化酶的肽酶S8家族功能域和1个蛋白转化酶P功能域。(3)根据得到的CmHK基因ORF序列设计引物,通过PCR得到部分功能域片段,与pEASY-E1Expression Vector进行连接后,导入到Trans-T1受体细胞中,将阳性重组子振荡培养后提取质粒,转入到BL21(DE3)表达细胞中,挑取阳性重组子进行菌落PCR鉴定,完成CmHK基因ORF部分功能域原核表达载体的构建。(4)运用实时荧光定量PCR方法研究蓝光对CmHK、CmKexin基因表达量的影响,结果表明CmHK基因的表达在蓝光照射之初其表达量有明显下降,随后有一个震荡上升,在蓝光照射16h时达顶峰,随后快速下降;CmKexin基因在蓝光照射的前48h里的表达量比较稳定,之后急剧上升,50h时达顶峰,随后快速下降,之后又趋于稳定。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-8
1 前言  8-16
  1.1 蛹虫草简介  8
  1.2 双组分系统  8-12
    1.2.1 磷酸化与去磷酸化  8-9
    1.2.2 TCS 概述  9
    1.2.3 TCS 的基本结构、分类及反应机制  9-11
    1.2.4 组氨酸激酶  11
    1.2.5 RR  11-12
  1.3 类枯草杆菌蛋白酶  12-15
    1.3.1 枯草杆菌蛋白酶的发现及家族分类  12-13
    1.3.2 细菌中的枯草杆菌蛋白酶  13
    1.3.3 真菌中的类枯草杆菌蛋白酶  13-14
    1.3.4 植物中的类枯草杆菌蛋白酶  14
    1.3.5 动物中的类枯草杆菌蛋白酶  14-15
  1.4 本研究的目的与意义  15-16
2 蛹虫草组氨酸激酶基因(CmHK)的克隆、序列分析和蓝光调控  16-39
  2.1 蓝光诱导下 CmHK 基因 3'端部分序列获得及测序  16-22
    2.1.1 实验材料  16-18
    2.1.2 引物设计  18
    2.1.3 实验方法  18-20
    2.1.4 实验结果及分析  20-22
  2.2 CmHK 基因开放阅读框(ORF)的获得及测序  22-29
    2.2.1 实验材料  22
    2.2.2 引物设计  22-23
    2.2.3 实验方法  23-24
    2.2.4 实验结果及分析  24-29
  2.3 CmHK 基因 ORF 部分功能域原核表达载体的构建  29-34
    2.3.1 实验材料  29-30
    2.3.2 引物设计  30
    2.3.3 实验方法  30-33
    2.3.4 实验结果及分析  33-34
  2.4 实时荧光定量 PCR 测定蓝光诱导下 CmHK 基因表达量变化  34-37
    2.4.1 实验材料  34
    2.4.2 引物设计  34-35
    2.4.3 实验方法  35-36
    2.4.4 实验结果及分析  36-37
  2.5 讨论与结论  37-39
3 蛹虫草 Kexin 基因(CmKexin)的克隆、序列分析和蓝光调控  39-52
  3.1 蓝光诱导下 CmKexin 基因 3'端部分序列获得及测序  39-42
    3.1.1 实验材料  39
    3.1.2 引物设计  39
    3.1.3 实验方法  39-41
    3.1.4 实验结果及分析  41-42
  3.2 CmKexin 基因开放阅读框(ORF)的获得及测序  42-49
    3.2.1 实验材料  42
    3.2.2 引物设计  42-43
    3.2.3 实验方法  43
    3.2.4 实验结果及分析  43-49
  3.3 实时荧光定量 PCR 测定蓝光诱导下 CmKexin 基因表达量变化  49-51
    3.3.1 实验材料  49
    3.3.2 引物设计  49
    3.3.3 实验方法  49-50
    3.3.4 实验结果及分析  50-51
  3.4 结论与讨论  51-52
4 总结  52-53
参考文献  53-58
致谢  58-59
在读期间公开发表论文(著)及科研情况  59

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 药用作物 > 菌类 > 其他
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