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补肾益气活血方及BMSCs对KOA兔软骨COL II、iNOS及血清IL-1β的影响

作　者: 姜维龙
导　师: 唐勇
学　校: 暨南大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 膝骨性关节炎 骨髓间充质干细胞 补肾益气活血方 关节软骨 Ⅱ型胶原 诱导型一氧化氮合酶 白介素-1β
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的：研究补肾益气活血方和BMSCs联合应用对KOA兔软骨COLⅡiNOS的表达及血清IL-1β的含量的影响,探讨其对KOA兔软骨保护的可能性及作用机理,从而探寻一种中西医结合临床防治KOA的新方法,为其他关节炎的防治提供新思路。方法：1.采用全骨髓贴壁法体外分离、培养兔BMSCs,并通过形态学观察和多向诱导分化能力对其进行鉴定。2.将30只新西兰兔按随机数字表随机分为正常对照组、模型对照组、BMSCs组、补肾益气活血方组、联合组(BMSCs+补肾益气活血方组)；以木瓜蛋白酶膝关节腔注射建立兔KOA动物模型,2周后开始分别对其进行干预；30天后处死动物取材,大体和手术显微镜下观察关节软骨退变情况,扫描电镜观察软骨表面形态,光镜下观察软骨病理形态、免疫组化组织切片COLⅡ及iNOS的表达情况,ELISA法检测血清1L-1β的含量。结果：1.通过细胞形态学观察及多向分化能力的判定,证明所培养的细胞为BMSCs。2.大体观察、手术显微镜及扫描电镜观察：除正常对照组外其余各组均有不同程度的OA软骨退变,分析各组动物关节软骨表面分级情况,说明5组关节软骨表面分级有统计学意义(P<0.01)。3.各组软骨HE染色病理C.Colombo评分：模型对照组分别高于BMSCs组、补肾益气活血方组及联合组(P<0.05,P<0.01,P<0.01);BMSCs组和补肾益气活血方组评分差别无统计学意义(P>0.05)；联合组分别低于BMSCs组和补肾益气活血方组(P<0.01,P<0.05)。4.软骨COLⅡ的表达：模型对照组均明显低于正常对照组、补肾益气活血方组及联合组(P<0.01),低于BMSCs组(P<0.05);BMSCs组对比补肾益气活血方组差别没有统计学意义(P>0.05)；联合组分别高于BMSCs组和补肾益气活血方组(P<0.01,P<0.05)。5.软骨iNOS的表达：正常对照组软骨无iNOS的表达；模型对照组明显高于正常对照组、补肾益气活血方组及联合组(P<0.01),略高于BMSCs组(P<0.05);BMSCs组与补肾益气活血方组比较没有统计学差异(P>0.05)；联合组均低于BMSCs组和补肾益气活血方组(P<0.01,P<0.05)。6.血清IL-1β含量：正常对照组明显低于模型对照组(P<0.01)；模型对照组明显高于BMSCs组、补肾益气活血方组及联合组(P<0.01);BMSCs组和补肾益气活血方组比较无统计学差别(P>0.05)；联合组均低于BMSCs组与补肾益气活血方组(P<0.01,P<0.05)。结论：1.全骨髓贴壁法可成功分离得到新西兰大白兔原代BMSCs,经过传代纯化可获得生长良好的兔BMSCs。2.通过关节腔注射木瓜蛋白酶,可成功建立兔KOA模型。3. BMSCs在关节腔内可向软骨细胞分化,促进软骨细胞分泌外基质,修复关节软骨退变和破坏,对兔KOA起到了一定的防治作用。4.补肾益气活血方可以通过改善软骨病理积分,促进软骨细胞合成COLⅡ,下调关节软骨细胞iNOS的表达,降低血清IL-1β含量,达到防治KOA的目的。5.补肾益气活血方联合BMSCs能明显改善软骨病理积分,促进软骨细胞合成COLⅡ,下调关节软骨细胞iNOS的表达,降低血清IL-1β含量,其作用优于单纯应用BMSCs或补肾益气活血方。

全文目录


中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
主要缩略词中英文对照表  9-10
目录  10-11
一 前言  11-12
二 理论研究  12-26
  1 西医学对KOA的认识  12-17
  2 中医学对KOA的认识  17-20
  3 BMSCs体外分离、培养及鉴定  20-21
  4 KOA动物模型的研究  21-23
  5 BMSCs在软骨组织工程中的研究进展  23-24
  6 中医药防治KOA作用机制的研究  24-26
三 实验研究  26-62
  实验一 兔BMSCs的体外分离、培养、纯化和鉴定  26-39
    1 实验材料  26-28
    2 实验方法  28-33
    3 实验结果  33-35
    4 讨论  35-38
    5 结论  38-39
  实验二 补肾益气活血方及BMSCs对KOA兔软骨COLⅡ、iNOS及血清IL-1β的影响  39-62
    1 实验材料  39-40
    2 实验方法  40-46
    3 实验结果  46-55
    4 讨论  55-61
    5 结论  61-62
展望  62-63
参考文献  63-72
在学期间发表论文  72-73
附图  73-77
致谢  77

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