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实验性胆囊炎家兔体表循经高温现象与脂肪组织UCPmRNA表达的相关性研究

作　者: 崔山佳
导　师: 罗明富；张栋
学　校: 中国中医科学院
专　业: 中西医结合基础
关键词: UCP1 胆囊炎 棕色脂肪组织 循经高温线
分类号: R575.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的：建立实验性胆囊炎家兔模型,以诱发循经高温反应现象,通过红外热像仪观察循经高温反应现象的分布特点、检测温度值变化；采用分子生物学方法研究循经脂肪组织中UCP1mRNA表达增强产热与产生循经高温反应现象的相关性,为揭示循经高温反应的机制提供实验依据。方法：本研究共分为两部分。第一部分,将家兔随机分为实验性胆囊炎家兔模型组和空白对照组；采用胆总管缩窄结扎并于胆囊内注射大肠杆菌液的造模方法,建立实验性胆囊炎家兔模型。分别采用红外热像仪与红外温度计于术前及术后第14天在模型两侧腹部循胆经部位,进行测温、采集图像和温度数据。分析实验性胆囊炎家兔造模术诱导循经高温现象产生的成功率；观察家兔体表产生的循经高温现象的分布特点及检测指标的动态变化,对两种检测指标进行比较；对家兔术后第14天与术前温度变化进行比较。第二部分,采用成功诱导产生循经高温现象的实验家兔模型组及与其相对应的空白对照组家兔作为实验动物,于术后第14天取材。分别用UNIQ-10离心柱法和Trizol法提取实验家兔两侧腹部循胆经出现循经高温线的部位的脂肪组织总RNA,并对两种方法提取的总RNA进行比较,选择其中之一作为最为适宜的提取方法。提取的总RNA逆转录后,利用实时定量PCR技术对循经高温现象产生部位脂肪组织中UCP1mRNA表达水平进行检测,以观察实验性胆囊炎家兔模型诱导的循经高温现象的产生对脂肪组织中UCP1基因表达水平的影响。结果：第一部分1.红外热像仪采集图像与红外温度计测温测定实验家兔两侧腹部循胆经部位温度数据相比较,发现这两种方法所检测出的温度值变化的趋势基本一致,即兔术后第14天被测部位温度较术前升高；并且头侧温度高于尾侧温度。这一观察结果表明,虽红外温度计与红外热像扫描仪所得出的结果在精度上会有差别(1℃左右),但这两种方法在客观地反映循经温度变化的趋势上是基本一致的。故此本实验建立的红外温度计检测循经高温反应的方法具有可行性,作为本实验的手段之一,保障了相关实验数据采集和顺利进行。2.对成功诱导产生的循经高温现象的模型进行观察发现：家兔躯干双侧面可出现纵向高温线,其走行与足少阳胆经走行一致,有些较宽,偶有覆盖其它经和串经现象。平均长度为5-9 cm,最长可达躯干全长。其温度变化趋势的特点是：头侧温度高于尾侧,并且右侧出现的高温线温度值较左侧温度值高。3.在实验性胆囊炎家兔造模术诱导循经高温现象产生的成功率分析中,通过对检测指标及图表进行分析得出,实验模型出现循经高温反应现象的成功率约为60%。4.在利用实验性胆囊炎家兔造模术诱导循经高温现象产生的实验中,对红外温度计测温法测得的温度数据进行统计学分析,得出：模型组家兔被测部位温度同体比较术后第14天较术前有显著性增高(P<0.01)；空白对照组家兔同体比较前后测温差异无显著性(P>0.01)；模型组与对照组家兔被测部位术后第14天与术前温度差值的组间比较,模型组较空白对照组均有非常显著性(P<0.01)。第二部分1.脂肪组织总RNA的提取方法是分析UCP1mRNA的关键技术,而根据实验检测指标需要摸索出适合本实验要求的提取方法。通过反复摸索,发现Trizol法更适合作为本实验脂肪组织总RNA的提取方法。在UNIQ-10离心柱法和Trizol法提取的脂肪组织总RNA的比较结果中,纯度比较结果是：Trizol法、UNIQ-10离心柱法提取的总RNA分别取3个样品进行测定,经测定其OD值(A260／A280)的平均值分别为1.598、1.562,实验数据显示Trizol法提取的总RNA纯度较高,而UNIQ-10离心柱提取的总RNA纯度相对较低,离心柱试剂盒抽提的纯度稍次于传统的经典方法,但其比值均已超过质控要求；完整性比较结果是：由电泳图明显可见Trizol法、UNIQ-10离心柱法提取的家兔脂肪组织的总RNA的条带均清晰且有一定的亮度,这表明两种方法提取的总RNA都比较完整,但Trizol法提取的总RNA的条带清晰度及亮度均高于UNIQ-10离心柱法提取的总RNA的条带,表明其完整性更好。根据以上分析,本实验最终采用了Trizol法提取总RNA。电泳结果表明所提取的总RNA符合RT及Real Time PCR的质控要求；通过将UNIQ-10离心柱法与Trizol法进行比较,结果显示Trizol法更适合作为本实验脂肪组织总RNA的提取方法。2.在分析循经高温现象的产生对脂肪组织中UCP1mRNA表达的影响的实验中,模型组和空白对照组家兔被测部位Real-Time PCR测定的脂肪组织UCP1基因表达水平测定结果：模型组Ct值较空白对照组明显降低,表明模型组被测部位脂肪组织中UCP1mRNA基因表达水平明显升高(P<0.01)。结论：1.利用实验性胆囊炎家兔造模术可以诱导模型腹部沿胆经出现循经高温反应现象,并有一定分布特征,其温度变化趋势的特点是：头侧温度高于尾侧,并且右侧出现的高温线温度值较左侧温度值高。2.本实验建立的红外温度计简易测温方法可以客观地反映循经高温反应的温度变化,具有实用、简便和经济性与普及价值。3.实验性胆囊炎模型家兔出现循经高温反应时,循经脂肪组织中UCP1的基因表达水平升高,表明脂肪组织产热增加。因此,结果提示UCP1与循经高温反应现象具有密切相关性。

全文目录


中文摘要  7-10
ABSTRACT  10-14
英文缩略语  14-15
文献综述  15-28
  综述一:循经高温现象的医学研究进展  15-22
    1. 概述  15
    2. 循经高温现象的基本概念  15
    3. 循经高温现象的分布特点  15-16
    4. 循经高温现象产生的诱发因素  16
    5. 循经高温现象产生的机制  16-20
    6. 循经高温现象的动物模型研究  20-21
    7. 小结  21-22
  综述二:解偶联蛋白1(UCP_1)与棕色脂肪组织产热及能量代谢相关性的研究进展  22-28
    1. 概述  22
    2. 解偶联蛋白家族(UCPs)的基本介绍  22-23
    3. 解偶联蛋白家族(UCPs)的产热机制  23-24
    4. 解偶联蛋白1(UCP_1)的基本介绍  24
    5. 解偶联蛋白1(UCP_1)与棕色脂肪组织产热及能量代谢相关性的研究  24-26
    6. 小结  26-28
正文  28-88
  前言  28-30
  实验技术路线图  30-31
  实验一:实验性胆囊炎家兔模型的制作与体表循经高温现象的检测观察  31-77
    材料  31-32
      1 实验动物  31
      2 主要药品与试剂  31
      3 主要仪器  31-32
    方法  32-36
      1 实验流程图  32
      2 动物分组  32
      3 实验性胆囊炎家兔造模术  32-33
        3.1 造模方法  32-33
        3.2 实验动物观察  33
        3.3 实验性胆囊炎家兔造模术诱发循经高温现象产生的成功率标准  33
      4 温度数据测定方法——红外温度计测温法的确立  33-36
        4.1 红外热像仪图像采集  33-35
        4.2 红外温度计测温  35-36
        4.3 红外温度计测温与红外热像仪图像采集的比较  36
      5 数据库的建立与整合  36
      6 资料统计方法  36
    结果  36-74
      1 温度数据测定方法——红外温度计测温法的确立  36-41
        1.1 红外热像仪图像采集结果  36-37
        1.2 红外温度计测温结果  37-41
        1.3 红外温度计测温与红外热像仪图像采集结果比较  41
      2 红外温度计测温方法测定的温度数据  41-62
        2.1 实验性胆囊炎模型组家兔术后第14天和术前温度  41-52
        2.2 空白对照组家兔术后第14天和术前温度  52-62
      3 家兔术后第14天和术前测温结果比较  62-72
        3.1 实验性胆囊炎模型组家兔术后第14天与术前温度变化比较  62-65
        3.2 空白对照组家兔第14天与第1天温度变化比较  65-69
        3.3 实验性胆囊炎模型组与空白对照组家兔术后第14天与术前温差比较  69-72
      4 实验性胆囊炎家兔造模术诱发循经高温现象产生的成功率分析  72-73
      5 对成功诱发产生的循经高温线的观察结果  73-74
    讨论  74-77
      1 循经高温现象的探讨  74
        1.1 指标的选择  74
        1.2 循经高温现象的产生机制及其与诱发因素的互联关系  74
      2 实验性胆囊炎家兔模型的建立与评价  74-77
        2.1 形态学评价及动态变化  74-76
        2.2 指标的选择及其与循经高温现象的互联关系  76-77
  实验二:循经高温现象的产生对脂肪组织中UCP_1mRNA表达的影响  77-87
    材料  77-78
      1 实验动物  77
      2 主要药品与试剂  77
      3 主要仪器  77-78
    方法  78-82
      1 实验流程图  78
      2 动物分组  78
      3 取材  78-79
        3.1 取材方法  78
        3.2 取材范围  78-79
        3.3 组织样品处理  79
      4 脂肪组织总RNA提取方法——Trizol法的确立  79-80
        4.1 UNIQ-10离心柱法提取总RNA  79
        4.2 Trizol法提取总RNA  79-80
        4.3 UNIQ-10离心柱法与Trizol法的比较  80
      5 逆转录反应(RT)  80-81
        5.1 反应体系  81
        5.2 反应条件  81
      6 实时定量PCR(Real-Time PCR)  81-82
        6.1 引物设计  81
        6.2 反应体系  81
        6.3 反应条件  81-82
        6.4 指标检测  82
      7 资料统计方法  82
    结果  82-85
      1 脂肪组织总RNA提取方法——Trizol法的确立  82-83
        1.1 UNIQ-10离心柱法和Trizol法提取的总RNA的纯度比较  82
        1.2 UNIQ-10离心柱法和Trizol法提取的总RNA的完整性比较  82-83
        1.3 UNIQ-10离心柱法和Trizol法提取的总RNA的比较结果  83
      2 循经高温反应脂肪组织中UCP_1mRNA表达的变化  83-85
    讨论  85-87
      1 循经高温现象与脂肪组织产热与能量代谢的互联关系  85
      2 UCP_1与脂肪组织产热与能量代谢的相关性研究  85
      3 实时定量PCR技术的建立与评价  85-87
        3.1 实时定量PCR技术优势性浅析  85-86
        3.2 指标的选择及其互联关系  86-87
  两部分实验小结  87
  结论  87-88
参考文献  88-95
附表  95-113
致谢  113-114
个人简历  114-115

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 肝及胆疾病 > 胆囊疾病
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