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Th17/Treg失衡在EAE小鼠模型免疫学发病机制中的作用

作　者: 侯娟
导　师: 曹颖平
学　校: 福建医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: EAE Th17 CD4~+CD25~+ Treg Foxp3
分类号: R744.51
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:建立慢性-非缓解性EAE小鼠模型,运用RT-PCR、ELISA、Western blot等方法在基因及蛋白水平检测IL-17、IL-6、Foxp3、在小鼠脑及脾组织中的动态表达变化,以探讨Th17/CD4+CD25+Treg失衡在慢性EAE小鼠模型免疫学发病机制中的作用。方法:42只近交系清洁级8-10周健康雌性C57BL/6小鼠,随机分为佐剂对照组(n=18只)、EAE组(n=24只);各组小鼠又分为发病初、发病高峰和慢性期组。EAE组用人工合成的MOG35-55和完全弗氏佐剂免疫C57BL/6小鼠,佐剂对照组用等量的PBS代替MOG35-55,按Bensen[1]评分标准进行临床症状评分,运用实时荧光定量RT-PCR、ELISA、流式细胞术及Western blot技术检测各组各期小鼠IL-17、IL-6、IL-4及CD4+CD25+Treg细胞功能相关标记Foxp3的表达变化。结果:1.小鼠模型模型组小鼠发病率达75%(18/24),最高临床评分可达5分;佐剂对照组发病率及临床评分均为0。2.实时荧光定量RT-PCR结果显示EAE组小鼠脑组织IL-6mRNA及IL-17mRNA的△CT值较佐剂对照组显著降低(P<0.05),高峰期最明显,而Foxp3 mRNA初期及高峰期△CT值较对照组显著升高(P<0.05),慢性期较对照组无显著差异(P>0.05)。3. ELISA结果表明佐剂对照组小鼠外周血IL-17含量各期之间无统计学差异(P>0.05),EAE组较对照组显著升高,高峰期最明显(P<0.05)。IL-4含量各期之间无统计学差异(P>0.05),EAE组较对照组显著降低,高峰期最明显(P<0.05)。4. Western blot结果示EAE组初期及高峰期Foxp3蛋白灰度值较对照组明显降低(P<0.05),慢性期有所上升(P<0.05);5.流式细胞术检测各组脾淋巴细胞CD4+CD25+Treg/CD4+的比例差异无统计学意义(P>0.05)。Treg的免疫抑制功能单位在EAE组慢性期较其他各组显著升高(P<0.05)。结论:1.慢性EAE中IL-17mRNA及蛋白水平的表达与疾病的严重程度正相关。2. CD4+CD25+Treg细胞的功能相关单位Foxp3在EAE发病初期及高峰期受抑制,并在疾病慢性期反应性上调,使症状趋于缓解。3. Th17/Treg平衡在疾病各期的变化在EAE病程中起到关键性作用, IL-6在EAE发病初期及高峰期加重Th17/Treg失衡,而在慢性期却起到相反的作用。4. Western blot结果示EAE组初期及高峰期Foxp3蛋白灰度值较对照组明显降

全文目录


缩略词简表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
正文  10-43
  第一章 前言  10-13
  第二章 材料和方法  13-25
    2.1 主要试剂和药品  13-14
    2.2 主要仪器及耗材  14-15
    2.3 主要试剂及动物的准备  15
    2.4 动物分组  15-16
    2.5 模型制作过程  16
    2.6 模型评价  16-18
    2.7 RT-PCR  18-19
    2.8 流式细胞术  19-20
    2.9 ELISA  20-22
    2.10 Western blot  22-24
    2.11 分析及统计方法  24-25
  第三章 结果  25-33
    3.1 实验小鼠的行为学变化  25-27
    3.2 RT-PCR 结果  27-29
    3.3 流式细胞术结果  29-31
    3.4 ELISA 结果  31-32
    3.5 Western blot 结果  32-33
  第四章 讨论  33-39
    4.1 多发性硬化的临床特征及发病机制  33
    4.2 EAE 模型的建立及临床变化  33-35
    4.3 Th17 在 EAE 及对照组小鼠脑组织及外周血中的表达变化  35-36
    4.4 CD4~+CD25~+Treg 细胞及其功能相关单位在 EAE 中的表达变化  36-37
    4.5 TH17/Treg 失衡的可能机制  37-39
  第五章 结论  39-40
  参考文献  40-43
致谢  43-44
硕士期间发表的论文  44-45
综述 多发性硬化免疫机制研究新进展  45-54
  正文  45-51
  参考文献  51-54

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学 > 脊髓疾病 > 脱髓鞘疾病 > 多发性硬化
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