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海南荔枝种质资源对荔枝霜疫霉病抗性鉴定及霜疫霉病防治药效筛选

作　者: 陶挺燕
导　师: 何凡
学　校: 海南大学
专　业: 分子植物病理学
关键词: 荔枝霜疫霉病生物学特性药效测定抗性鉴定 SRAP分子标记
分类号: S436.67
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

荔枝(Litchi chinensis Sonn.)属常绿性乔木,是我国南方亚热带地区广泛栽培的果树。随着荔枝生产的发展,病害已成为影响荔枝果实产量和质量的重要因素。其中以荔枝霜疫霉病((Peronophythora litchi Chen ex Ko et. al))对荔枝生产的危害最为严重,该病不仅造成采前的大量减产,而且也是采后贮运保鲜期间的主要致病菌。本研究针对该问题,在充分了解荔枝霜疫霉菌生物学特性的基础上,进一步掌握田间荔枝霜疫霉发病规律,并通过室内药剂筛选和田间药效测定,为荔枝霜疫霉病的防治提供了安全高效的药剂；同时从荔枝种质资源对荔枝霜疫霉病的抗性入手通过室内和田间结合的鉴定方法,筛选出抗性优良的种质,为海南抗荔枝霜疫霉病的荔枝优良种质大面积推广和抗性育种提供基础数据。通过研究取得以下主要结果：生物学特性研究结果表明：荔枝霜疫霉病菌丝生长的适宜温度是20-30℃,最适温度为27℃；适宜pH值为4-8,最适pH值为6；以可溶性淀粉、山梨酸和甘露醇为碳源有利于菌丝生长；以酵母菌膏为氮源有利于菌丝生长；不同光照处理下,光暗交替有利于菌丝生长。药剂筛选研究结果表明：室内供试12种药剂中,44%百菌清·精甲霜灵FW、69%烯酰吗啉·锰锌WP和68%精甲霜灵WG 3种杀菌剂对荔枝霜疫霉的抑菌效果显著高于其它药剂,将室内筛选出的抑菌效果较好的三种杀菌剂进行田间药效试验,上述三种杀菌剂对荔枝霜疫霉病在田间均有明显的防治效果。从防效来看,生产上建议使用浓度44%百菌清·精甲霜灵FW为100-150mg/L,69%烯酰吗啉·锰锌WP为150-200mg/L,68%精甲霜灵WG为150-200mg/L。抗性鉴定研究结果表明：结合对荔枝种质资源农艺性状、果实品质及气象因子与荔枝霜疫霉病病情消长关系的田间观测及分析,进行综合评价,筛选出抗病种质农美9号、青皮和荔枝13,但果实品质一般；同时筛选出果实品质优良的感病种质白糖罂、妃子笑、鹅蛋荔和紫娘喜。通过对上述结果的综合分析,并结合SRAP分子标记技术,将13份荔枝种质资源进行遗传多样性进行分析,根据抗性鉴定结果,构建抗感DNA池,寻找与抗病种质相关的标记,为荔枝分子辅助育种研究提供基础资料。利用筛选出的12对SRAP引物组合分析13对供试荔枝材料的多样性,共产生147条谱带,其中多态性谱带112条,平均多态性为71.72%；对13个荔枝种质进行聚类分析,其遗传相似系数在0.69-0.94之间,在0.71水平上可分为三类。荔枝种质整体的遗传多样性水平偏低,遗传基础相对狭窄,遗传背景相似度比较高。这可能主要和荔枝育种工作中的育种主体亲本的选择有关。对荔枝进行SRAP标记技术,尚未找到稳定的扩增条带,因此还需进一步深入研究。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-12
1 前言  12-22
  1.1 荔枝的生物学特性  12-13
  1.2 荔枝的价值  13
    1.2.1 营养价值  13
    1.2.2 济价值  13
  1.3 荔枝种质资源  13-14
  1.4 荔枝产业现状及影响因素  14-15
    1.4.1 发展现状  14
    1.4.2 影响我国荔枝产业发展的因素  14-15
  1.5 荔枝霜疫霉病的研究进展  15-17
    1.5.1 荔枝霜疫霉病的危害  15
    1.5.2 荔枝霜疫霉的生物学特性  15
    1.5.3 荔枝霜疫霉病的症状  15-16
    1.5.4 荔枝霜疫霉的病害循环  16
    1.5.5 荔枝霜疫霉的发病规律  16
    1.5.6 荔枝霜疫霉病的防治措施  16-17
      1.5.6.1 农业防治  16
      1.5.6.2 药剂防治  16-17
  1.6 抗性鉴定  17-21
    1.6.1 传统抗病性鉴定  17-18
      1.6.1.1 鉴定方法  17-18
      1.6.1.2 接种技术  18
      1.6.1.3 田间试验设计  18
      1.6.1.4 抗病性的分级评定  18
    1.6.2 分子水平抗性鉴定  18-21
      1.6.2.1 分子标记的发展现状  18-19
      1.6.2.2 SRAP分子标记在生物中的应用  19-20
      1.6.2.3 遗传图谱的构建  20
      1.6.2.4 遗传多样性分析  20
      1.6.2.5 重要性状的标记  20-21
  1.7 海南岛总的自然环境条件、气候条件  21
  1.8 本研究的目的与意义  21-22
2 材料与方法  22-32
  2.1 试验材料  22-24
    2.1.1 供试植物材料  22
    2.1.2 供试菌种  22
    2.1.3 供试菌源  22-23
    2.1.4 供试培养基  23
    2.1.5 供试农药  23-24
    2.1.6 主要试剂及溶液配制  24
      2.1.6.1 主要试剂  24
      2.1.6.2 主要溶液配制  24
  2.2 试验方法  24-32
    2.2.1 病原菌的分离、纯化及鉴定  24-25
    2.2.2 病原菌的生物学特性测定  25
      2.2.2.1 温度对菌丝生长的影响  25
      2.2.2.2 pH对菌丝生长的影响  25
      2.2.2.3 碳源对菌丝生长的影响  25
      2.2.2.4 氮源对菌丝生长的影响  25
      2.2.2.5 光照对菌丝生长的影响  25
    2.2.3 病原菌的药效测定  25-27
      2.2.3.1 室内毒力测定  25-26
      2.2.3.2 田间药效测定  26-27
    2.2.4 传统抗性鉴定  27-29
      2.2.4.1 室内(人工接种)抗性鉴定  27-28
        2.2.4.1.1 离体接种  27
        2.2.4.1.2 活体接种  27-28
      2.2.4.2 大田(自然发病)抗性鉴定  28-29
    2.2.5 分子水平抗性鉴定  29-32
      2.2.5.1 荔枝总DNA的提取和纯化(改良CTAB法)  29-30
      2.2.5.2 构建混合DNA池  30-31
      2.2.5.3 SRAP分析  31
      2.2.5.4 检测与数据分析  31-32
3 结果分析  32-58
  3.1 致病性测定结果  32
  3.2 形态学鉴定结果  32-33
    3.2.1 菌落形态  32
    3.2.2 病原菌形态  32-33
  3.3 生物学特性结果  33-36
    3.3.1 温度对菌丝生长的影响  33
    3.3.2 PH对菌丝生长的影响  33-34
    3.3.3 碳源对菌丝生长的影响  34-35
    3.3.4 氮源对菌丝生长的影响  35
    3.3.5 光照对菌丝生长的影响  35-36
  3.4 病原菌的药效测定  36-39
    3.4.1 室内毒力测定  36-37
      3.4.1.1 杀菌剂对荔枝霜疫霉菌的EC_(50)比较  36
      3.4.1.2 荔枝霜疫霉对杀菌剂的敏感性比较  36-37
      3.4.1.3 室内毒力测定结果  37
    3.4.2 田间药效测定  37-39
  3.5 抗性鉴定结果  39-52
    3.5.1 室内(人工接种)抗性鉴定结果  39-42
      3.5.1.1 离体抗性鉴定结果  39-40
      3.5.1.2 活体抗性鉴定结果  40-42
    3.5.2 大田(自然发病)抗性鉴定结果  42-46
      3.5.2.1 生育期对荔枝霜疫霉病的相关性分析  42-43
      3.5.2.2 物候期对荔枝霜疫霉病的相关性分析  43-46
    3.5.3 荔枝种质资源对荔枝霜疫霉病抗性鉴定结果分析  46-47
      3.5.3.1 室内离体鉴定结果分析  46
      3.5.3.2 室内活体鉴定结果分析  46
      3.5.3.3 大田鉴定结果分析  46-47
    3.5.4 果实品质与荔枝霜疫霉病病情指数消长的关系  47-49
    3.5.5 气象因子与荔枝霜疫霉病病情指数消长的关系  49-52
  3.6 SRAP分子标记  52-58
    3.6.1 荔枝基因组DNA的提取  52
    3.6.2 13个荔枝种质遗传多样性SRAP分析研究  52-58
      3.6.2.1 扩增结果  52-54
      3.6.2.2 种质间的遗传距离及聚类分析  54-58
    3.6.3 荔枝抗病种质的SRAP标记  58
4 结论  58-59
  4.1 生物学特性测定结果与分析  58
  4.2 药效测定结果与分析  58-59
  4.3 抗性鉴定结果与分析  59
  4.4 SRAP分子标记结果与分析  59
5 讨论及进一步解决的问题  59-62
  5.1 讨论  59-60
  5.2 有待进一步解决的问题  60-62
    5.2.1 加强药效试验合理化  60
    5.2.2 继续发掘抗荔枝种质资源  60
    5.2.3 荔枝对霜疫霉病抗性机制多样性  60
    5.2.4 抗性级别的变化  60-61
    5.2.5 抗性基因研究  61-62
参考文献  62-65
附录  65-66
致谢  66

海南荔枝种质资源对荔枝霜疫霉病抗性鉴定及霜疫霉病防治药效筛选

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