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新城疫纳米乳疫苗的研制

作 者: 陈建民
导 师: 欧阳五庆
学 校: 西北农林科技大学
专 业: 细胞生物学
关键词: 新城疫 纳米乳 疫苗 免疫效果
分类号: S852.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要


本研究制备出新城疫纳米乳疫苗(NDV-NE),目的在于改良常规疫苗存在的问题。通过对该纳米乳疫苗的的稳定性、安全性及免疫效果研究,为纳米乳疫苗后期研究与应用提供依据。第一部分:新城疫纳米乳疫苗的制备及其质量评价。本章采用伪三元相图法筛选处方,以吐温-80、斯盘-80、无水乙醇、液体石蜡、盐酸左旋咪唑和新城疫抗原为原料,采用加水滴定法制备了新城疫纳米乳疫苗,并对其结构类型、形态粒径、黏度、稳定性进行考察。结果显示:新城疫纳米乳疫苗外观澄清透明,结构类型为W/O型;透射电镜下呈圆形,平均粒径为364 nm,粒径分布均匀,黏度为5s·0.4 mL-1;高速离心试验5000r/min,离心30min,无破乳现象发生;稳定试验表明,4℃保存期暂定为6个月,20℃保存期为6个月,40℃保存期为1个月。新城疫纳米乳疫苗制备工艺简单、稳定性好、黏度低,符合生物制品质量要求。第二部分:新城疫纳米乳疫苗的安全性评价。本章采用急性经口毒性试验、细胞毒性试验和靶向动物试验考察了纳米乳疫苗及其载体的安全性。结果表明:纳米乳载体LD50>5000 mg/kg,属实际无毒;纳米乳载药浓度在5μg/mL以下,无细胞毒性;新城疫纳米乳疫苗口服、注射接种安全。研究表明,该纳米疫苗使用安全,符合生物制品安全性要求。第三部分:影响新城疫纳米乳疫苗的抗体效价的因素。本章考察了新城疫纳米乳疫苗中盐酸左旋咪唑含量、抗原含量、口服免疫剂量对抗体效价的影响。结果表明, NDV-NE盐酸左旋咪唑最佳含量为1%,新城疫抗原含量为30%,免疫剂量为0.75mL。本研究确定纳米乳疫苗的最佳配比,为后期研究提供依据。第四部分:新城疫纳米乳疫苗的免疫效果初步研究。本章在前期试验研究基础上,通过血凝抑制试验、淋巴细胞转化试验、局部组织IgA含量测定及攻毒试验,考察新城疫纳米乳疫苗对机体免疫功能的影响。结果显示:雏鸡经口服NDV-NE免疫后血清中HI抗体效价、局部组织的IgA含量与淋巴细胞转化率均明显上升,这表明NDV-NE不仅能够引发体液免疫和细胞免疫,而且可激发黏膜免疫,从而发挥全身的免疫应答,形成广泛而有效的免疫保护作用。由此可见,该纳米乳疫苗免疫效果显著。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-11
第一章 文献综述  11-23
  1.1 新城疫的研究进展  11-18
    1.1.1 新城疫流行特点  11
    1.1.2 新城疫发病原因  11-13
    1.1.3 新城疫的防治  13
    1.1.4 新城疫疫苗研究进展  13-18
  1.2 纳米乳研究进展  18-23
    1.2.1 纳米乳的结构类型及其机理  18-19
    1.2.2 纳米乳的制备方法  19-20
    1.2.3 纳米载体系统的优点  20-21
    1.2.4 纳米生物制品研究概况  21-23
第二章 新城疫纳米乳的制备及其质量评价  23-37
  2.1 材料  23-24
    2.1.1 主要药品  23
    2.1.2 主要仪器  23-24
  2.2 方法  24-26
    2.2.1 空白纳米乳配方组成的筛选  24-25
    2.2.2 NDV-NE 配方的确定及其制备  25
    2.2.3 NDV-NE 质量评价  25-26
  2.3 结果与分析  26-35
    2.3.1 空白纳米乳配方的初步筛选  26-31
    2.3.2 空白纳米乳配方的确定  31
    2.3.3 NDV-NE 的制备  31-32
    2.3.4 NDV-NE 的质量评价  32-35
  2.4 讨论  35-36
    2.4.1 纳米乳的制备  35-36
    2.4.2 纳米乳的质量评价  36
  2.5 小结  36-37
第三章 新城疫纳米乳疫苗及其纳米乳载体的安全评价  37-42
  3.1 材料  37
    3.1.1 主要药品  37
    3.1.2 试验动物和细胞株  37
    3.1.3 主要仪器  37
  3.2 方法  37-39
    3.2.1 纳米乳载体对小鼠成纤维细胞生长影响  37-38
    3.2.2 纳米乳载体急性毒性试验  38
    3.2.3 NDV-NE 安全性试验  38-39
  3.3 结果与分析  39-41
    3.3.1 纳米乳载体对小鼠成纤维细胞生长影响  39-40
    3.3.2 纳米乳载体对小鼠成纤维细胞的毒性结果  40-41
    3.3.3 纳米乳载体急性毒性试验  41
    3.3.4 NDV-NE 的安全性评价  41
  3.4 讨论  41
    3.4.1 细胞毒性试验  41
    3.4.2 急性毒性试验  41
    3.4.3 NDV-NE 的安全性评价  41
  3.5 小结  41-42
第四章 影响新城疫纳米乳疫苗抗体效价的因素研究  42-48
  4.1 材料  42
    4.1.1 试验动物  42
    4.1.2 试验药品  42
    4.1.3 主要仪器  42
  4.2 方法  42-43
    4.2.1 试验分组  42-43
    4.2.2 抗体效价测定  43
  4.3 结果与分析  43-46
    4.3.1 盐酸左旋咪唑含量对抗体效价的影响  43-44
    4.3.2 抗原含量对抗体效价影响  44-45
    4.3.3 免疫剂量对抗体效价影响  45-46
  4.4 讨论  46-47
    4.4.1 盐酸左旋咪唑影响  46-47
    4.4.2 抗原含量  47
    4.4.3 免疫剂量  47
  4.5 小结  47-48
第五章 新城疫米乳疫苗免疫效果的初步研究  48-55
  5.1 材料  48
    5.1.1 试验动物  48
    5.1.2 主要药品与试剂  48
    5.1.3 主要仪器  48
  5.2 方法  48-49
    5.2.1 试验分组  48-49
    5.2.2 HI 抗体效价测定  49
    5.2.3 外周血淋巴细胞转化试验  49
    5.2.4 IgA 抗体效价测定  49
    5.5.5 攻毒保护试验  49
  5.3 结果与分析  49-53
    5.3.1 HI 抗体效价测定结果  49-51
    5.3.2 外周血淋巴转化试验结果  51-52
    5.3.3 IgA 抗体效价检测结果  52-53
    5.3.4 攻毒试验  53
  5.4 讨论  53-54
    5.4.1 HI 抗体效价测定  53-54
    5.4.2 外周血淋巴细胞转化试验  54
    5.4.3 IgA 滴度测定  54
    5.4.4 攻毒试验  54
  5.5 小结  54-55
结论  55-56
参考文献  56-61
致谢  61-62
个人简介  62

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 兽医基础科学 > 血清学
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