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新城疫纳米乳疫苗的研制
作 者: 陈建民
导 师: 欧阳五庆
学 校: 西北农林科技大学
专 业: 细胞生物学
关键词: 新城疫 纳米乳 疫苗 免疫效果
分类号: S852.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要
本研究制备出新城疫纳米乳疫苗(NDV-NE),目的在于改良常规疫苗存在的问题。通过对该纳米乳疫苗的的稳定性、安全性及免疫效果研究,为纳米乳疫苗后期研究与应用提供依据。第一部分:新城疫纳米乳疫苗的制备及其质量评价。本章采用伪三元相图法筛选处方,以吐温-80、斯盘-80、无水乙醇、液体石蜡、盐酸左旋咪唑和新城疫抗原为原料,采用加水滴定法制备了新城疫纳米乳疫苗,并对其结构类型、形态粒径、黏度、稳定性进行考察。结果显示:新城疫纳米乳疫苗外观澄清透明,结构类型为W/O型;透射电镜下呈圆形,平均粒径为364 nm,粒径分布均匀,黏度为5s·0.4 mL-1;高速离心试验5000r/min,离心30min,无破乳现象发生;稳定试验表明,4℃保存期暂定为6个月,20℃保存期为6个月,40℃保存期为1个月。新城疫纳米乳疫苗制备工艺简单、稳定性好、黏度低,符合生物制品质量要求。第二部分:新城疫纳米乳疫苗的安全性评价。本章采用急性经口毒性试验、细胞毒性试验和靶向动物试验考察了纳米乳疫苗及其载体的安全性。结果表明:纳米乳载体LD50>5000 mg/kg,属实际无毒;纳米乳载药浓度在5μg/mL以下,无细胞毒性;新城疫纳米乳疫苗口服、注射接种安全。研究表明,该纳米疫苗使用安全,符合生物制品安全性要求。第三部分:影响新城疫纳米乳疫苗的抗体效价的因素。本章考察了新城疫纳米乳疫苗中盐酸左旋咪唑含量、抗原含量、口服免疫剂量对抗体效价的影响。结果表明, NDV-NE盐酸左旋咪唑最佳含量为1%,新城疫抗原含量为30%,免疫剂量为0.75mL。本研究确定纳米乳疫苗的最佳配比,为后期研究提供依据。第四部分:新城疫纳米乳疫苗的免疫效果初步研究。本章在前期试验研究基础上,通过血凝抑制试验、淋巴细胞转化试验、局部组织IgA含量测定及攻毒试验,考察新城疫纳米乳疫苗对机体免疫功能的影响。结果显示:雏鸡经口服NDV-NE免疫后血清中HI抗体效价、局部组织的IgA含量与淋巴细胞转化率均明显上升,这表明NDV-NE不仅能够引发体液免疫和细胞免疫,而且可激发黏膜免疫,从而发挥全身的免疫应答,形成广泛而有效的免疫保护作用。由此可见,该纳米乳疫苗免疫效果显著。
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全文目录
摘要 5-6 ABSTRACT 6-11 第一章 文献综述 11-23 1.1 新城疫的研究进展 11-18 1.1.1 新城疫流行特点 11 1.1.2 新城疫发病原因 11-13 1.1.3 新城疫的防治 13 1.1.4 新城疫疫苗研究进展 13-18 1.2 纳米乳研究进展 18-23 1.2.1 纳米乳的结构类型及其机理 18-19 1.2.2 纳米乳的制备方法 19-20 1.2.3 纳米载体系统的优点 20-21 1.2.4 纳米生物制品研究概况 21-23 第二章 新城疫纳米乳的制备及其质量评价 23-37 2.1 材料 23-24 2.1.1 主要药品 23 2.1.2 主要仪器 23-24 2.2 方法 24-26 2.2.1 空白纳米乳配方组成的筛选 24-25 2.2.2 NDV-NE 配方的确定及其制备 25 2.2.3 NDV-NE 质量评价 25-26 2.3 结果与分析 26-35 2.3.1 空白纳米乳配方的初步筛选 26-31 2.3.2 空白纳米乳配方的确定 31 2.3.3 NDV-NE 的制备 31-32 2.3.4 NDV-NE 的质量评价 32-35 2.4 讨论 35-36 2.4.1 纳米乳的制备 35-36 2.4.2 纳米乳的质量评价 36 2.5 小结 36-37 第三章 新城疫纳米乳疫苗及其纳米乳载体的安全评价 37-42 3.1 材料 37 3.1.1 主要药品 37 3.1.2 试验动物和细胞株 37 3.1.3 主要仪器 37 3.2 方法 37-39 3.2.1 纳米乳载体对小鼠成纤维细胞生长影响 37-38 3.2.2 纳米乳载体急性毒性试验 38 3.2.3 NDV-NE 安全性试验 38-39 3.3 结果与分析 39-41 3.3.1 纳米乳载体对小鼠成纤维细胞生长影响 39-40 3.3.2 纳米乳载体对小鼠成纤维细胞的毒性结果 40-41 3.3.3 纳米乳载体急性毒性试验 41 3.3.4 NDV-NE 的安全性评价 41 3.4 讨论 41 3.4.1 细胞毒性试验 41 3.4.2 急性毒性试验 41 3.4.3 NDV-NE 的安全性评价 41 3.5 小结 41-42 第四章 影响新城疫纳米乳疫苗抗体效价的因素研究 42-48 4.1 材料 42 4.1.1 试验动物 42 4.1.2 试验药品 42 4.1.3 主要仪器 42 4.2 方法 42-43 4.2.1 试验分组 42-43 4.2.2 抗体效价测定 43 4.3 结果与分析 43-46 4.3.1 盐酸左旋咪唑含量对抗体效价的影响 43-44 4.3.2 抗原含量对抗体效价影响 44-45 4.3.3 免疫剂量对抗体效价影响 45-46 4.4 讨论 46-47 4.4.1 盐酸左旋咪唑影响 46-47 4.4.2 抗原含量 47 4.4.3 免疫剂量 47 4.5 小结 47-48 第五章 新城疫米乳疫苗免疫效果的初步研究 48-55 5.1 材料 48 5.1.1 试验动物 48 5.1.2 主要药品与试剂 48 5.1.3 主要仪器 48 5.2 方法 48-49 5.2.1 试验分组 48-49 5.2.2 HI 抗体效价测定 49 5.2.3 外周血淋巴细胞转化试验 49 5.2.4 IgA 抗体效价测定 49 5.5.5 攻毒保护试验 49 5.3 结果与分析 49-53 5.3.1 HI 抗体效价测定结果 49-51 5.3.2 外周血淋巴转化试验结果 51-52 5.3.3 IgA 抗体效价检测结果 52-53 5.3.4 攻毒试验 53 5.4 讨论 53-54 5.4.1 HI 抗体效价测定 53-54 5.4.2 外周血淋巴细胞转化试验 54 5.4.3 IgA 滴度测定 54 5.4.4 攻毒试验 54 5.5 小结 54-55 结论 55-56 参考文献 56-61 致谢 61-62 个人简介 62
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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 兽医基础科学 > 血清学
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