学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

Pleurotus ferulae发酵产漆酶的研究

作　者: 陈友枝
导　师: 丁重阳
学　校: 江南大学
专　业: 生物化工
关键词: 阿魏蘑漆酶优化形态纯化酶学性质
分类号: TQ925.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 60次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

木质素是一种芳香族高分子化合物，与纤维素、半纤维素结合在一起。木质素的存在不仅使纤维素的利用受到限制，而且还带来了环境问题。木质素酶系主要包括三种酶：木质素过氧化物酶(lignin peroxidase，简称LiP)、锰过氧化物酶(mangnase peroxidase，简称MnP)和漆酶(laccase，简称Lac)。其中漆酶是一种含铜的多酚氧化酶，广泛分布于植物、昆虫和真菌中，其中白腐真菌漆酶研究的最为广泛。漆酶作为一种生物催化剂，在环境保护和工业生产方面倍受关注，尤其在食品行业、纸浆生物漂白、工业废水处理、染料脱色、环境污染物质的降解等方面有很大的作用效果。因此，漆酶有其必要的研究价值，也具有非常大的应用潜力，成为当今研究用酶法保护环境的热点。本文采用单因素实验法，研究了多种培养液对阿魏蘑Pleurotus ferulae JM30X液态发酵产漆酶的影响。P. ferulae JM30X摇瓶发酵优化后的培养基为：葡萄糖20g/L，玉米粉10g/L，麸皮10g/L，1mmol/L的K2SO4,初始pH为9.0。500mL的三角瓶装液量为150mL，25℃，120r/min。在此条件下，最优的酶活可以达到6832.86U/L。P. ferulaeJM30X产漆酶经培养基优化后，酶活显著提高，与优化前相比，提高了6.09倍。P. ferulae JM30X菌体形态与漆酶产量之间的关系的研究，结果显示，玻璃珠的添加可改变发酵过程中菌体形态，漆酶产量在球状菌体条件下高于丝状、絮状菌丝：直径分布在0.2-0.4mm范围的菌球对漆酶的合成具有明显的促进作用；适合的葡萄糖、玉米粉和麸皮添加量，对直径在0.2-0.4mm范围的菌球形成具有重要影响。此外，添加惰性载体同样可以控制菌球的直径分布，但对漆酶的合成无促进作用。P. ferulae JM30X液体发酵后产的漆酶，经过硫酸铵沉淀、Mono Q5/50GL强阴离子交换层析和SuperdexTM7510/300GL凝胶过滤层析三步纯化步骤，得到纯化后的阿魏蘑漆酶，纯化倍数为4.85倍，回收率为26.91%。纯化后的漆酶经SDS-PAGE和Native-PAGE电泳得漆酶的表观分子量为66kDa。纯化后的漆酶在50mmol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液中，底物为ABTS时的最适反应温度为50℃-70℃，最适反应pH为3.0。P. ferulae JM30X漆酶有高的热稳定性，50℃时t1/2=7.59h。阿魏蘑漆酶在酸性pH条件下比较稳定，在碱性pH条件下，漆酶迅速失活。四种抑制剂中，只有1.0mmol/L的乙二胺四乙酸(EDTA)对漆酶酶活的抑制作用为50%，1.0mmol/L的叠氮化钠(NaN3)、二硫苏糖醇(DTT)和苯甲基磺酰氟(PMSF)对漆酶是完全抑制。纯化后的漆酶能被某些金属离子促进，但随着浓度的升高，对酶活的促进作用减小，当达到一定浓度时就会对酶活有抑制作用，而Fe2+、Fe3+在任何浓度下对漆酶酶活都完全抑制。P. ferulae JM30X漆酶的最适底物是ABTS，对ABTS的米氏常数(km)和催化效率(kcat/km)值分别为0.193mmol/L和2.73×106(mmol/L S)-1。P. ferulae JM30X漆酶是一个新的侧耳属漆酶。目前对P. ferulae JM30X液态发酵产漆酶还没有报道。此外由于P. ferulae JM30X漆酶有较好的热性，具有潜在的工业潜力和生物技术功能。

Pleurotus ferulae发酵产漆酶的研究

内容摘要

全文目录

相似论文