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辽宁碱蓬SlPEAMT基因启动子分离及盐诱导功能分析

作　者: 马晓倩
导　师: 李秋莉
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 磷酸乙醇胺氮甲基转移酶(PEAMT) TAIL-PCR 辽宁碱蓬 GUS活性 盐诱导
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


磷酸乙醇胺氮甲基转移酶(PEAMT)是合成胆碱的关键酶,胆碱是合成甜菜碱的底物,甜菜碱是一种小分子渗透调节剂,在植物抵抗渗透胁迫中起一定的作用。已经克隆了多种植物的PEAMT基因,该基因的表达受盐诱导。本文对辽宁碱蓬SIPEAMT启动子进行研究。主要内容与结果如下：通过TAIL-PCR方法获得了辽宁碱蓬SIPEAMT基因上游序列(1450bp),TSSP-TCM软件预测位于起始密码子上游-340bp处的T是转录起始位点,由此获得了SIPEAMT基因上游897bp的启动子序列。PLACE和PlantCARE序列分析表明,SlPEAMT启动子序列含有基本的转录元件：TATA-box和非生物胁迫相关元件:MYBCORE, MBS, LTR, W-box, MYC识别位点,GT-1元件,WRKY710S和LTRECOREATCOR15等。为了进一步研究获得的启动子的功能,我们对辽宁碱蓬SIPEAMT基因启动子进行了5’端缺失分析,通过PCR扩增获得了3个5’端缺失片段,分别为pPl(-897～-+343bp)、pP2(-817～+343bp)、pP3(-364～+343bp)。将缺失片段分别插入到pCAMBIA1301载体中来替代CaMV35S启动子,获得了缺失表达载体,分别命名为pCAMBIA1301-pPl, pCAMBIA1301-pP2和pCAMBIA1301-pP3。通过农杆菌介导的叶盘转化法获得了各缺失载体转基因烟草。经过PCR检测、GUS组织化学染色检测,获得转基因阳性植株。通过GUS组织化学染色和荧光定量分析研究转基因烟草中各启动子缺失片段的盐诱导功能特性。非胁迫条件下,转基因烟草叶片的GUS酶活性低。盐胁迫处理后,转基因烟草叶片GUS酶活性有显著的提高。在250mmol L-1NaCl情况下,pP1(-897～+343bp)启动子片段的转基因烟草的GUS酶活性比未经胁迫处理的增加18.6倍。本研究表明,SIPEAMT基因启动子pP1(-897to+343bp)区段含有基本的启动子顺式作用元件和盐诱导元件,该启动子片段可以驱动其下游基因表达,且在NaCl胁迫下高效表达。

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
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