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NMDA受体在大鼠胎肺中的表达及对大鼠胎肺发育的影响

作　者: 廖正嫦
导　师: 岳少杰
学　校: 中南大学
专　业: 儿科学
关键词: N-甲基-D-天冬氨酸 N-甲基-D-天冬氨酸受体 胎肺发育 甲状腺转录因子-1
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：观察正常大鼠孕15天至孕21天胎肺中是否有NMDA受体的表达,并通过孕15天胎肺器官培养模型,观察NMDA受体激活对大鼠胎肺发育的影响及对调节胎肺发育有重要作用的TTF-1表达的影响。方法1.孕鼠制备：200-250gSD雌性大鼠与300-350g雄鼠1:1合笼,次日晨见阴栓确定为孕0天(E0)2.胎肺组织NMDAR mRNA测定：荧光定量PCR测定孕15天至21天胎肺NMDA1, NMDA2A,NMDA2B, NMDA2C, NMDA2D, NMDA3A,NMDA3B受体mRNA的表达。3.胎肺器官培养及分组：将胎肺置于transwell板的微孔膜上(直径：0.8um),使其处于气液交界处,采用含有青霉素(100U/mL),氯霉素(100ug/mL)的无血清BGJb培养基,37℃,5%CO2条件下培养。试验分组：对照组：培养基中不加任何处理。处理组：在培养基中添加NMDA (sigma公司),终浓度为1mmol/L4.培养胎肺一般情况：每24hr胎肺大体面积变化,每48hr胎肺湿重,胎肺分支情况。5.胎肺病理学检查：上皮细胞分化情况,单位囊泡周径,单位囊泡面积,单位肺实质面积,单位囊泡面积与肺实质面积比。6. TTF-1 mRNA测定：荧光定量PCR测定对照组与处理组培养不同时间TTF-1 mRNA的表达量的变化。7.统计学分析：实验数据用均数±标准差表示,多组间比较用单因素方差分析(one-way ANOVA)及SNK-q检验,两组间比较用T检验。p<0.05认为有统计学意义。结果1.胎肺组织NMDAR表达：正常大鼠孕15天至孕21天胎肺组织存在NMDAR1, NMDAR2A, NMDAR2B, NMDAR2C, NMDAR2D, NMDAR3A, NMDAR3B表达。孕15天至孕17天胎肺以NMDAR3C表达为主,孕18天至孕20天以NMDAR2A表达为主,21天胎肺以NMDAR2D表达为主。2.胎肺培养情况：随着培养时间延长,胎肺湿重增加(p<0.05),面积增大(p<0.05),支气管分支越来越多,越分越细。3.培养胎肺HE染色：培养96hr内,随着培养时间的延长,肺上皮细胞由高柱状上皮细胞向立方上皮细胞分化,单位囊泡周径增大(p<0.01),单位囊泡面积增大(p<0.05),单位肺实质面积减小(p<0.05),囊泡面积/肺实质面积比值增大(p<0.05)4.培养胎肺TTF-1 mRNA表达变化：随着培养时间延长,TTF-1mRNA表达量增加(p<0.05)5.NMDA对培养胎肺的影响：NMDA(1mmol/L)处理组培养胎肺肺单位囊泡周径减小(p<0.05),单位囊泡面积减小(p<0.01)单位肺实质面积增多(p<0.01),囊泡面积与肺实质面积比降低(p<0.01),但胎肺面积、胎肺湿重、TTF-1 mRNA的表达量与处理组比较无统计学差异(p>0.05)结论1.成功建立了大鼠胎肺器官培养模型。2.首次观察了正常大鼠孕15天至孕21天胎肺组织存在NMDAR1, NMDAR2A, NMDAR2B, NMDAR2C, NMDAR2D, NMDAR3A, NMDAR3B mRNA的表达及其动态变化。3.首次发现NMDA受体的激活可抑制大鼠胎肺的发育,其抑制胎肺发育的分子机制与TTF-1mRNA表达无关。

全文目录


摘要  5-8
Abstract  8-11
缩略词简表  11-12
第一章 前言  12-13
第二章 材料与方法  13-20
  1.1 材料  13-15
  1.2 方法  15-19
  1.3 实验流程图  19-20
第三章 结果  20-34
  3.1 正常大鼠孕巧天-12天胎肺NMDARmRNA的动态表达  20-26
  3.2 对大鼠孕15天胎肺培养胎肺湿重、胎肺面积变化的影响  26-28
  3.3 观察NMDA对大鼠胎肺培养肺上皮细胞分化的影响及对胎肺发 育的影响  28-32
  3.4 胎肺连续培养144hrTTF-1mRNA的动态变化及NMDA对大鼠胎 肺发育TTF-1mRNA的表达的影响  32-34
第四章 讨论  34-38
  4.1 NMDA不同受体在大鼠胎肺中的动态表达  34-35
  4.2 NMDA对大鼠胎肺发育的影响  35-37
  4.3 TTF-1在胎肺的表达及对胎肺发育的影响  37-38
第五章 结论  38-39
附图  39-43
参考文献  43-48
综述  48-58
  参考文献  54-58
致谢  58

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
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