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SYK基因启动子甲基化对肝细胞侵袭力的影响

作　者: 詹远京
导　师: 刘泓基
学　校: 桂林医学院
专　业: 消化内科
关键词: Syk 甲基化肝细胞癌侵袭力
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:探讨肝癌细胞中脾酪氨酸激酶(Spleen Tyrosine Kinase,Syk)基因启动子甲基化的状态及其对肝细胞癌侵袭力的影响。通过检测Syk在人低转移肝癌细胞株(MHCC97L)、人高转移肝癌细胞株(MHCC97H)、人肝癌细胞株(HepG2)、人正常肝细胞株(L02)中Syk的表达;观察这四系细胞株中是否存在Syk基因启动子甲基化现象,探讨异常甲基化对肝细胞癌Syk表达的影响;应用去甲基化药物处理Syk基因甲基化阳性的细胞株,比较处理前后肝癌细胞的侵袭力改变情况。方法:体外培养人低转移肝癌细胞株(MHCC97L)、人高转移肝癌细胞株(MHCC97H)、人肝癌细胞株(HepG2)、人正常肝细胞株(L02),提取其mRNA,逆转录为cDNA,选取Syk基因特异性引物进行PCR扩增,观察上述细胞系中Syk的表达情况。运用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation Specific PCR,MSP)方法检测四种肝(癌)细胞株中Syk基因启动子的甲基化状态。应用甲基化转移酶抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理Syk甲基化阳性的细胞株,MSP检测处理前后Syk基因的表达变化。运用Transwell小室法检测Syk基因甲基化阳性的肝癌细胞株,比较5-Aza-CdR处理前后的穿膜细胞数,作为评价肝癌细胞体外浸润能力的指标。结果:RT-PCR检测显示L02、MHCC97L表达Syk mRNA,而MHCC97H、HepG2不表达Syk mRNA。MSP检测显示L02、MHCC97细胞Syk基因甲基化阴性,而MHCC97H、HepG2细胞Syk基因甲基化阳性。甲基化阳性的MHCC97H、HepG2细胞株经5-Aza-CdR处理后, Syk基因异常甲基化状态得到逆转,Syk基因恢复正常表达状态。Transwell小室检测结果表明5-Aza-CdR处理后,MHCC97H、HepG2细胞的浸润能力与迁移能力均显著下降(P < 0. 001)。结论:1.肝细胞癌细胞中存在Syk基因的表达缺失,Syk的表达缺失与启动子甲基化有关;2.在肝癌细胞株中,高转移潜能的肝癌细胞株易出现Syk的异常甲基化及表达缺失,Syk基因启动子甲基化状况与肝癌细胞株的侵袭力相关,表明Syk基因可抑制肝癌细胞株的体外浸润能力;3. 5-Aza-CdR等去甲基化药物可有效逆转Syk基因的甲基化状态。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
英汉缩略词对照表  8-9
前言  9-12
1 材料与方法  12-24
  1.1 实验材料与仪器  12-15
  1.2 实验方法  15-24
2 结果  24-28
  2.1 Syk 在肝（癌）细胞株中的表达  24-25
  2.2 肝（癌）细胞株中Syk 甲基化的状况  25-26
  2.3 5-Aza-CdR 对肝癌细胞体外浸润能力的影响  26-28
  2.4 5-Aza-CdR 对肝癌细胞迁移力的影响  28
3 讨论  28-31
  3.1 Syk 在肝癌细胞中的表达及意义  28-29
  3.2 Syk 甲基化对肝癌形成的影响  29-30
  3.3 Syk 对肝癌细胞浸润与迁移能力的影响  30-31
4 结论  31-33
参考文献  33-35
综述  35-44
  参考文献  40-44
攻读学位期间发表的学术论文目录  44-45
致谢  45

SYK基因启动子甲基化对肝细胞侵袭力的影响

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