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铁皮石斛组织快繁及生物反应器培养研究

作　者: 鲍腾飞
导　师: 崔永一
学　校: 浙江农林大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 铁皮石斛类原球茎组培快繁悬浮培养生物反应器培养
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

铁皮石斛是珍稀名贵的中草药,由于市场需求过大,人们对野生石斛的过度采挖,致使我国的野生石斛资源遭到严重的破坏,野生石斛属植物资源已近枯竭,为加强石斛的资源保护,建立无性系快速繁殖系统,提高培养材料的繁殖系数,实现大力发展药用石斛产业,本试验以铁皮石斛类原球茎为材料,系统地探讨了有利于铁皮石斛类原球茎生长、增殖及多糖积累的最佳培养条件,并初步探索了生物反应器类原球茎的培养技术,研究结果如下:1、通过比较MS、B5、N6、1/2MS、1/4MS五种基本培养基对铁皮石斛类原球茎的诱导、增殖、分化和试管苗壮苗生根的影响,1/2MS培养基适合于铁皮石斛类原球茎的增殖,MS培养基适合试管苗的壮苗生根。2、NAA、KT,6-BA三种生长素混合使用诱导类原球茎,通过正交分析可得,0.1mg/L KT+2 mg/L6-BA+0.5mg/LNAA的植物生长调节物质组合类原球茎诱导率最高。类原球茎的增殖,以1/2MS+1.0mg/L NAA+3%蔗糖+5%椰乳为最佳,且需要一定的光照。2mg/L BA +0.5mg/L NAA的组合最有利于类原球茎的分化。0.5mg/L IBA +0.1mg/L NAA组合最有利于试管苗的壮苗和生根。3.在液体悬浮培养条件下,最有利于铁皮石斛类原球茎的生长增殖的培养基是在pH值为6.0的1/2MS基本培养基中添加1.0mg/L NAA ,5%椰乳,含蔗糖3%,接种密度为40g/L。4.对铁皮石斛类原球茎生物反应器培养进行了研究,可得最有利于类原球茎增殖培养和多糖的积累的培养基为,1/2MS基本培养基添加1mg/L NAA、5%椰乳、3%蔗糖,pH值为6.0,接种量为40g/L,采用孔隙15μm的多孔喷头,通气量为0.10vvm。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
前言  9
第一章绪论  9-16
  1.1 铁皮石斛的生物学特性及资源分布  9-10
  1.2 石斛属植物成分分析及生理活性研究  10-11
  1.3 石斛属植物细胞学及分子生物学研究  11
  1.4 石斛属植物离体快繁的研究进展  11-13
    1.4.1 石斛属植物组织培养外植体的选择  11-12
    1.4.2 基本培养基成分对石斛属植物组织培养的影响  12
    1.4.3 植物生长调节物质对石斛属植物组织培养的影响  12-13
    1.4.4 培养环境对石斛属植物组织培养的影响  13
  1.5 石斛属植物液体悬浮培养  13-14
  1.6 生物反应器的应用  14
  1.7 研究的目的和意义  14-16
第二章铁皮石斛的组织培养  16-33
  2.1 材料和方法  16-19
    2.1.1 试验材料  16
    2.1.2 铁皮石斛的类原球茎的诱导  16-17
    2.1.3 铁皮石斛的类原球茎的增殖  17
      2.1.3.1 不同基本培养基对类原球茎增殖的影响  17
      2.1.3.2 植物生长调节物质对类原球茎增殖的影响  17
      2.1.3.3 不同碳源的处理对类原球茎增殖的影响  17
      2.1.3.4 不同有机添加物对类原球茎增殖的影响  17
    2.1.4 铁皮石斛类原球茎分化研究  17-18
      2.1.4.1 不同NAA 和6-BA 浓度组合对类原球茎分化的影响  17
      2.1.4.2 不同接种量对类原球茎分化的影响  17-18
    2.1.5 铁皮石斛试管苗生根壮苗培养  18-19
      2.1.5.1 不同基本培养基对试管苗生根壮苗培养  18
      2.1.5.2 不同IBA 与NAA 浓度组合对试管苗生根壮苗培养  18
      2.1.5.3 有机添加物对试管苗生根壮苗培养  18-19
      2.1.5.4 活性炭对试管苗生根壮苗培养  19
    2.1.6 铁皮石斛试管苗的驯化及移栽  19
  2.2 结果与分析  19-30
    2.2.1 铁皮石斛类原球茎的诱导  19-21
    2.2.2 铁皮石斛的类原球茎增殖研究  21-24
      2.2.2.1 不同基本培养基对类原球茎增殖的影响  21-22
      2.2.2.2 植物生长调节物质对类原球茎增殖的影响  22-23
      2.2.2.3 不同碳源的处理对类原球茎增殖的影响  23-24
      2.2.2.4 不同浓度有机添加物对类原球茎增殖的影响  24
    2.2.3 铁皮石斛类原球茎分化研究  24-26
      2.2.3.1 不同NAA 和6-BA 浓度组合对类原球茎分化的影响  24-25
      2.2.3.2 不同接种量对类原球茎分化的影响  25-26
    2.2.4 铁皮石斛试管苗生根壮苗研究  26-29
    2.2.5 铁皮石斛试管苗的驯化及移栽  29-30
  2.3 讨论  30-33
第三章铁皮石斛液体悬浮培养  33-39
  3.1 材料与方法  33-34
    3.1.1 无机盐浓度对液体悬浮培养类原球茎生长增殖的影响  33
    3.1.2 NAA 浓度对液体悬浮培养类原球茎生长增殖的影响  33
    3.1.3 蔗糖浓度对液体悬浮培养类原球茎生长增殖的影响  33
    3.1.4 椰乳添加量对液体悬浮培养类原球茎生长增殖的影响  33
    3.1.5 接种量对液体悬浮培养类原球茎生长增殖的影响  33
    3.1.6 不同pH 值对液体悬浮培养类原球茎生长增殖的影响  33-34
  3.2 结果与分析  34-37
    3.2.1 无机盐浓度对液体悬浮培养类原球茎生长增殖的影响  34
    3.2.2 NAA 浓度对液体悬浮培养条件下类原球茎生长增殖的影响  34-35
    3.2.3 蔗糖浓度对液体悬浮培养类原球茎生长增殖的影响  35
    3.2.4 椰乳添加量液体悬浮培养对类原球茎生长增殖的影响  35-36
    3.2.5 接种量对类原球茎生长增殖的影响  36
    3.2.6 不同pH 值对类原球茎生长增殖的影响  36-37
  3.3 讨论  37-39
第四章铁皮石斛类原球茎的生物反应器扩大培养  39-44
  4.1 材料与方法  39-40
    4.1.1 接种量对铁皮石斛类原球茎生物反应器培养的影响  39
    4.1.2 通气量对铁皮石斛类原球茎生物反应器培养的影响  39-40
    4.1.3 不同蔗糖浓度铁皮石斛类原球茎生物反应器培养的影响  40
    4.1.4 光照环境对类原球茎生物反应器培养的影响  40
  4.2 结果与分析  40-42
    4.2.1 接种量对铁皮石斛类原球茎生物反应器培养的影响  40
    4.2.2 通气量对铁皮石斛类原球茎生物反应器培养的影响  40-41
    4.2.3 不同蔗糖浓度铁皮石斛类原球茎生物反应器培养的影响  41
    4.2.4 光照环境对类原球茎生物反应器培养的影响  41-42
  4.3 讨论  42-44
第五章结论  44-45
  5.1 铁皮石斛的组织培养  44
  5.2 铁皮石斛类原球茎的悬浮培养研究  44
  5.3 铁皮石斛类原球茎的生物反应器的培养  44-45
参考文献  45-49
附录1  49-51
  试验相关仪器  49-50
  缩略词表  50-51
附录2  51-55
  附图  51-55
  致谢  55

铁皮石斛组织快繁及生物反应器培养研究

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